一种回收片段化降解DNA的方法与流程

文档序号:12644670阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种回收片段化降解DNA的方法,其特征在于包括:

在降解DNA的溶液中加入羧基磁珠,使大片段DNA与羧基磁珠结合,而使小片段DNA保留于溶液中,所述大片段DNA的尺寸大于2000bp,所述小片段DNA的尺寸为200bp~2000bp;

将结合有大片段DNA的羧基磁珠与包含小片段DNA的溶液分离;

使大片段DNA与羧基磁珠分离,再对大片段DNA进行片段化处理,直至形成小片段DNA;

回收所述包含小片段DNA的溶液中的小片段DNA以及由大片段DNA经片段化处理形成的小片段DNA。

2.根据权利要求1所述的回收片段化降解DNA的方法,其特征在于包括:

(1)取降解DNA溶于水,形成降解DNA溶液;

(2)向降解DNA溶液中加入羧基磁珠,混合均匀后,在室温下孵育,使羧基磁珠与大片段DNA充分结合;

(3)利用磁场作用使羧基磁珠沉降,直至混合液澄清,再分离出羧基磁珠,并收集包含小片段DNA的澄清液;

(4)对羧基磁珠进行清洗;

(5)将羧基磁珠室温干燥后,以洗脱液进行洗脱,并在室温下放置;

(6)利用磁场作用使步骤(5)所获洗脱混合液达到澄清,再将澄清溶液分离出;

(7)将步骤(6)分离出的澄清溶液转移至片段化仪中进行片段化处理,使其中的大片段DNA被打断为小片段DNA;

(8)将步骤(7)所获的含小片段DNA的溶液与步骤(3)所获的包含小片段DNA的澄清液合并;

(9)从步骤(8)最终所获的含小片段DNA的溶液中分离出小片段DNA。

3.根据权利要求1所述的回收片段化降解DNA的方法,其特征在于:所述降解DNA的溶液中降解DNA的浓度为1μg/30uL~1μg/150uL。

4.根据权利要求2所述的回收片段化降解DNA的方法,其特征在于,步骤(2)包括:将羧基磁珠加入降解DNA的溶液中,混合均匀后在室温下孵育5min-20min,使羧基磁珠与其中的大片段DNA充分结合。

5.根据权利要求2所述的回收片段化降解DNA的方法,其特征在于,步骤(4)包括:以浓度为80v/v%的乙醇溶液对羧基磁珠进行清洗。

6.根据权利要求2所述的回收片段化降解DNA的方法,其特征在于,步骤(5)包括:将羧基磁珠在室温下干燥1min-10min,之后加入洗脱液进行洗脱。

7.根据权利要求2所述的回收片段化降解DNA的方法,其特征在于,步骤(9)包括:

将步骤(8)最终所获的含小片段DNA的溶液与磷酸盐缓冲液均匀混合后加入离心柱;

向所述离心柱中加入PE缓冲液,清洗离心柱;

将空的离心柱放置入离心机中全速离心2min,并室温晾干;

向离心柱中加入洗脱液,洗脱小片段DNA。

8.根据权利要求2、6或7中任一项所述的回收片段化降解DNA的方法,其特征在于:所述洗脱液为浓度为3mM-15mM的Tris缓冲盐溶液,其pH值为7.3-8.5。

9.根据权利要求7所述的回收片段化降解DNA的方法,其特征在于:步骤(9)中采用的洗脱温度为20℃-70℃。

10.根据权利要求7所述的回收片段化降解DNA的方法,其特征在于:步骤(9)中采用的洗脱液用量为100uL。

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