一种灵活的单细胞分离器及分离培养技术的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物细胞工程领域，更加具体地，涉及一种灵活的单细胞分离器及分尚培养技术。
【背景技术】
[0002]生物研宄中，细胞是最重要的研宄载体和对象，绝大部分的细胞学研宄都需要针对细胞进行功能改造和功能研宄，为了达到研宄的准确性和功能一致性，单克隆细胞是被认为的最有效的细胞形态，可以最大可能的保证细胞群的一致性和结果的稳定可靠性，在基因领域的研宄中单克隆细胞是最常用的研宄工具。
[0003]分离单克隆细胞是生物细胞研宄中的一个必须环节，针对基因功能的研宄中，单克隆细胞的分离显得尤为重要。
[0004]现有的单克隆细胞分离技术主要有流式细胞分选和稀释，前者主要采用现代流式细胞仪进行自动单细胞分选，但是该分选技术由于加入的一些化学物质对细胞造成一些未知的影响，影响分离后的细胞生长，同时，对设备要求比较高，易染菌；稀释法主要是将细胞悬液进行10倍、100倍、1000倍的稀释后，再取微量细胞悬液放入培养板中，在显微镜下确认是单个细胞后进行培养，该方法具有速度快，成本低，操作简单的优点，但无法定位分离，对于分离出所需的目的细胞还存在困难。
【发明内容】
[0005]为了解决上述现有技术尚存在的问题，本发明提出了一种灵活的单细胞分离器及分离培养方法。
[0006]一种灵活的单细胞分离器，包括但不限于微吸管，培养瓶旋盖，皮套，锥形吸头，所述微吸管包括微吸管细端和微吸管粗端，所述微吸管粗端连接所述锥形吸头的底部，所述锥形吸头尖部顶端细长，所述皮套一端固定在所述微吸管粗端，所述皮套另一端与所述培养瓶旋盖固接，所述微吸管粗端套嵌于所述培养瓶旋盖中。
[0007]较佳地，所述微吸管粗端连在皮套一端，起到固定和存储空间的作用。
[0008]较佳地，所述微吸管细端用于细胞或者细胞团的吸取。
[0009]较佳地，所述微吸管细端同时可以在高温下经加热后，进行拉丝处理，制作出更加微细的细管。
[0010]较佳地，所述微吸管细端直径小于3毫米。
[0011]较佳地，所述培养瓶旋盖的直径可按照细胞培养瓶T25、T75、T175等的瓶口规格设计，保证所述培养瓶旋盖能在培养瓶上拧紧。
[0012]较佳地，所述培养瓶旋盖必须在使用时接到培养瓶口上，保证在以后操作步骤中培养瓶内部处于密封和无菌。
[0013]较佳地，所述皮套采用包括但不限于塑料、橡胶等材料制成。
[0014]较佳地，所述皮套具有很好的伸展和拉伸的能力，保证微吸管的前部能移动到培养瓶的大部分位置。
[0015]较佳地，所述锥形吸头为长锥形结构，所述锥形吸头底部连着微吸管粗端，所述锥形吸头尖部顶端细长，可进行极微量液体吸取。
[0016]较佳地，单细胞的挑取可在普通倒置显微镜或者荧光显微镜下操作。
[0017]较佳地，所述单细胞的挑取分为贴壁细胞和悬浮细胞的挑取，贴壁细胞可以采用物理触碰，使细胞脱落后吸到微吸管的细端；悬浮细胞的挑取可以直接在显微镜下进行，必要时，可进行一定量稀释后再挑取。
[0018]另外，本发明还提出了一种单细胞分离培养方法。
[0019]一种单细胞分离培养方法，使用培养过该细胞的旧培养液与新鲜培养液的混合液，来培养分离后的单细胞，达到细胞扩增效果。
[0020]较佳地，所述混合液中旧培养液的比例不少于5%。
[0021]本发明的基本原理是通过快速简单的制作微细管，且该微细管的实验能保证在无菌环境里使用，来进行单细胞的无菌挑取，达到快速单细胞分离的目的，从而进行单细胞得到培养，得到单克隆细胞株；针对现有分离中存在的设备要求高、无法定位分离、无菌操作要求高的特点，设计的本单细胞分离器，可以从常规培养瓶中快速的分离到目的细胞，无须将显微镜放入操作台，且可在倒置显微镜、荧光显微镜下进行准确定点定位单细胞分离，设备只需要常规的显微镜和操作台即可完成，同时本发明具有成本低，可重复利用较高的特点，非常方便在实验室中进行少量目的单细胞进行分离，从而获得目的细胞株；同时，进行对分离到的细胞进行旧培养液的培养，满足细胞微环境与多细胞群处于尽可能一直的状态，保障细胞生长增值。
[0022]本发明的有益效果，一是操作简单，迅速，条件要求低，设备要求低，成本低廉；二是可进行常规可视化情况下的操作，主要为倒置显微镜和荧光显微镜下可视操作；三是分离细胞具有目的性，可在目的细胞占比极低的情况下进行极少数细胞的单细胞分离；四是具有微量细胞液的转移能力，可进行微量细胞液转移，方便稀释后有效分离目的细胞?’五是对细胞物理和化学伤害低。
