制备团聚的微生物培养基及其组合物的方法

制备团聚的微生物培养基及其组合物的方法
【专利说明】制备团聚的微生物培养基及其组合物的方法
[000。相关申请的香叉引用
[0002] 本申请要求在2012年8月7日提交的美国临时专利申请61/680, 449和在2013 年3月7日提交的美国临时专利申请61/773, 852的权益，所述临时专利申请全文W引用方 式并入本文。
【背景技术】
[0003] 已使用营养培养基制剂培养包括动物、植物和微生物细胞的多个细胞类型。在培 养基中培养的细胞，代谢可用的营养物质并且产生有用的生物物质，诸如单克隆抗体、激 素、生长因子、病毒等。此类产物具有治疗应用并且随着重组DNA技术的出现，细胞可被工 程改造W产生大量的该些产物。因此，体外培养细胞的能力不仅对细胞生理学的研究是重 要的，而且对原本可能不能通过成本有效的手段获得的有用物质的生产是必要的。
[0004] 微生物培养基的典型组分可包括蛋白质水解产物、无机盐、维生素、痕量金属和碳 水化合物，所述物质的类型和量可根据所给定的微生物菌种的特定要求而变化。因为该些 组分趋于在脱水形式时更加稳定，所W它们经常提供为干燥的粉状制剂。将粉状制剂添加 到水中，并且任选地，在使用前灭菌。
[0005] 通常W液体形式或W粉状形式生产培养基。该些形式中的每个都具有特定的优点 和缺点。
[0006] 例如，液体培养基具有的优点在于其W即用型形式被提供（除非必须用营养物质 或其它组分补充），并且已针对特定细胞类型对制剂进行优化。然而，液体培养基具有的缺 点在于它们可能需要添加补充剂（例如，维生素或辅因子W及抗生素）W在培养特定微生 物时性能最佳。此外，大多数液体培养基需要一些类型的灭菌（例如高压灭菌、过滤），该可 为耗时和/或昂贵的过程。
[0007] 为了克服一些缺点，可W浓缩形式制备液体培养基；可在使用之前将浓缩物稀释 至工作浓度。相比于使用标准培养基，此方法提供了制备更大并且可变的批量大小的能力， 并且浓缩的培养基制剂或其组分通常具有更长的保质期。美国专利5, 474, 931设及培养基 浓缩技术并且全文W引用方式并入本文。然而，除了该些优点，浓缩的液体培养基仍具有需 要添加补充剂的缺点，并且经济地灭菌可能是困难的。
[000引作为液体培养基的替代形式，通常使用粉状培养基。此方法具有的优点在于可生 产较大的批量大小，粉状培养基通常具有比液体培养基更长的保质期，并且在配制后，可通 过照射（例如，丫或紫外线照射）或环氧己烧渗透将培养基灭菌。但是，粉状培养基具有 若干缺点。例如，在冻干时，粉状培养基的一些组分变得不溶解或聚集，使得再溶解是困难 或不可能的。此外，粉状培养基通常包含细尘颗粒，该可使得它们尤其难W在没有一些材料 损耗的情况下转移和/或复水，并且该还可使得在一些环境中使用它们是不切实际的。
[0009] 尽管在可再水化的培养基中取得了进展，但仍存在对快速溶解营养复合的稳定干 燥粉状营养培养基和培养基补充剂的需要，所述培养基和培养基补充剂可W可变的大批量 制备，并且可适于灭菌。

【发明内容】

[0010] 本公开一般设及用于促进微生物（例如，细菌、酵母、霉菌）生长的营养培养基。具 体地，本公开提供团聚一种或多种粉状营养组分W产生干燥的团聚营养培养基的方法。该 方法包括工艺条件，所述工艺条件提供具有所选择的化学组成、尺寸、密度、水含量或前述 特性中任何两种或更多种的组合的团聚颗粒。在另一方面，本公开还提供一种包含根据本 文所公开的任何方法制备的干燥的团聚营养培养基的组合物。在另一方面，本公开提供了 包含本文所公开的任何干燥团聚营养组合物的制品和试剂盒。
