的量减少 了 8, 000kg/批次（三分之二是因UF5导致）。
[0145] 膜类型的可行性：
[0146] -螺旋膜是获得大面积的膜的相对便宜的方式，其在具有较小足迹的设备中实现 了高通量。
[0147] -PES是迅速且完全地浸湿的固有亲水膜，导致具有优异的流速和高吞吐量的快速 过滤。PES膜还是极其低的蛋白质结合，以将靶向蛋白质结合的可能性降至最低，这意味着 高产率、稳定的跨膜通量和一致的表观膜孔隙率。
[0148] MWC0的可行性：
[0149] _5kDa的膜截留了非乳铁蛋白杂质，这防止了它们返回至色谱法以及在后续的乳 铁蛋白洗脱期间污染该乳铁蛋白。因为蛋白质混合物包含多种较小的蛋白质，其中的许多 蛋白质为生长因子，所以需要较小的膜。
[0150] -氯化钠（58Da)未被5kDa的膜截留，而乳过氧化物酶（80kDa)、免疫球蛋白（150 至420kDa)和生长因子（5至17kDa)被该膜截留，为此，从柱上洗脱的低浓度（0. 1%的蛋白 质）的蛋白质可被浓缩至3%的蛋白质，在盐浓度或蛋白质损失中无相应的增加。
[0151] MF6
[0152] 类型：陶瓷管（氧化铝）MWC0:0.8ym
[0153] 品牌：Pall 型号：Membra1oxGP19
[0154] 被称为MF6的微滤设备用于：
[0155] 1.减少存在于乳铁蛋白溶液中的微生物的数量；以及
[0156] 2.去除不溶性物质。
[0157] 膜类型的可行性：
[0158] -陶瓷膜具有针对化学清洗剂的高耐受性，可被积极清洗，以确保完全去除微生 物。它们也是不会撕裂的非常强健的膜，这可允许污染材料通过该膜。
[0159] MWC0的可行性：
[0160] -减少不溶性材料（增加的透明度）和微生物污染。
[0161] -设备是0. 8ym，而不是0. 22ym，以允许蛋白质以合理的体积和固体浓度通过该 膜。由于主要原料（脱脂乳）先前已被巴氏消毒，所以过滤器并不旨在为完整的微生物去 除步骤。
[0162] UF7
[0163] 类型：螺旋缠绕聚偏氟乙烯（PVDF)MWCO:50kDa
[0164] 品牌：Synder 型号：BN4B-6338
[0165] 被称为UF7的超滤设备用于：
[0166] 1.通过减少非乳铁蛋白的蛋白质来提高乳铁蛋白纯度，以及
[0167] 2.通过去除氯化钠和残余的乳糖将蛋白质增加至> 95%的固体。
[0168] 在更广泛的乳铁蛋白制造方法内的方法可行性：
[0169] _旨在用于制造铁蛋白0B的乳铁蛋白具有高于标准乳铁蛋白的乳铁蛋白纯度。较 高的纯度通过用50kDa的膜取代历史上曾经使用的5kDa的膜获得（图14)。
[0170] 膜类型的可行性：
[0171] -螺旋膜是获得大面积的膜的相对便宜的方式，其在具有较小足迹的设备中实现 了高通量和相对短的处理时间。
[0172] -亲水性聚偏氟乙烯（PVDF)膜具有高的跨膜通量和对蛋白质的低附着力。为此， 因为很少有蛋白质污染膜孔，所以在该方法期间保持着高通量以及高产率。
[0173] MWCO的可行性：
[0174] -对于较小的膜（历史上曾经的5kDa的膜）而言，50kDa的膜是优选使用的，因为 它们可以改善非乳铁蛋白的蛋白质（RNA酶、生长因子）的传输，同时截留乳铁蛋白。增加 的非乳铁蛋白的传输导致较高的乳铁蛋白纯度（纯度平均增加1. 8%蛋白质，P< 0. 001)。 进一步的细节可以从'IncreasingLactoferrinPuritybyDiafiltrationwithSalt SolutioninanUltrafiltrationPlantFittedwith50kDaMembranes'（JR0010)中获 得。
[0175] -氯化钠（58Da)未被50kDa的膜截留，而乳铁蛋白（80kDa)被该膜截留，为此，从 柱上洗脱的低浓度（3%的蛋白质）的乳铁蛋白可被浓缩至>20%的蛋白质，在盐浓度或蛋 白质损失中无相应的增加。
[0176]-通过去除水来增加总固体，且因此将冷冻-干燥的固体吞吐量最大化。
[0177] 实施例9 :完全商业规模试验以证实乳铁蛋白的纯度可通过50kDa的UF提高
[0178] 为了实现对变化的有效性的比较，将来自色谱法的一个批次分成两半。一半通过 装有5kDa的膜的UF7在无盐渗滤下处理，而另一半通过装有50kDa的膜的UF7在盐渗滤下 处理。
