断值增加（通过SynderFiltration获得的数 据，水在25°C和3. 4巴下处理），但30kDa和50kDa之间并没有明显的不同。
[0032] 图13示出了当通过超滤处理含氯化钠的乳铁蛋白溶液时，增加的膜分子量截断 值提高了纯度，直至膜的孔隙率是50kDa。结果已通过测试用具有所示孔隙率的Sartorius StediumVivacell250UF膜分离含6%的氯化钠的2mg/mL的乳铁蛋白溶液获得。
[0033] 图14示出了因通过装有传统的5kDa的膜或新型的50kDa的膜的UF7处理而导致 的乳铁蛋白纯度的增加。绘出的值是平均值，而且条表示95%置信区间。
[0034] 详述
[0035] 本发明提供了用于从乳纯化乳铁蛋白或针对乳铁蛋白富集乳的改进方法。
[0036] 本发明人已经认识到需要允许以有效的方式制备富集的乳铁蛋白的方法。
[0037] 本文中使用的与乳铁蛋白有关的术语"纯化的"或"富集的"是指存在于残余物中 的乳铁蛋白：总蛋白质的比例相对于存在于过滤步骤之前的乳中的该比例有所增加。对于 要考虑被富集或被纯化的级分而言，它应具有比过滤步骤之前的乳中高至少1、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、25、27、28 或 30、40、50、60、70、80、90、95、 96、97、98、98或99%w/w的乳铁蛋白含量。
[0038] 第一方面的方法寻求使乳铁蛋白残余物的纯度增加至可达100 %纯。
[0039] 如本文所用，术语"级分"是指乳的部分被纯化的部分。
[0040] 术语"有效的"的使用旨在表示当相较于目前使用的用于富集蛋白质的方法时经 济且快速的方法。
[0041] 本文中提及的乳包括全脂乳、脱脂乳、酪乳、乳清（如酸或乳酪或/凝乳清）或乳 清衍生物（例如乳清蛋白浓缩物或乳清分离蛋白隔离溢流物）和初乳。它还包括乳级分， 例如已经历纯化步骤如阳离子交换色谱法的级分。这样的级分包括乳碱性蛋白级分和富乳 铁蛋白级分。
[0042] 对本领域技术人员将是显而易见的是，乳可获自任何泌乳动物，例如反刍动物如 牛、绵羊、水牛、山羊和鹿，包括灵长类如人的非反刍动物以及单胃动物如猪。优选地，源自 全牛乳的脱脂乳被用在本发明的方法中。
[0043] 在第一方面的方法中使用的过滤包括膜过滤。在一个实施方案中，膜具有25kD、 30kD、35kD、40kD、45kD、50kD、55kD、60kD、65kD、70kD或 75kD的尺寸截断值。截断值优选为 30kD或更大和50kD或更小。
[0044] 过滤可以包括超滤或渗滤或两者。
[0045] 在第一方面的方法中使用的盐处理包括加入足量的盐，使乳的离子强度为至少 0. 2M(1. 1% )NaCl或等同物。在一个实施方案中，将离子强度维持在至少这个水平一段为 获得要求的乳铁蛋白纯度的增加所需的期限。该期限可以是至少10分钟、15分钟、20分钟、 30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时，4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小 时、11小时、12小时或更长，这取决于乳原料和所需纯度的增加。
[0046] 或者，在第一方面的方法中使用的盐处理包括加入足量的盐，使得乳的电导率为 至少20mS。在一个实施方案中，在整个过滤步骤期间将电导率至少维持在这个水平。
[0047] 通常，乳将具有基本低于0. 2MNaCl或等同物的离子强度或小于20mS的电导率， 因此盐处理包括加入盐以将乳的离子强度或导电率增加至所需水平。然而，在某些情况下， 例如当乳是已进行阳离子交换的级分时，乳将具有可为至少0. 2MNaCl或等同物的离子强 度或电导率将为20mS或更大。通常，对来自阳离子交换的级分进行处理以去除盐（例如用 水渗滤）。然而，根据第一方面的方法，盐处理是以便在过滤步骤期间将乳的离子强度维持 在至少0. 2M(1. 1% )NaCl或等同物或在过滤步骤期间将乳的电导率维持在至少20mS。
[0048] 如本文使用的，"电导率"是材料传导电流的能力。通常使用电导率计例如Hach Sension5测量电导率。本领域技术人员将知道合适的测量电导率的可选装置。在钠离子 浓度和电导率之间存在大致的线性关系。