[0011] 有利地，本公开的组合物具有有利于通过含水溶剂润湿颗粒表面的化学组成。更 有利地，本公开的组合物具有经过选择W有利于颗粒浸没在含水溶剂中的密度（例如，堆 密度）。甚至更有利地，本公开的干燥团聚的营养培养基具有经过选择W有利于颗粒快速溶 解于含水溶剂中的粒度分布。
[0012] 在一个方面，本公开提供一种制备可流动的团聚营养培养基的方法。该方法可包 括通过将粉状营养物质放置到流化床型团聚腔室中，使流化气体流过腔室并且在团聚腔室 中使粉状营养物质与团聚液体的气溶胶喷雾接触来形成营养培养基组合物；W及从腔室中 收集组合物；其中组合物包含团聚的营养培养基颗粒群体和任选地非团聚的粉状营养物 质；其中群体包含至少约30重量百分比的具有约250-400微米的有效粒径的团聚营养物质 颗粒。粉状营养物质包含促进微生物生长的营养组分。在该方法的任何实施例中，群体中 至少约70重量百分比的颗粒可具有约105-841微米的有效粒径。在W上实施例的任一个 中，群体中少于10重量百分比的颗粒可具有约105微米或更小的有效粒径。
[0013] 在W上实施例的任一个中，该方法还可包括分离团聚营养培养基颗粒的亚群，该 亚群具有预定的有效粒径。在一些实施例中，分离亚群可包括分离具有约149微米至约841 微米的有效粒径的亚群。在W上实施例的任一个中，团聚液体可包含具有粘结剂和/或促 进溶解于其中的微生物的生长的营养物质的溶剂。在W上实施例的任一个中，放置粉状营 养物质可包括放置预定质量的粉状营养物质。在W上实施例的任一个中，使粉状营养物质 与团聚液体的气溶胶喷雾接触可包括使粉状营养物质与预定体积的团聚液体接触。在W上 实施例的任一个中，团聚营养培养基颗粒的群体可具有约5. 5重量百分比或更少的平均水 含量。
[0014] 在W上实施例的任一个中，团聚营养培养基颗粒的群体可具有约0. 2至约0. 5克 /立方厘米的松散的堆密度。在W上实施例的任一个中，一种或多种粉状营养物质可包含 选自蛋白质水解产物、碳水化合物、盐W及上述粉状营养物质中任何两种或更多种的混合 物的营养物质。在W上实施例的任一个中，该方法还可包括使干燥团聚的营养培养基经 受减少干燥团聚的营养培养基中活微生物数目的处理。在一些实施例中，使干燥团聚的 营养培养基经受减少活微生物数目的处理可包括将干燥团聚的营养培养基暴露于电离福 射或环氧己烧蒸气。在W上实施例的任一个中，粉状营养物质可选自；再水化时形成缓冲 蛋白腺水培养基的粉末的混合物；再水化时形成膜酪腺大豆液体培养基（trypticasesoy broth)的粉末的混合物；W及再水化时形成乳糖液体培养基的粉末的混合物；再水化时形 成UVM改良的李斯特氏菌属富集液体培养基（UVMmodifiedListeriaenrichmentbroth) 的粉末的混合物；再水化时形成李斯特氏菌属富集液体培养基（ListeriaEnrichment broth)的粉末的混合物；再水化时形成膜酪腺大豆酵母提取物液体培养基（Trypticase soyyeastextractbroth)的粉末的混合物；再水化时形成氯化儀孔雀绿富集液体培养基 (Ra卵aport-Vassiliadisenrichmentbroth)的粉末的混合物；再水化时形成氯化儀孔雀 绿R10液体培养基（Ra卵aport-VassiliadisRlObroth)的粉末的混合物；再水化时形成 亚砸酸盐-脱氨酸液体培养基（Selenite-切Stinebroth)的粉末的混合物；再水化时形 成EC液体培养基巧Cbroth)的粉末的混合物；再水化时形成营养液体培养基（Nutrient broth)的粉末的混合物；再水化时形成Letheen液体培养基（Letheenbroth)的粉末的 混合物；再水化时形成Dey/E：ngl巧中和液体培养基值巧/EngleyNeutralizingbroth) 