一种提高柠檬酸产量的重组黑曲霉菌及其制备方法与流程

文档序号:11144774阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种提高柠檬酸产量的重组黑曲霉菌,其特征在于所述重组黑曲霉菌为将黑曲霉的低亲和力葡萄糖转运蛋白LGT1基因整合到黑曲霉基因组上得到重组黑曲霉菌;所述低亲和力葡萄糖转运蛋白LGT1基因的表达受Pgas启动子调控。

2.根据权利要求1所述的重组黑曲霉菌,其特征在于所述低亲和力葡萄糖转运蛋白LGT1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的重组黑曲霉菌,其特征在于所述Pgas启动子为低pH诱导型启动子,该启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.一种低亲和力葡萄糖转运蛋白LGT1基因表达框,其特征在于所述表达框包含Pgas启动子、低亲和力葡萄糖转运蛋白LGT1基因和trp终止子,按照Pgas-LGT1-trp的顺序排布。

5.根据权利要求4所述的基因表达框,其特征在于所述Pgas启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示;所述低亲和力葡萄糖转运蛋白LGT1基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述trp终止子的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

6.根据权利要求1所述的重组黑曲霉菌,其特征在于所述重组黑曲霉菌的制备方法包括如下步骤:

(1)构建低亲和力葡萄糖转运蛋白LGT1基因表达框Pgas-LGT1-trp;

(2)构建抗性基因表达框gpdA-hph-trp;

(3)将步骤(1)和步骤(2)制得的基因表达框转化黑曲霉,经抗性筛选和PCR鉴定获得所述重组黑曲霉菌。

7.根据权利要求6所述的重组黑曲霉菌,其特征在于所述步骤(2)中所述抗性基因表达框中gpdA为启动子,该启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

8.根据权利要求6所述的重组黑曲霉菌,其特征在于所述步骤(2)中所述抗性表达框中hph基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

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