83(2) ;435-445(1994))。此外，其显示了测量抗体依赖性细胞的细胞 毒性（ADCC)的测定中的明显活性。RITUXAN?已经显示具有在胸巧结合测定中的抗增 生活性和直接诱导程序性细胞死亡的有限能力，而CD20抗体则没有显示（Maloneyet.al， Blood88(10) ;637a(1996))。
[0017] 抗体糖基化
[0018] 寡糖成分可W显著地影响与治疗性糖蛋白的功效有关的特性，包括物理稳定性， 对蛋白酶攻击的抗性，与免疫系统的相互作用，药物代谢动力学，和特异性生物活性。该 些特性可W不仅依赖于寡糖的存在或缺乏，还依赖于寡糖的特异性结构。可W在寡糖结构 和糖蛋白功能之间进行一些总结。例如，某些寡糖结构通过与特异性糖结合蛋白相互作 用介导糖蛋白从血流中快速清除，而其它的可W被抗体结合并且触发不需要的免疫反应。 (Jenkins et 31.，化1:脚6 Biotechnol.14:975-81(1996))。
[0019] 哺乳动物细胞是用于产生治疗性糖蛋白的优选宿主，由于它们具有W对于人 应用的最相容的形式使蛋白质糖基化的能力。（Cummingetal.，Glycobiology1; 115-30(1991)Jenkinsetal.，化UireBiotechnol. 14:975-81(1996))。细菌极少使蛋 白质糖基化，并且类似的其它类型的常见宿主，诸如酵母，丝状真菌，昆虫和植物细胞，产生 糖基化模式，所述糖基化模式与从血流中快速清除，不理想的免疫相互作用有关，并且在一 些特别的情形中，减少生物学活性。在哺乳动物细胞中，中国仓鼠卵巢（CH0)细胞是过去 的20年间最常用的细胞。除了给出适合的糖基化模式之外，该些细胞容许持续的产生遗传 稳定性，高生产性的克隆细胞系。使用无血清培养基，它们可W在简单生物反应器中被培 养到高密度，并且容许开发安全和可再现的生物工艺。其它常用的动物细胞包括幼仓鼠肾 炬HK)细胞，NS0-和SP2/0-小鼠骨髓瘤细胞。最近，还已经测试了来自转基因动物的产物。 (Jenkinset31.，化1:脚6 Biotechnol. 14:975-81(1996))。
[0020] 所有的抗体在重链恒定区的保守区域包含糖结构，其中每种同种型都具有N-连 接的糖结构的独特阵列，其可变地影响蛋白质排列，分泌或功能活性。（Wri曲t，A.，和 Morrison,S.L.，TrendsBiotech. 15 ;26-32 (1997))。连接的N-连接糖的结构取决于加 工的程度而相当大地变化，并且可W包括高-甘露糖，多支链W及双触角的复合物寡糖 (Wri曲t，A.，和Morrison,S.L.，TrendsBiotech. 15 ;26-32 (1997))。典型地，存在在特定 糖基化位点连接的核屯、寡糖结构的不均匀加工从而使均一的单克隆抗体作为多种糖形存 在。类似地，已经显示在抗体糖基化中的主要不同发生在不同细胞系之间，并且在不同培 养条件下，甚至观察到对于给定细胞系的微小差异。（Lifely，M.R.etal.，Glycobiology 5巧）；813-22(1995))。
[0021] 获得潜能的大的增加，同时维持简单的生产过程并潜在地避免明显的，不理想的 副作用的一种方式是通过改造它们的寡糖成分增加单克隆抗体的天然的、细胞介导的效 应子功旨良，如在Um;讯U.，P.etal.，NatureBiotechnol. 17 ;176-180(1999)和美国专利 号6, 602, 684中所述，将它们全部内容并入作为参考。IgGl型抗体，在癌症的免疫疗法中 最常用的抗体是在每个C肥结构域的Asn297具有保守N-连接糖基化位点的糖蛋白。与 Asn297连接的两个复合双触角寡糖隐藏在C肥结构域之间，形成了与多肤主链的广泛接 触，并且它们的存在对于抗体介导效应子功能诸如抗体依赖性细胞的细胞毒性（ADCC)是 必要的。（Lifely，M.R.，etal.，Glycobiolog巧；813-822 (1995) ;Jefferis，R.，etal.，ImmunolRev. 163 ;59-76(1998) ;Wright，A.andMorrison，S.L.，TrendsBiotechnol. 15 ； 26-32(1997))。
