一株耐盐多环芳烃降解菌Tzymx及其在海洋污染环境中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于环境工程和微生物工程技术领域，尤其涉及一株耐盐多环芳烃的降解 菌寡养单胞菌Stenotrophomonas sp. Tzymx及在多环芳径污染环境修复中的应用
【背景技术】
[0002] 多环芳烃（PAHs)是一类持久性有机污染物（POPs)。海洋环境中PAHs的来源主要 是海底原油渗漏、海上运输、油轮事故、油井渗漏、陆源入海污染等。随着人类海洋活动的日 益频繁，PAHs污染水平呈现逐年加重趋势。苯并芘、芘、苯并荧蒽等强致癌的高分子量PAHs 都有检出。PAHs通过黏附于海洋沉积物经年累月地在海洋中积累，会在海洋生物体内会富 集放大，对高营养级生物造成危害。在受PAH污染的海域进行渔业养殖，其产品的食用品质 会受到严重影响，一旦被人体摄入则会严重危害健康。
[0003] 多环芳烃（PAHs)污染修复是当前环境修复中研宄的热点。微生物降解是对PAHs 污染土壤进行修复的重要途径之一。对于多环芳烃污染，国内外进行了大量多环芳烃降解 微生物的筛选工作。到目前为止，已分离出多个具有多环芳烃降解能力的菌株，如假单胞菌 属（Pseudomonas putida G7)、分枝杆菌属（Mycobacterium vanbaalenii PYR-1)、芽抱杆 菌属（Bacillus sp. Pl)等。
[0004] 传统分离出的多环芳烃降解菌在遇到高盐环境时，会抑制微生物的代谢作用，从 而使微生物失去降解能力，并且由于条件限制，一般海洋等高盐环境在进行多环芳烃降解 时不会进行脱盐处理，因此在实际应用中，筛选出耐盐降解菌为高盐环境多环芳烃生化降 解提供了可行性。
【发明内容】
[0005] 本发明针对现有技术中多环芳烃降解菌不耐高盐的不足之处，提供一种降解多环 芳烃菌株，该菌株可以应用于海洋等高盐环境中多环芳烃的污染治理。
[0006] 为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案得以实现的：
[0007] 本发明提供的寡养单胞菌Stenotrophomonas sp.，命名为Stenotrophomonas sp.Tzymx，于2014年12月4日保藏于"中国典型培养物保藏中心"，其保藏号CCTCC Ν0:Μ 2014626。地址：中国武汉武汉大学。
[0008] 所述菌株具有以多环芳烃为唯一碳源和能源进行生长的能力。
[0009] 所述降解多环芳烃的菌株在被多环芳烃污染的海洋等高盐环境的生物修复中的 应用。
[0010] 所述菌株的16SrDNA序列如SEQ NO. 1所示。
[0011] 利用所述耐高盐的多环芳烃降解菌进行海洋等高盐环境生物修复的方法，其特 征在于该方法由以下步骤组成：选取浙江台州湾的滩涂围塘养殖沉积泥l〇〇g，寡养单胞菌 Stenotrophomonas sp. Tzymx按质量百分比2. 0 %与沉积泥均勾，加水使泥土含水率保持在 15%，放入恒温振荡器中，控制培养温度在25°C的恒温条件下，振荡培养修复5天至20天。
[0012] Tzymx是从浙江省台州市的滩涂围塘养殖沉积泥中分离并筛选得到。本发明 Tzymx可在25~35 °C，pH值7. 0~8. 5培养条件下较好生长；菌株形态特征为菌株形态特 征为杆状，革兰氏染色阴性；无芽孢；无荚膜，有鞭毛；在LB固体平板上生长菌落形态为 圆形，黄色，微隆起，边缘整齐，湿润。
[0013] 作为优选，本发明所述菌株能以多环芳烃为唯一碳源和能源生长。
[0014] 上述耐盐多环芳烃降解菌的筛选方法，可按如下步骤依次实施：
[0015] (1)从滩涂围塘养殖沉积泥距地表下5~20cm处取表层泥土，作为菌源进行富集 培养；所述富集培养基含有：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、MgSO 4、多环芳烃（包括但不限于萘、 菲、荧蒽、芘、苯并蒽、苯并芘）；
