一种高效转染真核细胞的方法与流程

文档序号:12584504阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种高效转染真核细胞的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:

(1)受体细胞的培养

在转染前一天接种待转染细胞,接种密度为2×105/cm2,用含10%胎牛血清的DMEM液,37℃、5%CO2培养,待细胞占50~70%瓶底面积时,用于转染试验;

(2)转染液的制备

A液:用培养基MEM稀释1~10μg 浓度为10g/L的供体DNA,定量至100μL;

B液:将培养基MEM定量至100μL,然后吸取2~15μg的LR加入到MEM中,室温静置15分钟;

A/B复合物:将A液滴加入B液,轻轻弹下离心管壁,室温静置20min;

(3)转染

将配置好的Ca2+载体工作液加入培养好的细胞培养液中,摇匀,将所述A/B复合物缓缓加入步骤(1)所述的细胞培养液中,摇匀,37℃温箱置6~24小时,观察转染效率;其中,所述Ca2+载体工作液配置为:MEM、15mmol/L Hepes、0.168mg/ml NaHCO3 以及5μmol/L A23187。

2.如权利要求1所述的高效转染真核细胞的方法,其特征在于,在步骤(3)中,所述Ca2+载体工作液的配置包括以下步骤:取1mg A23187在室温情况下,用1.9ml DMSO或DMSO/乙醇混合液溶解为1mmol/L A23187浓缩液;将所述A23187浓缩液、MEM、Hepes、NaHCO3比例混合,得到所述Ca2+载体工作液。

3.如权利要求1所述的高效转染真核细胞的方法,其特征在于,在步骤(2)中,所述供体DNA利用去内毒素质粒大提试剂盒提取得到。

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