【附图说明】
[0023]图1是一种灵活的单细胞分离器的示意图。
[0024]附图解释，1、微吸管细端，2、微吸管粗端，3、培养瓶旋盖，4、皮套，5、锥形吸头。
【具体实施方式】
[0025]具体实施例1
[0026]一种灵活的单细胞分离器，包括但不限于微吸管，培养瓶旋盖(3)，皮套(4)，锥形吸头(5)，所述微吸管包括微吸管细端(I)和微吸管粗端(2)，所述微吸管粗端(2)连接所述锥形吸头(5)的底部，所述锥形吸头(5)尖部顶端细长，所述皮套(4) 一端固定在所述微吸管粗端(2)，所述皮套(4)另一端与所述培养瓶旋盖(3)固接，所述微吸管粗端(2)套嵌于所述培养瓶旋盖(3)中，所述微吸管粗端(2)连在皮套(4) 一端，起到固定和存储空间的作用，所述微吸管细端(I)用于细胞或者细胞团的吸取，所述微吸管细端(I)同时可以在高温下经加热后，进行拉丝处理，制作出更加微细的细管，所述微吸管细端(I)直径小于3毫米。所述培养瓶旋盖(3)的直径可按照细胞培养瓶T25、T75、T175等的瓶口规格设计，保证所述培养瓶旋盖(3)能在培养瓶上拧紧，所述培养瓶旋盖(3)必须在使用时接到培养瓶口上，保证在以后操作步骤中培养瓶内部处于密封和无菌。所述皮套(4)采用塑料等材料制成，所述皮套(4)具有很好的伸展和拉伸的能力，保证微吸管的前部能移动到培养瓶的大部分位置。所述锥形吸头(5)为长锥形结构，所述锥形吸头(5)底部连着微吸管粗端(2)，所述锥形吸头(5)尖部顶端细长，可进行极微量液体吸取。单细胞的挑取可在普通倒置显微镜或者荧光显微镜下操作。所述单细胞的挑取分为贴壁细胞和悬浮细胞的挑取，贴壁细胞可以采用物理触碰，使细胞脱落后吸到微吸管的细端；悬浮细胞的挑取可以直接在显微镜下进行，必要时，可进行一定量稀释后再挑取，使用培养过该细胞的旧培养液与新鲜培养液的混合液，来培养分离后的单细胞，达到细胞扩增效果，所述混合液中旧培养液的比例不少于5%。
【主权项】
1.一种灵活的单细胞分离器，其特征在于所述分离器包括但不限于微吸管，培养瓶旋盖，皮套，锥形吸头，所述微吸管包括微吸管细端和微吸管粗端，所述微吸管粗端连接所述锥形吸头的底部，所述锥形吸头尖部顶端细长，所述皮套一端固定在所述微吸管粗端，所述皮套另一端与所述培养瓶旋盖固接，所述微吸管粗端套嵌于所述培养瓶旋盖中。
2.根据权利要求1所述分离器，其特征在于所述微吸管细端同时可以在高温下经加热后，进行拉丝处理，制作出更加微细的细管。
3.根据权利要求1所述分离器，其特征在于所述微吸管细端直径小于3毫米。
4.根据权利要求1所述分离器，其特征在于所述皮套采用包括但不限于塑料、橡胶等材料制成。
5.根据权利要求1所述分离器，其特征在于所述皮套具有很好的伸展和拉伸的能力。
6.根据权利要求1所述分离器，其特征在于所述锥形吸头为长锥形结构，所述锥形吸头底部连着微吸管粗端，所述锥形吸头尖部顶端细长。
7.—种单细胞分离培养方法，其特征在于所述方法使用培养过该细胞的旧培养液与新鲜培养液的混合液，来培养、扩增分离后的单细胞。
8.根据权利要求2所述方法，其特征在于所述混合液中旧培养液的比例不少于5%。
【专利摘要】一种灵活的单细胞分离器，包括但不限于微吸管，培养瓶旋盖，皮套，锥形吸头，所述微吸管包括微吸管细端和微吸管粗端，所述微吸管粗端连接所述锥形吸头的底部，所述锥形吸头尖部顶端细长，所述皮套一端固定在所述微吸管粗端，所述皮套另一端与所述培养瓶旋盖固接，所述微吸管粗端套嵌于所述培养瓶旋盖中。另外，本发明还提出一种单细胞分离培养方法，所述方法使用培养过该细胞的旧培养液与新鲜培养液的混合液，来培养、扩增分离后的单细胞。本发明的有益效果是，操作简单，成本低廉；二是可进行常规可视化情况下的操作；三是分离细胞具有目的性；四是可进行微量细胞液转移，方便稀释后有效分离目的细胞；五是对细胞物理和化学伤害低。
【IPC分类】C12M1-24
【公开号】CN104593250
【申请号】CN201510017105
【发明人】易银沙, 张万明, 戴燕山, 朱海强, 许澎, 刘彩云, 袁炳秋, 吴小宁
【申请人】长沙赢润生物技术有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年1月6日