一种TaqMan‑MGB探针法检测人类ALDH2基因多态性的引物及其应用的制作方法

文档序号:12645214阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种TaqMan-MGB探针法检测人类ALDH2基因多态性的试剂盒,其特征在于,它包括如下核酸序列:

(1)扩增ALDH2基因rs671多态性位点的引物对,其核苷酸序列SEQ ID NO.:1和SEQ ID NO.:2所示;

(2)用于检测ALDH2基因rs671多态性位点的TaqMan-MGB探针,其核苷酸序列如SEQ ID NO.:3和SEQ ID NO.:4所示,其中,SEQ ID NO.:3的5’端标记FAM信号,SEQ ID NO.:4的5’端标记VIC信号;

上述引物对和荧光探针对在一次检测中共同使用。

2.一种TaqMan-MGB探针法检测人类ALDH2基因多态性的试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括:权利要求1所述的引物和探针。

3.根据权利要求2所述的TaqMan-MGB探针法检测人类ALDH2基因多态性的试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括:2×PCR反应混合液、阳性标准品。

4.根据权利要求3述的TaqMan-MGB探针法检测人类ALDH2基因多态性的试剂盒,其特征在于,所述的2×PCR反应混合液包括:Tris-HCL 10mM,引物SEQ ID NO:1~2 10μM,探针SEQ ID NO.:3和SEQ ID NO.:4 10μM,MgCl2 2mM,KCL 50mM,dNTPs 0.2mM,Taq DNA聚合酶2U/μL。

5.TaqMan-MGB探针法检测人类ALDH2基因多态性的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)提取人外周血基因组DNA;

(2)分别以提取的人外周血基因组DNA和权利要求2中的阳性标准品为模板,利用SEQ ID NO.:1~6所示的引物和探针,进行实时荧光定量PCR反应;

(3)根据检测到的荧光信号值对rs671位点进行基因型判定。

6.根据权利要求5所述的TaqMan-MGB探针法检测人类ALDH2基因多态性的方法,其特征在于,步骤(2)中,实时荧光定量PCR反应的扩增体系如下:总体积20μL,2×PCR反应混合液10μL,SEQ ID NO.:1 0.2μM,SEQ ID NO.:2 0.2μM,SEQ ID NO.:3 0.2μM,SEQ ID NO.:4 0.2μM,模板DNA 50ng。

7.根据权利要求5所述的TaqMan-MGB探针法检测人类ALDH2基因多态性的方法,其特征在于,步骤(2)中,实时荧光定量PCR反应的扩增程序为:95℃,2min;95℃,10s,60℃,45s,收集荧光,40个循环。

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