一株干酪乳杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一株干酪乳杆菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 干酷乳杆菌（Lactobacillus casei)属于乳杆菌属（Lactobacillus)，是革兰 氏阳性菌，不产芽孢，无鞭毛，不运动，兼性异型发酵乳糖，不液化明胶；最适生长温度为 37°C，G+C含量为45. 6%~47. 2%;菌体长短不一，两端呈方形，常成链；菌落粗糙，灰白色， 有时呈微黄色，能发酵多种糖。干酪乳杆菌常常出现在牛奶和干酪、乳制品、饲料、面团和垃 圾中。
[0003] 干酪乳杆菌作为益生菌的一种，能够耐受有机体的防御机制，其中包括口腔中的 酶、胃液中低PH值和小肠的胆汁酸等。所以干酪乳杆菌进入人体后可以在肠道内大量存 活，起到调节肠内菌群平衡、促进人体消化吸收等作用。同时，干酪乳杆菌具有高效降血压、 降胆固醇，促进细胞分裂，产生抗体免疫，增强人体免疫及预防癌症和抑制肿瘤生长等功 能；还具有缓解乳糖不耐症、过敏等益生保健作用。由于干酪乳杆菌对其宿主营养、免疫、防 病等具有显著的益生功效，越来越成为人们研宄、开发、生产的焦点。随着高血压人群的增 加，对干酪乳杆菌的研宄以及用其开发功能性乳制品具有重要意义。
[0004] 四川甘孜州藏区海拔高、气温低、全年无明显的四季之分、高寒多风雨雪等特殊生 态环境，在这些地区有丰富的牦牛乳资源，牧民长期饮用的传统酸牛奶受到当地人的喜爱。 然而，由于酸牛奶是自然发酵，所以这种酸牛奶存在着安全性和质量不稳定等问题。因此， 有必要从传统发酵酸牛奶中分离、鉴定、筛选出优良的乳酸菌发酵剂菌株模拟发酵酸牛奶 以改善其品质，为工业化生产酸牛奶提供菌株资源，为开发地域特色的乳酸菌制品奠定基 础。
[0005] 在酸奶制备中，乳杆菌的凝乳时间、酸化能力、后酸化能力、香气物质等发酵性能 对发酵乳产品的质地和风味起着至关重要的作用，因此筛选的目标干酪乳杆菌是凝乳时间 短、酸化能力强，冷藏期间后酸化能力弱，产香气物质能力强的干酪乳杆菌。吴均等，"西藏、 川西青藏高原牧区自然发酵牦牛酸奶中优良乳酸菌的筛选及鉴定"，生物工程2013年公开 了集中从发酵牦牛酸奶中分离得到了 3株干酪乳杆菌，它们的凝乳时间长，分别为390min、 410min和400min，酸化能力弱，在发酵8h时才达到92.3Γ Τ、89·66° Τ、86·92° T，产香 气能力弱，其中，产生的乙醛最高仅为30. 76 μ g/mL，产生的双乙酰在冷藏时间为36h时最 高，仅仅为1. 4 μ g/mL。
【发明内容】
[0006] 本发明提供了一种新的干酪乳杆菌及其应用。
[0007] 本发明干酪乳杆菌，它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏 的保藏号：CGMCC NO. 10226 的干酪乳杆菌 Lactobacillus casei CDSP-1。
[0008] 本发明干酷乳杆菌Lactobacillus casei CDSP-1，于2014年12月18日保藏在中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，其地址为北京市朝阳区北辰西路 1号院3号中国科学院微生物研宄所，保藏号为CGMCC NO. 10226。
[0009] 本发明还提供了前述干酪乳杆菌在发酵制备酸乳中的用途。
[0010] 酸乳，俗称酸奶，是指经乳酸菌发酵后的酸性奶制品。
[0011] 本发明制备酸乳的方法，包括如下步骤：
[0012] (1)取权利要求1所述的干酪乳杆菌，活化制备种子液；
[0013] (2)取乳，按照2%~5%的接种量接种步骤⑴制备的种子液，在温度为37°C的 条件下发酵3h左右至凝乳，即可。
[0014] 步骤⑴中，活化制备种子液的方法是：将干酪乳杆菌的冻干粉，接种于25倍体积 的乳中，活化24h，即可。
[0015] 其中，前述的乳是脱脂乳溶液，其浓度为0. 12g/ml。
[0016] 步骤⑵中，所述接种量为3 %、
[0017] 本发明干酪乳杆菌Lactobacillus casei Q3SP-1的产香能力非常强强，制备的酸 乳的双乙酰含量最高可达12. 3 μ g/mL，是现有干酪乳杆菌制备的酸乳的8. 8倍，发酵性能 优良，酸化能力强，冷藏期间后酸化能力弱，活菌数含量高，制得的酸乳色泽、气味、滋味和 组织状态均非常良好，工业应用前景好。
[0018] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0019] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】
[0020] 图1冷藏期间菌株滴定酸度的变化
[0021] 图2冷藏期间活菌数的变化
[0022] 图3冷藏期间黏度的变化
[0023] 图4冷藏期间菌株乙醛含量的变化
[0024] 图5冷藏期菌株双乙酰含量的变化
【具体实施方式】
[0025] 实施例1本发明干酪乳杆菌的鉴定特征