[0049] 对盐处理中使用的盐没有限制，而且针对氯化钠的替代物将是本领域技术人员已 知的。例如，可以使用任何可溶性无毒缓冲液，例如氯化物、柠檬酸、磷酸、乙酸、硫酸、碳酸 氢、氢氧化物、咪唑、马来酸的可溶性钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或锂盐。还可使用合成的两性离 子缓冲液，例如Trizma、HEPES或甘氨酸。
[0050] 为了实现RNA酶和生长因子与乳铁蛋白的分离，在过滤步骤之前的乳的离子强度 必须为至少〇. 2M(1. 1% )NaCl或等同物。在一个实施方案中，通过加入1. 1%的盐、1. 5% 的盐、2%的盐、2. 5%的盐、3%的盐、3. 5%的盐、4 %的盐、4. 5%的盐、5%的盐、5. 5%的 盐、6 %的盐或更多来增加乳的离子强度。在另一个实施方案中，乳的离子强度被增加至 0.2M、0.22M、0. 24M、0. 26M、0. 28M、0. 30M、0. 32M、0. 34M、0. 36M，0. 38M、0. 40M、0. 42M、0. 44M、 0. 46M、0. 48M、0. 50M、0. 6M，0. 7M、0. 8M、0. 9M、1.0MNaCl或等同物或更多。在另一个实施 方案中，电导率是 20mS、30mS、40mS、50mS、60mS、70mS、80mS、90mS、100mS、110mS、120mS或更 大。
[0051] 在优选的实施方案中，盐处理包括在过滤步骤之前将0. 2-0. 5MNaCl或KC1加入 至乳。
[0052] 在一个实施方案中，盐处理在4-10度下进行。
[0053] 在一个实施方案中，盐处理在10-30度下进行。
[0054] 在一个实施方案中，盐处理在30-50度下进行。
[0055] 在一个实施方案中，盐处理在50-70度下进行。
[0056] 在一个实施方案中，盐处理在低于20度下进行。
[0057] 在另一个实施方案中，因为在超过50度的温度下大肠菌的形成减少，所以在50度 或更高下进行盐处理。然而，由于乳铁蛋白在大约70度变性，因此在60度或更高进行盐处 理可能会导致产率下降。
[0058] 在一个实施方案中，过滤步骤在4-10度下进行。
[0059] 在一个实施方案中，过滤步骤在10-30度下进行。
[0060] 在一个实施方案中，过滤步骤在30-50度下进行。
[0061 ] 在一个实施方案中，过滤步骤在50-70度下进行。
[0062] 在一个实施方案中，盐处理在大气压力下进行。
[0063] 在一个实施方案中，过滤步骤在每膜小于2. 5巴、更可能小于2. 0巴、更可能再小 于1. 5巴、但理想1. 0-1. 4巴的跨膜压力下进行，虽然0. 0-1. 0巴的压力也可以合意地运 行，但具有较低的跨膜通量。
[0064] "治疗（Treating) "或"治疗（treatment) "是指治疗性治疗和预防性或防范性措 施，其中目的是预防、改善、减少或减缓（减轻）或改进病状、疾病或病症。
[0065] 如本文所用的"治疗（Treating) "或"治疗（treatment) "涵盖对脊椎动物、哺乳 动物，特别是人类中的病状的任何治疗或预防。
[0066] "预防（Preventing) "、"预防（prevention) "、"预防的（preventative) " 或"预防 性的（prophylactic) "是指防止发生，或阻碍、抵御或防止包括异常或症状在内的病状、疾 病、病症或表型。需要预防的受试者可能容易形成病状。
[0067] 术语"改善（ameliorate) "或"改善（amelioration) "是指包括异常或症状在内 的病状、疾病、病症或表型的降低、减少或消除。需要治疗的受试者可能已经具有病状，或可 能容易具有病状，或可能处于待被预防的病状中。
[0068] 如本文所用的术语"维持"是指延续治疗前水平的状态。
[0069] 第二方面的乳铁蛋白可以作为药物、兽药或营养素组合物或作为食品提供。
[0070] 药物组合物是一种适于施用给人类的组合物。兽药组合物是指一种适于施用给动 物的组合物。通常这样的组合物将含有纯化的乳铁蛋白或至少组合物的所有组分将是可验 证的。
[0071] 药物或兽药组合物可包含一种或多种载体和任选的其他治疗剂。每种载体、稀释 剂、佐剂和/或赋形剂可以是"可接受的"。
[0072] "可接受的"是指其在生物学或其他方面不是