一种真核细胞模型的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种细胞模型的制备方法。
【背景技术】
[0002] 探索生命的起源，研究生物的进化，构建一种结构、形状和性能的模式化，更利于 明确细胞间的相互作用W及机能与结构和形态间的相互关系。运正是建立细胞模型的意义 所在。
[0003] 目前利用脂质体建立细胞模型仅模拟了原核细胞，然而原核细胞是组成原核生物 的细胞，运类细胞不具有W核膜为界的细胞核，只有拟核，进化地位较低。真核细胞是从一 种原核细胞通过自然选择和突变，逐渐的进化而来的。为了研究生命的进化过程，建立真核 细胞模型具有十分重要的意义。
【发明内容】
[0004] 本发明是要解决现有的细胞模型仅模拟了原核细胞，不满足于生命进化的研究的 问题，提供一种真核细胞模型的制备方法。
[0005] 本发明真核细胞模型的制备方法是按照W下步骤进行的：
[0006] -、制备单室憐脂泡囊：将二肉豆違酷憐脂酷胆碱和胆固醇加入到氯仿中，得到憐 脂溶液，将两片IT0玻璃电极表面分别涂覆5~7μL的憐脂溶液，待氯仿蒸干，得到两片表 面覆有憐脂溶液的ΙΤ0玻璃电极；
[0007] 将聚四氣乙締矩形框置于两片表面覆有憐脂溶液的ΙΤ0玻璃电极中间，得到电形 成装置，利用真空脂将电形成装置密封，且聚四氣乙締矩形框与两片表面覆有憐脂溶液的 ΙΤ0玻璃电极形成中间空腔，中间空腔内填充PCR缓冲溶液，在两片表面覆有憐脂溶液的 ΙΤ0玻璃电极上分别连接信号发生器，设定交流电压为3~5V，波形为正弦波，设定频率为 10~12Hz，时间控制为1~也得到单室憐脂泡囊；
[0008] 二、制备人造真核细胞模型：将PCR溶液与单室憐脂泡囊混合并静置30~35min， 得到人造真核细胞溶液；静置时单室憐脂泡囊发生了向内凹陷的过程，维持30~35min目 的就是让凹陷完全；即形成大泡囊内包含两个小泡囊的脂质体；
[0009] Ξ、PCR扩增：将含有遗传物质的人造真核细胞溶液放置到PCR仪中，进行PCR扩 增；PCR扩增后的脂质体在大泡囊内存在两个小泡囊，在小泡囊内部已含有遗传物质DNA;
[0010] 四、人造细胞分裂：将PCR扩增产物与190mM的PCR缓冲溶液混合，在渗透压的作 用下，大泡囊会各自携带两个小泡囊进行分裂，最终得到真核细胞模型。
[0011] 步骤一中所述二肉豆違酷憐脂酷胆碱与胆固醇的质量比为（7~4) : (3~1);
[0012] 步骤一所述憐脂溶液中二肉豆違酷憐脂酷胆碱的浓度为3~5mg/mL
[001引 步骤一和步骤四中PCR缓冲溶液由 200mMTris-HCl、200mMKCl、100mM(NH4)2S04和 20mMΜ拆04组成。
[0014] 步骤二中所述的单室憐脂泡囊与PCR溶液的体积比为（1~1. 5) : 1 ;
[0015] 步骤二中所述PCR溶液的具体成分如下：
[0016]
[0017] 此表格中？0?缓冲溶液由20〇1111化13-肥1、20〇11111((：1、10〇1111(畑4)25〇4和2〇1111 Μ拆〇4组成。
[0018] 步骤二中所述PCR溶液中的DNA模板可W为任何大小的单链、双链、线性、环状的 DNA。
[0019] 本发明首先W憐脂为原料用电形成方法制备液相为PCR缓冲溶液的单室憐脂泡 囊，然后加入含有DNA等遗传物质的PCR溶液，由于囊泡内外浓度差产生的渗透压使得单室 憐脂泡囊凹陷成一个双室憐脂泡囊，伴随着凹陷的进行，DNA等遗传物质进入到大泡囊内的 小泡囊，利用PCR仪对运种真核细胞模型中的遗传物质进行扩增，同时通过改变泡囊内外 渗透压诱使泡囊携带DNA进行分裂。此发明推动了对生命的起源和进化的研究。
