酵液中100KDa以上的γ -聚谷氨酸降解为分子量范围为10KDa-500KDa的低分子量γ -聚谷氨酸；
[0033](3)沉淀析出:
[0034]将上述料液用盐酸调pH至1.5，静置12h，析出沉淀，板框过滤得白色粉末，并用PH1.5的纯化水洗至废水无色澄清为止；
[0035](4)沉淀重溶:
[0036]将上述处理得到的白色粉末加入纯化水，并调pH4.5，搅拌溶解，得到浓度为40%以上的溶液；
[0037](5)带式干燥:
[0038]将上述高浓度溶液进行带式干燥，加热区温度为95°C，进样速度为30L/h，履带速度为30cm/min，经粉碎后得到流动性和溶解性较高的高纯度低分子量γ -聚谷氨酸(10KDa-500KDa)。
[0039]低分子量γ -PGA收率达到85.5%，纯度95.8%。
[0040]实施例2:
[0041](I)发酵液制备:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)FRD518CGMCC N0.6772 进行发酵培养，得发酵液，具体步骤同实施例1 ;
[0042](2)低分量γ -聚谷氨酸获取:
[0043]调节发酵液pH至3.5，升温至80°C，保温6h，待温度降至约60°C，加入1.5%的活性炭脱色75min，脱色结束后，板框过滤，除菌体、活性炭及杂蛋白，得澄清无色料液；此过程将发酵液中100KDa以上的γ -聚谷氨酸降解为分子量范围为10KDa-500KDa的低分子量γ -聚谷氨酸；
[0044](3)沉淀析出:
[0045]将上述料液用盐酸调pH至2.5，静置24h，析出沉淀，板框过滤得白色粉末，并用pH2.5的纯化水洗至废水无色澄清为止；
[0046](4)沉淀重溶:
[0047]将上述处理得到的白色粉末加入纯化水，并调pH至5.5，搅拌溶解，得到浓度为40%以上的溶液；
[0048](5)带式干燥:
[0049]将上述高浓度溶液进行带式干燥，加热区温度为85°C，进样速度为25L/h，履带速度为25cm/min，经粉碎后得到流动性和溶解性较高的高纯度低分子量γ -聚谷氨酸(10KDa-500KDa)。
[0050]低分子量γ -PGA收率达到86.1 %，纯度95.8%。
[0051]实施例3:
[0052](I)发酵液制备:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)FRD518CGMCC N0.6772 进行发酵培养，得发酵液，具体步骤同实施例1 ;
[0053](2)低分量γ -聚谷氨酸获取:
[0054]调节发酵液pH至4.0，升温至85 V，保温5h，待温度降至60 V，加入2 %的活性炭脱色60min，脱色结束后，板框过滤，除菌体、活性炭及杂蛋白，得澄清无色料液；此过程将发酵液中100KDa以上的γ -聚谷氨酸降解为分子量范围为10KDa-500KDa的低分子量γ -聚谷氨酸；
[0055](3)沉淀析出:
[0056]将上述料液用盐酸调pH至3.0，静置24h，析出沉淀，板框过滤得白色粉末，并用pH3.0的纯化水洗至废水无色澄清为止；
[0057](4)沉淀重溶:
[0058]将上述处理得到的白色粉末加入纯化水，并调pH至6.5，搅拌溶解，得到浓度为40%以上的溶液；
[0059](5)带式干燥:
[0060]将上述高浓度溶液进行带式干燥，加热区温度为75°C，进样速度为20L/h，履带速度为20cm/min，经粉碎后得到流动性和溶解性较高的高纯度低分子量γ -聚谷氨酸(10KDa-500KDa)。
[0061 ] 低分子量γ -PGA收率达到85.5%，纯度95.8%。
【主权项】
1.一种制备低分子量γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，包括以下步骤: (1)发酵液制备:以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis) FRD518CGMCC N0.6772为生产菌株，发酵生产γ-聚谷氨酸，得到发酵液； (2)高温酸降解得低分量γ-聚谷氨酸:调节发酵液PH值至3.5?4.0，温度75?100°C，保温降解4-8h，得到分子量范围为10KDa-500KDa的低分子量γ -聚谷氨酸；待温度降至降温至0-60°C，加入活性炭脱色0-2h，脱色结束后，板框过滤，除菌体、活性炭及杂蛋白，得澄清无色料液； (3)沉淀析出:料液用盐酸调pH至1.5-3.0，静置12-24h，析出沉淀，板框过滤得白色粉末，并用PH1.5-3.0的纯化水洗至废水无色澄清为止； (4)沉淀重溶:将经步骤(3)处理得到的白色粉末加入纯化水，并调pH4.5-6.5，搅拌溶解，得到浓度为40%以上的溶液； (5)带式干燥:将经步骤(4)处理得到的高浓度水溶液经过带式干燥、粉碎得到低分子量Y-聚谷氨酸成品。
2.如权利要求1所述的一种制备低分子量γ-聚谷氨酸的方法，其特征是， a.种子培养 将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)FRD518CGMCC N0.6772接种于装有种子培养基的三角瓶中，于35?37.5°C, 180?220r/min摇床震荡培养16_32h，得到种子液； b.发酵培养 将步骤(I)的种子液接种于发酵培养基中，接种量为2?3%，于35?37.5°C通气搅拌培养45?50h，得发酵液。
3.如权利要求2所述的一种制备低分子量γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述种子培养基的组分及含量为:葡萄糖5?10g/L，酵母提取物3?5g/L，硫酸铵2?10g/L，谷氨酸钠 5 ?10g/L，硫酸镁 0.2 ?2g/L，pH 7.2 ?7.5，115°C灭菌 20min。
4.如权利要求2所述的一种制备低分子量γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述发酵培养基的组分及含量为:蔗糖、葡萄糖、甘油、柠檬酸中任一种或至少两种的混合物30?150g/L，蛋白胨5?30g/L，酵母提取物5?30g/L，硫酸铵5?20g/L，谷氨酸钠30?10g/L，硫酸镁 0.2 ?2g/L，磷酸氢二钾 2 ?10g/L，pH 7.2 ?7.5，121°C灭菌 20min。
5.如权利要求1-4中任意一项所述的一种制备低分子量γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述步骤(2)中，活性炭用量为发酵液重量的1%?2%，室温搅拌60?90min。
6.如权利要求1-4中任意一项所述的一种制备低分子量γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述步骤(5)带式干燥工艺条件为:加热区温度为75?95°C，进样速度为20?30L/h，履带速度为20?30cm/min。
【专利摘要】本发明公开了一种制备低分子量γ-聚谷氨酸的方法。它首先调节发酵液pH值至3.5～4.0，温度75～100℃，保温降解4-8h，得到分子量范围为10KDa-500KDa的低分子量γ-聚谷氨酸；待温度降至降温至0-60℃，加入活性炭脱色、板框过滤，除菌体、活性炭及杂蛋白，得澄清无色料液；料液用盐酸调pH至1.5-3.0，静置12-24h，析出沉淀；将白色粉末加入纯化水，并调pH4.5-6.5，搅拌溶解，得到浓度为40％以上的溶液；然后经过带式干燥、粉碎得到低分子量γ-聚谷氨酸成品。本发明制备的低分子量γ-PGA收率达到85％以上，纯度达到95％以上，提高了产品质量。
【IPC分类】C12P13-02, C12R1-125
【公开号】CN104805143
【申请号】CN201510191530
【发明人】马双双, 苏移山, 张林军, 朱云峰, 李珍爱, 宗工理, 刘英梅, 赵文刚
【申请人】山东福瑞达生物科技有限公司
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年4月21日