[0022] 本发明者在前面显示了Ml，4)-N-己酷葡糖胺转移酶III("GnTIII")，其是催化 等分寡糖的形成的糖基转移酶，在中国仓鼠卵巢（CH0)细胞中的过量表达，显著增加了由 改造的CH0细胞产生的抗-成神经细胞瘤嵌合单克隆抗体（chCE7)的体外ADCC活性。（见 Urn加a,P.etal.，化UireBiotechnol. 17:176-180(1999);和国际公开号W0 99/5似42， 将其全部内容并入作为参考）。抗体chCE7属于未缀合的mAbs的大类，其具有高肿瘤亲和 性和特异性，但是当在缺乏GnTIII酶的标准工业化细胞系中生产时，潜能过低而无法进行 临床应用（Umana，P.，etal.，化1:山"6Biotechnol. 17 ; 176-180 (1999))。该研究首先显不 ADCC活性的大量增加可W通过将产生抗体的细胞改变为表达GnTIII而获得，其也导致了 恒定区（Fc)-关联的，等分的寡糖的比例增加到在天然存在的抗体中发现水平W上，所述 寡糖包括等分的，非岩藻糖基化的寡糖。
[0023] 仍旧存在对于祀向CD20抗原W治疗灵长类动物中的B细胞淋己瘤的增加的治疗 性方法的需要，所述灵长类动物包括，但不限于，人。
[0024] 发明简述
[00巧]认识到抗原结合分子（ABMs)的巨大治疗潜能，本发明人开发了生产该些ABMs的 方法，所述ABMs具有鼠B-Lyl抗体的结合特异性并且已经进行了糖改造（glycoengineer) W增加化受体结合亲和性和效应子功能。特别地，该方法包括产生重组的，嵌合抗体或其 嵌合片段。该些ABMs的功效还通过改变抗体化区域的糖基化模式而增加。
[0026] 因此，在一方面，本发明设及分离的多核巧酸，其包括；(a)选自由SEQIDNO. ;5， SEQIDNO. ;6 和SEQIDNO. ;7.(CDRsVh-1)组成的组的序列；化）选自由SEQIDNO. ;21， SEQIDNO. ;22 和沈QIDNO. ;23.(CDRsVh_2)和沈QIDN0;24 组成的组的序列。在另一 个方面，本发明设及分离的多核巧酸，其包括；SEQIDNO. ;8，SEQIDNO. ;9和SEQIDNO.; 10.(CDRsV^)。在一个实施方案中，该些多核巧酸的任一个编码融合的多肤。
[0027] 在另一个方面，本发明设及包括SEQIDNo. ;2的分离的多核巧酸。在另一个方 面，本发明设及包括SEQIDNo. ;4的分离的多核巧酸。在又一个方面，本发明设及分离的 多核巧酸，其包括选自由SEQIDNo;29;SEQIDNo;31;SEQIDNo;33;SEQIDNo;35;SEQ IDNo;37 ;沈QIDNo;39 ;沈QIDNo;41 ;沈QIDNo ;43 ;沈QIDNo;45 ;沈QIDNo ;47 ; 沈QIDNo;49 ;沈QIDNo;51 ;沈QIDNo;53 ;沈QIDNo;55 ;沈QIDNo ;57 ;沈QIDNo ; 59;SEQIDNo;61 ;沈QIDNo;63;SEQIDNo;65 ;沈QIDNo;67 ;沈QIDNo;69 ;和沈Q IDNo;71组成的组的序列。在另一个方面，本发明设及包括SEQIDNo. ;75的分离的多核 巧酸。在一个实施方案中，该些多核巧酸编码融合的多肤。
[0028] 本发明还设及包括与SEQIDNO;2具有至少80%同一性的序列的分离的多核巧 酸，其中所述分离的多核巧酸编码融合的多肤。在另一个方面，本发明设及包括与SEQID NO;4具有至少80%同一性的序列的分离的多核巧酸，其中所述分离的多核巧酸编码融合 的多肤。本发明还设及包括与选目由SEQIDNo;29;SEQIDNo;31;SEQIDNo;33;SEQID No;35 ;沈QIDNo ;37 ;沈QIDNo;39 ;沈QIDNo;41 ;沈QIDNo ;43 ;沈QIDNo;45 ;沈Q IDNo;47 ;沈QIDNo;49 ;沈QIDNo;51 ;沈QIDNo ;53 ;沈QIDNo;55 ;沈QIDNo ;57 ; 沈QIDNo;59 ;沈QIDNo;61 ;沈QIDNo;63 ;沈QIDNo;65 ;沈QIDNo;67 ;沈QIDNo; 69;和SEQIDNo;71组成的组的序列具有至少80%同一性的序列的分离的多核巧酸，其中 所述分离的多核巧酸编码融合的多肤。在另一个方面，本发明设及包括与SEQIDNO;75具 有至少80%同一性的序列的分离的多核巧酸，其中所述分离的多核巧酸编码融合的多肤。