[0026] 1材料与方法
[0027] I. 1材料与试剂
[0028] 从藏区10户牧民家中共采集了 10份自然发酵牦牛乳。
[0029] 双乙酰、氯氧化钠、三氯乙酸、碘、亚硫酸氢钠、碳酸氢钠均为分析纯；脱脂乳（黑 龙江完达山乳业公司）
[0030] L 2培养基与仪器
[0031] MRS培养基：乳酸细菌培养基（MRS)、蛋白胨10. 0g、牛肉膏10. 0g、酵母膏5. 0g、 柠檬酸氢二铵[(NH4) 2HC6H507] 2. 0g、葡萄糖（C6H12O6 · H2O) 20. 0g、吐温 801. OmU 乙酸钠 (CH3COONa · 3Η20)5· Og、磷酸氢二钾（K2HPO4 · 3Η20)2· Og、硫酸镁（MgSO4 · 7Η20)0· 58g、硫酸 锰（MnSO4 · Η20)0· 25g、琼脂 18. Og、蒸馏水 lOOOmL，调 ρΗ6· 2 ~6· 6
[0032] I. 3 方法
[0033] I. 3. 1菌株的分离纯化
[0034] 移取Iml样品于9ml生理盐水中进行梯度稀释，取0.1 ml合适稀释度的样品稀释 液，涂布于MRS固体培养基上，置于37°C培养24h。观察菌落生长情况，挑取具有乳酸菌典型 特征的菌落，在分离培养基上反复划线培养直至镜检为纯菌株。进行革兰氏染色和H 2O2酶 实验，选择革兰氏阳性、H2O2酶阴性的菌株，接种于MRS斜面培养基上，在37°C培养24h后， 置于4°C冰箱中保藏，即得本发明菌株⑶SP-1。
[0035] L 3. 2菌株的鉴定
[0036] (1)形态特征、生理生化特征
[0037] 菌株CDSP-I在显微镜下观察，形态为短杆状，两端平齐，排列方式为短链、长链。 生理生化特征为革兰氏染色阳性（+)、接触酶（_)、硝酸盐还原（_)、明胶液化（_)、吲哚试验 (-)、h 2s试验（-)、葡萄糖发酵产气（+)、运动性试验（-)，与《乳酸菌分类鉴定及实验方法》、 《件杰细菌鉴定手册》、《常见细菌系统鉴定手册》中描述的Lactobacillus casei (干酪乳杆 菌）的生理生化结果一致。
[0038] (2)分子生物学鉴定
[0039] 为确定CDSP-I菌株的种属，分析该菌株的16S rDNA序列分析，将测定结果与 GenBank中已知序列对比：
[0040] ⑴DNA提取
[0041] 釆用生工生物DNA提取试剂盒提取单个菌株的DNA。
[0042] (2) RCR 扩增
[0043] 本试验使用PCR扩增菌株cdsp-OlDNA的16S rDNA基因目的片段，采用25 μ 1的 反应体系，通用引物 27F(5' -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'）和 1492R(5' -GGTTACCTTGTTACGA CTT-3'），见表 1。
[0044] 表1 PCR扩增体系
[0045]
【主权项】
1. 一种干酪乳杆菌，其特征在于：它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心保藏的保藏号：CGMCCNO. 10226的干酪乳杆菌LactobacilluscaseiCDSP-1。
2. 权利要求1所述干酪乳杆菌在发酵制备酸乳中的用途。
3. -种制备酸乳的方法，其特征在于：包括如下步骤： (1) 取权利要求1所述的干酪乳杆菌，活化制备种子液； (2) 取乳，按照2%~5%的接种量接种步骤（1)制备的种子液，在温度为37°C的条件 下发酵3h左右至凝乳，即可。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤（1)中，活化制备种子液的方法是： 将干酪乳杆菌的冻干粉，接种于25倍体积的乳中，活化24h，即可。
5. 根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述乳是脱脂乳溶液，其浓度为 0.12g/ml〇
6. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤⑵中，所述接种量为3%。
【专利摘要】本发明公开了一种干酪乳杆菌，它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏号：CGMCC NO.10226的干酪乳杆菌Lactobacillus casei CDSP-1。发明还公开了前述干酪乳杆菌在发酵制备酸乳中的应用以及制备方法。本发明保藏号为CGMCC NO.10226的干酪乳杆菌Lactobacillus casei CDSP-1，发酵性能优良，制备的酸乳风味佳，应用前景良好。CGMCC NO.1022620141218
【IPC分类】C12R1-245, A23C9-123, C12N1-20
【公开号】CN104726380
【申请号】CN201510145409
【发明人】毛腾霄
【申请人】成都市食品药品检验研究院
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年3月30日