本发明涉及一种雷公藤红素的分离纯化方法，属于植物活性成分分离工艺技术领域。
背景技术：
雷公藤红素来源于卫矛科植物雷公藤或南蛇藤等的根皮，是一个具有多种生物活性的天然产物。雷公藤红素是治疗类风湿病雷公藤片、雷公藤多甙片等制剂的有效成分之一。现代研究表明：雷公藤红素具有很强的抗氧化和抗癌症新生血管生成作用，还有抗类风湿和杀虫作用，在脑神经保护也有突出的功效[中草药,2010,41(7):1215-1218]。雷公藤红素作为新型天然蛋白酶体抑制剂，在癌症的预防和治疗方面显示巨大的开发潜力，有望发展成为继紫杉醇之后新一代高效的抗肿瘤植物药[中国制药信息,2006,22(9):15]。我国具有丰富的雷公藤红素的植物资源，因此，开展雷公藤红素提取与分离纯化研究，获得高纯度的雷公藤红素产品，尽可能充分利用植物资源，具有重要的应用前景和实际意义，也可为新药研发及中药现代化提供一种新的途径。
雷公藤素属于五环三萜类化合物，外观形状为红色或暗红色晶体，具有一定的毒性，分子式和分子量分别c29h38o4和450.61，熔点为185-205℃。不易溶于水，溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂中，理化性质较稳定，最大吸收波长为425nm。
雷公藤红素在已经报道的植物中普遍含量较低，因此，如何提高植物中雷公藤红素的提取分离效率，充分利用有限的资源显得尤为重要。雷公藤红素的提取工艺报道较多，如传统的有机溶剂加热回流提取、超临界流体萃取及超声波提取。雷公藤红素的分离工艺主要有液滴逆流色谱法[jchromatogra,2004,1028:171-174]和硅胶柱色谱法[王宁强,沈阳药科大学硕士论文.2008；辽宁中医药大学学报,2013,15(6):48-50]。然而，传统柱层析方法难以分离出高纯度的雷公藤红素产品，且存在着溶剂和能量消耗大，工艺比较复杂，成本较高的缺点。
专利cn10163842a以低级氯代烷烃为溶剂加热回流提取，提取液经过脱脂-醇沉工艺，得到稠膏状粗提物，再用固定相为正相硅胶或反相硅胶柱分离纯化，收集洗脱液，脱溶剂干燥后得到粉末状精提物，最后用乙醇-水混合溶剂重结晶，得到较高纯度的雷公藤红素。专利cn101311186a改善了传统柱层析方法不能分离出高纯度的雷公藤红素的不足，运用氯仿超声波提取、双溶剂洗脱硅胶柱层析和混合溶剂重结晶等工艺。总体上这些分离纯化工艺，仍然存在着工艺复杂，分离效率低和成本较高的不足。因此，探索简便有效的雷公藤红素分离纯化工艺，提高雷公藤红素的分离效率，获得高纯度的雷公藤红素产品，充分利用雷公藤红素相关植物资源是非常必要的。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是：旨在提高雷公藤红素的分离纯化效率，简化分离纯化工艺，降低雷公藤红素的制备成本，获得高纯度的雷公藤红素产品。
本发明的技术方案是：一种雷公藤红素的分离纯化方法，包含以下步骤：用有机溶剂超声提取工艺获得提取物浸膏，再运用脱脂及醇提-水沉工艺对浸膏进行处理，得到雷公藤红素粗提物，用大孔树脂分离雷公藤红素粗提物，得到雷公藤红素粗品，最后用双溶剂重结晶纯化，得到高纯度的雷公藤红素。
所述的大孔树脂为ab-8大孔吸附树脂。
所述的粗提物:大孔树脂的质量比例为1:(10~50)。
所述的用体积分数为60~90的乙醇/水作为洗脱剂，洗脱液的ph值为5.5~6.5。
所述的双溶剂体系为环己烷/二氧六环或环己烷/thf，混合溶剂的体积比例为(85~98):(2~15)。
本发明的有益效果：采用大孔树脂的粗提物分离工艺，具有选择性好、分离效率高和易于规模化制备等优点；采用双溶剂重结晶纯化工艺，具有工艺简单、产品的外观与纯化高的特点。
具体实施方式
实施例1
将经充分干燥雷公藤根皮粉碎，80%以上的粉末过30-40目筛。取雷公藤根粉末200.0g，加入氯仿800ml，浸泡2h，再超声提取40min，分两次重复操作，合并提取液，蒸馏回收溶剂氯仿，并在50-60ºc下干燥，得到浸膏3.56g。
取上述浸膏4.0g加入石油醚60ml，加热回流30min，趁热滤过倾出石油醚，重复两次，得到残余物，挥发干石油醚，得到脱低极性成分提取物1.22g。然后加入50ml的95%乙醇，加热至70ºc左右溶解，再缓慢加入相同体积水，然后将大部分乙醇蒸出，置于冰水浴中冷却，产生暗红色沉积物为雷公藤红素粗提物，干燥称重为0.32g。