[0029] 本发明还设及包括SEQIDNO;11(整个重链）的多核巧酸，或与SEQIDNO; 11具 有80%，85%，90%，95%或99%同一性的多核巧酸。本发明还设及包括SEQIDN0;12(整 个轻链）的多核巧酸，或与SEQIDN0;12具有80%，85%，90%，95%或99%同一性的多核 巧酸。
[0030] 本发明还设及编码具有SEQIDNo. ;1的序列的嵌合多肤的分离的多核巧酸。在 一个实施方案中，多核巧酸包括编码具有SEQIDNo. ;1的序列的多肤的序列；和来自除了 小鼠之外的物种的序列，所述序列编码具有抗体化区域序列的多肤，或其片段。本发明还 设及编码具有选自由SEQIDNo;30;SEQIDNo;32;SEQIDNo;34;SEQIDNo;36;SEQID No;38 ;沈QIDNo;40 ;沈QIDNo;42 ;沈QIDNo;44 ;沈QIDNo ;46 ;沈QIDNo ;48 ;沈Q IDNo;50 ;沈QIDNo;52 ;沈QIDNo;54 ;沈QIDNo ;56 ;沈QIDNo;58 ;沈QIDNo;60 ; 沈QIDNo;62 ;沈QIDNo;64 ;沈QIDNo;66 ;沈QIDNo;68 ;沈QIDNo;70 ;和沈QID No;72组成的组的序列的嵌合多肤的分离的多核巧酸。在一个实施方案中，多核巧酸包括 编码具有选自由SEQIDNo;30;SEQIDNo;32;SEQIDNo;34;SEQIDNo;36;SEQIDNo; 38;SEQIDNo ;40 ;沈QIDNo ;42 ;沈QIDNo ;44 ;沈QIDNo ;46 ;沈QIDNo ;48 ;沈QID No;50 ;沈QIDNo;52 ;沈QIDNo;54 ;沈QIDNo;56 ;沈QIDNo ;58 ;沈QIDNo ;60 ;沈Q IDNo;62;SEQIDNo;64;SEQIDNo;66;SEQIDNo;68;SEQIDNo;70 ;和沈QIDNo;72 组成的组的序列的多肤的序列；和来自除了小鼠之外的物种的序列，所述序列编码具有抗 体化区域序列的多肤，或其片段。
[0031] 在另一个方面中，本发明设及编码具有SEQIDNo. ;3的序列的嵌合多肤的分离的 多核巧酸。在一个实施方案中，多核巧酸包括编码具有SEQIDNo. ;3的序列的多肤的序 列讯来自除小鼠外的物种的序列，所述序列编码具有抗体化区域的序列的多肤，或其片 段。在另一个方面中，本发明设及编码具有SEQIDNo. ;76的序列的嵌合多肤的分离的多 核巧酸。在一个实施方案中，多核巧酸包括编码具有SEQIDNo. ;76的序列的多肤的序列； 和来自除了小鼠之外的物种的序列，所述序列编码具有抗体Fc区域的序列的多肤，或其片 段。
[0032] 本发明还设及分离的多核巧酸，其包括一段序列，所述序列编码具有鼠B-Lyl抗 体的Vh区域的多肤，或其功能变体，和一段序列，所述序列来自除小鼠之外的物种，编码具 有抗体化区域序列的多肤，或其片段。在另一个方面，本发明设及分离的多核巧酸，其包括 一段序列，所述序列编码具有鼠B-Lyl抗体的￥^区域的多肤，或其功能变体，和一段序列， 所述序列来自除小鼠之外物种，编码具有抗体化区域的序列的多肤，或其片段。
[0033] 本发明还设及包括上述分离的多核巧酸的任一种的表达载体，并且设及包括该样 的表达载体的宿主细胞。在另一个方面，本发明设及包括上述分离的多核巧酸的任一种的 宿主细胞。
[0034] 在一个方面，本发明设及分离的多肤，其包括；(a)选自由SEQIDNO. ;15，SEQID NO. ;16 和SEQIDNO.