针对人源ADRB2基因设计的四条sgRNA的制作方法

文档序号:15469511发布日期:2018-09-18 19:57阅读:来源:国知局

技术特征:

1.针对人源ADRB2基因设计的四条sgRNA,其特征在于:过程包括登录UCSC Genome Browser Home网站检索人源ADRB2基因的CDS序列,依据sgRNA的设计原理在其外显子近5’端设计了四条sgRNA,分别命名为sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3和sgRNA4,对应的核苷酸序列如下:

sgRNA1:5’-CCTGCGTGACGTCGTGGTC-3’,

sgRNA2:5’-GTCATGTCTCTCATCGTCC-3’,

sgRNA3:5'-ATCCACTGCGATCACGCAC-3',

sgRNA4:5'-AGCCTGCTGACCAAGAATA-3'。

2.根据权利要求1所述的针对人源ADRB2基因设计的四条sgRNA,其特征在于:四条sgRNA采用头对头的方式排列;无论单独应用或是将其有序串联构成多重sgRNA,均可引导Cas9核酸内切酶切割靶基因的特定位点,从而激活细胞的DNA修复机制,导致碱基的缺失或插入,引发移码突变;最终实现对ADRB2基因的简单、快速、高效敲除。

3.根据权利要求1所述的针对人源ADRB2基因设计的四条sgRNA,其特征在于:所述四条sgRNA构建的单sgRNA及将四条sgRNA有序串联构建的多重sgRNA的切割活性均经过T7EN1酶切鉴定;多重sgRNA还通过TA克隆测序验证了其敲除效率和基因修饰的具体方式。

4.根据权利要求1所述的针对人源ADRB2基因设计的四条sgRNA,其特征在于:所述sgRNA可通过碱基互补配对原则与ADRB2基因结合,同时引导Cas9核酸酶在结合区剪切DNA双链,形成DSB缺口;在细胞对DSB进行修复的过程中引发移码突变,导致靶基因敲除。

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