1.一种登革病毒NS5基因片段的不对称PCR扩增引物,其特征在于,该不对称PCR扩增引物为一对特异性扩增登革病毒NS5基因的10589-10754bp区域的引物,其序列为:
非限制性引物序列为:5’-GGTTAGAGGAGACCCCTCCC-3’(SEQ NO.1),
限制性引物序列为:5’-GAGACAGCAGGATCTCTGGTCT-3’(SEQ NO.2);
2.一种检测登革病毒的方法,该方法包括以下步骤:
(1)取寨卡病毒,先提取其核酸,再以所到的核酸为模板进行RT-PCR扩增,获得逆转录产物;然后,
(2)以逆转录产物为模板,采用权利要求1所述不对称PCR扩增引物扩增出登革病毒NS5基因的10589-10754bp区域的单链DNA(ssDNA);
(3)根据所述的单链DNA的序列设计出胶体金检测试纸条,该胶体金检测试纸条包括PVC支撑片、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫五部分,其中,
所述的结合垫上包被有胶体金标记的如下检测探针:
5’-AGACCAGAGATCCTGCTGTCTCAAAAAAAAAA–巯基-3’(SEQ NO.3);
所述的聚酯纤维素膜上设有检测线和控制线,其中,
所述的检测线的位置喷涂有如下捕获探针:
5’–生物素-AAACAGCATATTGACGCTGGGA-3’(SEQ NO.4);
所述的控制线的位置喷涂有如下捕获探针:
5’-TTTTTGAGACAGCAGGATCTCTGGTCT–生物素-3’(SEQ NO.5);
(4)将步骤(2)所得到的单链DNA滴于步骤(3)所述的样品垫上,补加适量4×SSC杂交缓冲液,使刚好完全浸湿结合垫;约5min后采用4×SSC杂交缓冲液清洗所述的胶体金检测试纸条以降低背景;10min内观察检测线和控制线是否显色,按以下方法进行定性判断:若检测线与控制线同时显色,结果为阳性;若检测线不显色,而控制线显色,则结果为阴性;若控制线不显色说明试纸条无效。