[0179] 通过用与实验1和实验6中使用的那些膜相同的Synder50kDa的膜替换存在于 UF7中的5kDa的膜来修改常规商业规模的方法。商业方法中还加入了盐渗滤步骤。渗滤溶 液中使用的盐通过将150kg氯化钠加入至3000kg水来制备。
[0180] 在表1中呈现的结果表明，50kDa的UF膜和额外的氯化钠渗滤步骤可以将乳铁蛋 白纯度提高2. 4% (基于蛋白质）。最终的乳铁蛋白纯度为97. 8% (基于蛋白质），并接近 98.0% (基于蛋白质）的目标纯度。蛋白质的组成在其他方面是相似的，这表明方法没有 负面影响。
[0181] 表1.通过标准UF7方法和高纯度UF7方法制成的组合物乳铁蛋白的比较，表明粉 末除了乳铁蛋白纯度的增加之外都是相似的。
【主权项】
1. 一种用于从乳纯化乳铁蛋白的方法，所述方法包括对所述乳进行过滤以将其分离成 含有乳铁蛋白的残余物级分和含有生长因子和/或RNA酶的渗透物级分，其中，在过滤之前 和/或过滤期间对所述乳进行盐处理，使得生长因子和/或RNA酶流入所述渗透物中。
2. -种用于从乳纯化乳铁蛋白的方法，所述方法包括对所述乳进行过滤以将其分离成 含有乳铁蛋白的残余物级分和含有生长因子和/或RNA酶的渗透物级分，其中，在过滤之前 和/或过滤期间对所述乳进行能够解聚或解离任何质量的RNA酶或生长因子的盐处理，使 得生长因子和/或RNA酶流入所述渗透物中。
3. -种用于从乳纯化乳铁蛋白的方法，所述方法包括对所述乳进行膜过滤以将所述乳 分离成含有乳铁蛋白的残余物级分和含有生长因子和/或RNA酶的渗透物级分，其中，在过 滤之前和/或过滤期间对所述乳进行能够使任何RNA酶或生长因子与所述膜分离的盐处 理，使得生长因子和/或RNA酶流入所述渗透物中。
4.由权利要求1至3中任一项的方法获得的乳铁蛋白。
5.权利要求4的乳铁蛋白作为抗癌剂、抗病毒剂、抗微生物剂或抗炎剂的用途，所述 用途用于治疗包括癌症的增殖性病症，特别是涉及实体瘤的那些癌症，用于治疗恶性肿瘤 和过度增殖性疾病，用于通过促进骨生成治疗骨骼病症，用于治疗病毒或微生物感染，用于 角膜伤口治疗，用于增强免疫力，用于治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤，用于治疗败血性休克， 用于通过改善双歧数目来改善肠道健康同时减少大肠杆菌、链球菌和梭菌，用于治疗IBD， 用于提升免疫力和抗病能力，用于控制系统炎症，用于防止器官移植排斥反应和移植物抗 宿主病，用于改善孕妇和胎儿健康，用于改善神经元健康和婴儿肠道发育，用于减少尤其是 具有血铁过少症或缺铁性贫血的妇女中的妊娠并发症的可能性，如先兆子痫、早产、妊娠糖 尿病、流产、宫内胎儿死亡、早产、低出生体重、胎盘早剥和宫内生长受限，用于治疗尤其是 孕妇中的缺铁和贫血，用于预防早产儿中的新生儿败血症，用于伤口愈合，用于促进生物膜 的形成，用于治疗包括牙周炎的口腔感染，用于治疗糖尿病性溃疡，用于囊性纤维化的治 疗，用于减轻疼痛，用于治疗蛋白尿症，用于促进皮肤细胞的生长，用作辐射防护剂，用于泌 尿道感染的治疗，用于退行性关节疾病的治疗，用于糖尿病的治疗，用于呼吸系统病症的治 疗，用于降低循环胆固醇、血管炎症、动脉粥样硬化和心血管疾病，以及用于本领域技术人 员已知的乳铁蛋白的所有其他用途。
【专利摘要】本发明提供了用于从乳纯化乳铁蛋白的方法，所述方法包括对乳进行过滤以将所述乳分离成含有乳铁蛋白的残余物级分和含有生长因子和/或RNA酶的渗透物级分，其中在过滤之前和/或过滤期间对所述乳进行盐处理，使得生长因子和/或RNA酶流入渗透物中。本发明还提供了由本发明的方法获得的乳铁蛋白及其用途。
【IPC分类】A61K38-40, C07K1-34, C07K14-79
【公开号】CN104768971
【申请号】CN201380055328
【发明人】A·布朗
【申请人】墨累古尔本合作有限公司
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2013年10月8日
【公告号】CA2886892A1, EP2904006A1, WO2014056025A1, WO2014056025A8