的粉末的混合物；再水化时形成中和液体培养基（Neutralizingbroth)的粉末的混合 物；再水化时形成亚砸酸盐液体培养基（Selenitebroth)的粉末的混合物；再水化时形 成脑屯、浸萃液体培养基炬rain化artIn化sionbroth)的粉末的混合物；再水化时形成 半强度Demi-Fraser液体培养基化alf-strengthDemi-Fraserbroth)的粉末的混合物； 再水化时形成化aser液体培养基（prasierbroth)的粉末的混合物；W及再水化时形成 Demi-Fraser液体培养基值emi-Fraserbroth)的粉末的混合物。
[0015] 在另一方面，本公开提供了一种组合物。该组合物可包含通过W上方法中的任一 个生产的可流动的干燥团聚营养培养基。在组合物的任何实施例中，指定质量的干燥团聚 营养培养基比相等质量的由其制备团聚营养培养基的粉状营养物质在含水溶剂中溶解得 更快。
[0016] 在另一方面，本公开提供一种组合物。该组合物可包含团聚的营养培养基，所述培 养基包含当与含水介质混合时形成促进微生物生长的混合物的团聚颗粒，其中群体中至少 约30重量百分比的颗粒具有约250-400微米的有效粒径，其中堆颗粒密度为约0. 2至约 0. 5克/立方厘米。在任何实施例中，群体中至少约70重量百分比的颗粒可具有约105-841 微米的有效直径。
[0017] 在组合物的W上实施例的任一个中，团聚的营养培养基可包含粉状营养物质，其 中粉状营养物质选自：再水化时形成缓冲蛋白腺水培养基的粉末的混合物；再水化时形成 膜酪腺大豆液体培养基的粉末的混合物；W及再水化时形成乳糖液体培养基的粉末的混合 物；再水化时形成UVM改良的李斯特氏菌属富集液体培养基的粉末的混合物；再水化时形 成缓冲李斯特氏菌属富集液体培养基的粉末的混合物；再水化时形成膜酪腺大豆酵母提取 物液体培养基的粉末的混合物；再水化时形成氯化儀孔雀绿富集液体培养基的粉末的混 合物；再水化时形成氯化儀孔雀绿R10液体培养基的粉末的混合物；再水化时形成亚砸酸 盐-脱氨酸液体培养基的粉末的混合物；再水化时形成EC液体培养基的粉末的混合物；再 水化时形成营养液体培养基的粉末的混合物；再水化时形成Letheen液体培养基的粉末的 混合物；再水化时形成Dey/化gley中和液体培养基的粉末的混合物；再水化时形成中和液 体培养基的粉末的混合物；再水化时形成亚砸酸盐液体培养基的粉末的混合物；再水化时 形成脑屯、浸萃液体培养基的粉末的混合物；再水化时形成半强度Demi-Fraser液体培养基 的粉末的混合物；再水化时形成化aser液体培养基的粉末的混合物；W及再水化时形成 Demi-Fraser液体培养基的粉末的混合物。
[0018] 在另一方面，本公开提供了一种包含W上实施例的任一个的组合物的胶囊、片剂 或小袋。
[0019] 在另一方面，本发明提供一种试剂盒。该试剂盒可包括W上实施例中的任一个的 胶囊、片剂、小袋和/或组合物。在试剂盒的任何实施例中，组合物可设置在包含预定质量 的干燥团聚的营养培养基的包装中，其中预定质量经过选择W与9. 9血、10血、90血、99血、 100mL、225mL、1.化或3. 37化的含水稀释剂混合W产生能够促进微生物生长的复水的培养 基。在W上实施例的任一个中，试剂盒还可包括选自袋、瓶和样品采集装置的制品。在W上 实施例的任一个中，试剂盒还可包含选择剂/或指示试剂。
[0020] 在另一方面，本公开提供一种薄膜培养装置。薄膜培养装置可包括具有第一主表 面和第二主表面的自支承防水基材；设置在第一主表面的至少一部分上的粘合剂层；包含 W上实施例中任一个的组合物的涂层，所述组合物设置在粘合剂层的至少一部分上；W及 被定位用于与营养培养基流体接触的干燥的冷水可溶性胶凝剂。在薄膜培养装置的W上实