[0016] (2)取（1)中所述富集培养液接种于液体无机盐选择培养基中进行选择培养， 所无机盐选择培养基含有：NaCl、MgCl2 . 6H20、Na2S04、CaCl2 . 2H20、TAPSO、KCl、NH4Cl、 Na2HPO4. 7H20、NaBr、NaHC03、H3B03、SrCl 2. 6H20、NaF、FeCl2. 4H20,将 pH 调至 7.6(此为 模拟天然海水组成的培养基）；添加多环芳烃（多环芳烃萘、菲、荧蒽、芘、苯并蒽、苯并芘的 浓度均为 150mg/L ~250mg/L ;
[0017] (3)取（2)中所述选择培养物稀释涂布于固体无机盐选择培养基上，进行分离进 行分离即得到多环芳烃降解菌Tzymx。
[0018] 上述多环芳烃降解菌Tzymx可用于海洋等高盐环境中多环芳烃的生物修复。
[0019] 本发明Tzymx可在25~35 °C，pH值7. 0~8. 5培养条件下较好生长；菌株形态特 征为菌株形态特征为杆状，革兰氏染色阴性；无芽孢；无荚膜，有鞭毛；在LB固体平板上 生长菌落形态为圆形，黄色，微隆起，边缘整齐，湿润。
[0020] Tzymx在LB (胰蛋白胨1.0%，酵母提取物0.5g%，氯化钠1.0% )固体培养基培 养24小时菌落特征为圆形，菌落直径1~2mm，黄色，表面光滑，边缘整齐。
[0021] Tzymx的生理生化特征，见表1。
[0022] 表1 Tzymx的牛理牛化特征
[0023]
【主权项】
1. 一株耐盐的多环芳径降解菌，其特征在于，该菌株为寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp. )Tzymx，在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC N0:M 2014626,具备在高盐环境 下降解多环芳烃的能力。
2. 根据权利要求1所述耐盐的多环芳烃降解菌，其特征在于所述菌株具有以多环芳烃 为唯一碳源和能源进行生长的能力。
3. 根据权利要求1所述耐盐的多环芳烃降解菌，其特征在于所述菌株的16SrDNA序列 如SEQ NO. 1所示。
4. 根据权利要求1所述耐盐的多环芳烃降解菌，其特征在于选择培养基含有：NaCl、 MgCl2. 6H20、Na2S04、CaCl2. 2H20、TAPS0、KCl、NH4Cl、Na2HP04. 7H20、NaBr、NaHC03、H3B03、 SrCl 2. 6H20、NaF、FeCl2. 4H20,将 pH 调至 7.6。
5. 根据权利要求1所述耐盐的多环芳烃降解菌在海洋多环芳烃污染环境的生物修复 中的应用。
6. 利用权利要求1所述耐盐的多环芳烃降解菌进行污染环境生物修复的方法，其特征 在于该方法由以下步骤组成：选取多环芳烃污染的滩涂围塘养殖沉积泥l〇〇g，寡养单胞菌 (Stenotrophomonas sp.) Tzymx按质量百分比2. 0 %与泥土混合均勾，加水使泥土含水率保 持在15 %，放入恒温振荡器中，控制培养温度在25 °C的恒温条件下，振荡培养修复5天至20 天。
【专利摘要】一株耐盐的多环芳烃降解菌，该菌株为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.)Tzymx，在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC NO:M2014626，具备在高盐环境下降解多环芳烃的能力。本发明具有以下优点：本发明提供的Tzymx对高盐环境中的多环芳烃有快速降解能力，且降解底物范围广，在短时间内降解率高。由于该菌具有耐高盐作用，使其在海洋等高盐环境中多环芳烃的修复中具有广阔的应用潜力。CCTCC NO:M201462620141204
【IPC分类】B09C1-10, C12R1-01, C02F101-32, C12N1-20, C02F3-34
【公开号】CN104877934
【申请号】CN201510237330
【发明人】张昕欣, 于红艳, 吴翰桂, 奚立民
【申请人】台州职业技术学院
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年5月12日