[0020] 本发明制备出结构完整，大小均一，其中的小泡囊尺寸与人体细胞核尺寸相近的 人造真核细胞，并且在人造的细胞核中成功的进行了PCR技术和人造细胞的分裂过程，实 现了人造细胞核的功能化，在生命起源和进化的研究领域发挥作用。
【附图说明】
[0021] 图1为试验1中PCR产物的电泳结果；
[0022] 图2为试验1中大泡囊开始分裂的照片；
[0023] 图3为试验1中大泡囊分裂过程中的照片；
[0024] 图4为试验1中大泡囊分裂后的照片；
[00巧]图5为试验1最终获得的真核细胞模型照片。
【具体实施方式】
[0026] 本发明技术方案不局限于W下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的 任意组合。
【具体实施方式】 [0027] 一：本实施方式真核细胞模型的制备方法是按照W下步骤进行的：
[0028] -、制备单室憐脂泡囊：将二肉豆違酷憐脂酷胆碱和胆固醇加入到氯仿中，得到憐 脂溶液，将两片IT0玻璃电极表面分别涂覆5~7μL的憐脂溶液，待氯仿蒸干，得到两片表 面覆有憐脂溶液的ΙΤ0玻璃电极；
[0029] 将聚四氣乙締矩形框置于两片表面覆有憐脂溶液的ΙΤ0玻璃电极中间，得到电形 成装置，利用真空脂将电形成装置密封，且聚四氣乙締矩形框与两片表面覆有憐脂溶液的 ΙΤ0玻璃电极形成中间空腔，中间空腔内填充PCR缓冲溶液，在两片表面覆有憐脂溶液的 ΙΤ0玻璃电极上分别连接信号发生器，设定交流电压为3~5V，波形为正弦波，设定频率为 10~12Hz，时间控制为1~也得到单室憐脂泡囊；
[0030] 二、制备人造真核细胞模型：将PCR溶液与单室憐脂泡囊混合并静置30~35min， 得到人造真核细胞溶液；
[0031] Ξ、PCR扩增：将含有遗传物质的人造真核细胞溶液放置到PCR仪中，进行PCR扩 增；
[0032] 四、人造细胞分裂：将PCR扩增产物与190mM的PCR缓冲溶液混合，最终得到真核 细胞模型。
[0033] 本实施方式制备出了结构完整，尺寸均一的真核细胞模型，内部小泡囊的尺寸与 人体成熟细胞核的尺寸相近，极大程度的模拟了真核细胞的形貌，至关重要的是在小泡囊 中进行PCR技术，W实现小泡囊模拟细胞核的功能，对生命的起源和进化做出进一步的研 究。
【具体实施方式】 [0034] 二：本实施方式与一不同的是：步骤一中所述二肉豆 違酷憐脂酷胆碱与胆固醇的质量比为（7~4) : (3~1)。其它与一相同。
【具体实施方式】 [0035] Ξ:本实施方式与一或二不同的是：步骤一所述憐脂 溶液中二肉豆違酷憐脂酷胆碱的浓度为3~5mgAiL。其它与一或二相同。
【具体实施方式】 [0036] 四：本实施方式与一至Ξ之一不同的是：步骤一和步 骤四中口0?缓冲溶液由20〇1111化13-肥1、20〇11111((：1、10〇1111(畑4)25〇4和2〇11111拆〇4组成。 其它与一至Ξ之一相同。
【具体实施方式】 [0037] 五：本实施方式与一至四之一不同的是：步骤二中所 述的单室憐脂泡囊与PCR溶液的体积比为（1~1. 5) : 1。其它与一至四之一 相同。
【具体实施方式】 [0038] 六：本实施方式与一至五之一不同的是：
[0039] 步骤二中所述PCR溶液的具体成分如下：
[0040] 成分 |〇L. ddH>0 82 PC民缓冲溶液 50 (INTPmix 4日 上输引物 iO 下游引物 ！〇 DNA模板 10 MgS〇4 30 DNA染料缓冲溶液 250