取上述雷公藤红素粗提物0.5g，用少量乙醇溶剂溶解，用经过预处理的ab-8大孔吸附树脂20g装柱并进行柱分离，用调ph为6.5的70%乙醇洗脱，收集rf值约为0.70的组分，浓缩干燥后，得到雷公藤红素粗品0.12g。
取上述得到的雷公藤红素粗品0.20g,选用环己烷/二氧六环体积比90:10进行重结晶，得到雷公藤红素为红色针状结晶0.182g,熔点：195~203ºc。产品经过hplc分析，含量为98.5%。
实施例2
将经充分干燥雷公藤根皮粉碎，80%以上的粉末过30-40目筛。取雷公藤根粉末200.0g，加入氯仿800ml，浸泡2h，再超声提取40min，分两次重复操作，合并提取液，蒸馏回收溶剂氯仿，并在50-60ºc下干燥，得到浸膏3.56g。
取上述浸膏4.0g加入石油醚60ml，加热回流30min，趁热滤过倾出石油醚，重复两次，得到残余物，挥发干石油醚，得到脱低极性成分提取物1.22g。然后加入50ml的95%乙醇，加热至70ºc左右溶解，再缓慢加入相同体积水，然后将大部分乙醇蒸出，置于冰水浴中冷却，产生暗红色沉积物为雷公藤红素粗提物，干燥称重为0.32g。
取上述雷公藤红素粗提物0.5g，用少量乙醇溶剂溶解，用经过预处理的ab-8大孔吸附树脂20g装柱并进行柱分离，用调ph为6.5的70%乙醇洗脱，收集rf值约为0.70的组分，浓缩干燥后，得到雷公藤红素粗品0.12g。
取上述得到的雷公藤红素粗品0.20g,选用环己烷/thf体积比95:5进行重结晶，得到雷公藤红素为红色针状结晶0.175g,熔点：195~203ºc。产品经过hplc分析，含量为98.2%。
本发明提供了一种雷公藤红素分离纯化方法，具有工艺简单，分离纯化效率高，获得纯度98.5%的雷公藤红素产品，能够满足医药及其它各种用途需要。
对比实施例1
将经充分干燥雷公藤根皮粉碎，80%以上的粉末过30-40目筛。取雷公藤根粉末200.0g，加入氯仿800ml，浸泡2h，再超声提取40min，分两次重复操作，合并提取液，蒸馏回收溶剂氯仿，并在50-60ºc下干燥，得到浸膏3.56g。
取上述浸膏4.0g加入石油醚60ml，加热回流30min，趁热滤过倾出石油醚，重复两次，得到残余物，挥发干石油醚，得到脱低极性成分提取物1.22g。然后加入50ml的95%乙醇，加热至70ºc左右溶解，再缓慢加入相同体积水，然后将大部分乙醇蒸出，置于冰水浴中冷却，产生暗红色沉积物为雷公藤红素粗提物，干燥称重为0.32g。
取上述雷公藤红素粗提物0.5g，用少量乙醇溶剂溶解，用经过预处理的ab-8大孔吸附树脂20g装柱并进行柱分离，用调ph为6.5的70%乙醇洗脱，收集rf值约为0.70的组分，浓缩干燥后，得到雷公藤红素粗品0.12g。
取上述得到的雷公藤红素粗品0.20g,选用环己烷/丙酮体积比90:10进行重结晶，得到雷公藤红素为红色针状结晶0.164g。产品经过hplc分析，含量为93.6%。
对比实施例2
将经充分干燥雷公藤根皮粉碎，80%以上的粉末过30-40目筛。取雷公藤根粉末200.0g，加入氯仿800ml，浸泡2h，再超声提取40min，分两次重复操作，合并提取液，蒸馏回收溶剂氯仿，并在50-60ºc下干燥，得到浸膏3.56g。
取上述浸膏4.0g加入石油醚60ml，加热回流30min，趁热滤过倾出石油醚，重复两次，得到残余物，挥发干石油醚，得到脱低极性成分提取物1.22g。然后加入50ml的95%乙醇，加热至70ºc左右溶解，再缓慢加入相同体积水，然后将大部分乙醇蒸出，置于冰水浴中冷却，产生暗红色沉积物为雷公藤红素粗提物，干燥称重为0.32g。
取上述雷公藤红素粗提物0.5g，用少量乙醇溶剂溶解，用经过预处理的hpd100大孔吸附树脂20g装柱并进行柱分离，用调ph为6.5的70%乙醇洗脱，收集rf值约为0.70的组分，浓缩干燥后，得到雷公藤红素粗品0.134g。
取上述得到的雷公藤红素粗品0.20g,选用环己烷/乙醇体积比90:10进行重结晶，得到雷公藤红素为红色针状结晶0.156g。产品经过hplc分析，含量为92.3%。