.7]
[0179] 上述因子C，在16mM的硫酸镁的存在下，显示出15%以上的残留活性。
[0180] [3.3.8]
[0181] 上述因子C，在16mM的硫酸镁的存在下，显示出25%以上的残留活性。
[0182] [3.3.9]
[0183] 上述因子C，在2. 5mM的氯化钙的存在下，显示出35%以上的残留活性。
[0184] [3.3.10]
[0185] 上述因子C，在2. 5mM的氯化钙的存在下，显示出45%以上的残留活性。
[0186] [3.3.11]
[0187] 上述因子C，在21mM的柠檬酸钠的存在下，与将Sf9用作宿主细胞所表达的鲎的因 子C和/或天然因子C相比，显示出较高的残留活性。
[0188] [3.3.12]
[0189] 上述因子C，在52mM的碳酸氢钠的存在下，与将Sf9用作宿主细胞所表达的鲎的因 子C和/或天然因子C相比，显示出较高的残留活性。
[0190] [3.3.13]
[0191] 上述因子C，在214mM的氯化钠的存在下，与将Sf9用作宿主细胞所表达的鲎的因 子C和/或天然因子C相比，显示出较高的残留活性。
[0192] [3.3.14]
[0193] 上述因子C，在16mM的硫酸镁的存在下，与将Sf9用作宿主细胞所表达的鲎的因子 C和/或天然因子C相比，显示出较高的残留活性。
[0194] [3.3.15]
[0195] 上述因子C，在2. 5mM的氯化钙的存在下，与将Sf9用作宿主细胞所表达的鲎的因 子C和/或天然因子C相比，显示出较高的残留活性。
[0196] [3. 4]
[0197] 上述因子C，其为重组蛋白。
[0198] [3.5.1]
[0199] 上述因子C，其在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为115kDa~140kDa。
[0200] [3. 5. 2]
[0201] 上述因子C，其在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为115kDa~130kDa。
[0202] [3. 5. 3]
[0203] 上述因子C，其在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为120kDa~130kDa。
[0204] [3. 5. 4]
[0205] 上述因子C，其在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为120kDa~128kDa。
[0206] [3. 5. 5]
[0207] 上述因子C，其在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为127kDa±5kDa。
[0208] [3. 5. 6]
[0209] 上述因子C，其在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为128kDa±2kDa。
[0210] [3.5.7]
[0211] 上述因子C，其在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为127kDa±2kDa。
[0212] [3.5.8]
[0213] 上述因子C，其在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为126kDa±2kDa。
[0214] [3.5.9]
[0215] 上述因子C，其在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为127kDa±lkDa。
[0216] [3. 6]
[0217] 上述因子C，其为水溶性。
[0218] [3. 7]
[0219] 上述因子C，其为包含因子C的培养上清。
[0220] [4]
[0221] 一种内毒素测定剂，其包含所述因子C。
[0222] [4. 1]
[0223] 上述测定剂，其进一步包含鲎的因子B及鲎的凝固酶原。
[0224] [4. 2]
[0225] 上述测定剂，其中，所述因子B为下述（E)或（F)所示的蛋白质，所述凝固酶原为 下述（G)或⑶所示的蛋白质：
[0226] (E)包含序列号6所示的氨基酸序列的蛋白质；
[0227] (F)包含在序列号6所示的氨基酸序列中含有一个或几个氨基酸的置换、缺失、插 入或添加的氨基酸序列、且具有因子B的活性的蛋白质；
[0228] (G)包含序列号8所示的氨基酸序列的蛋白质；
[0229] (H)包含在序列号8所示的氨基酸序列中含有一个或几个氨基酸的置换、缺失、插 入或添加的氨基酸序列、且具有凝固酶原的活性的蛋白质。
[0230] [5]
[0231] 一种内毒素测定用试剂盒，其包含所述测定剂。
[0232] [6]
[0233] -种测定待测试样中的内毒素的方法，其包括将所述测定剂与待测试样混合的工 序；及测定级联反应的进彳丁的工序。
[0234] [6. I. 1]
[0235] 上述方法，其中，所述待测试样含有离子。
[0236] [6. 1. 2]
[0237] 上述方法，其中，所述待测试样含有阳离子。
[0238] [6. 1. 3]
[0239] 上述方法，其中，所述待测试样含有金属离子。
[0240] [6. 1. 4]
[0241] 上述方法，其中，所述待测试样含有碱金属离子或碱土金属离子。
[0242] [6. 1. 5]
[0243] 上述方法，其中，所述待测试样含有碱金属离子。
[0244] [6. 1. 6]
[0245] 上述方法，其中，所述待测试样含有碱土金属离子。
[0246] [6. 2. 1]
[0247] 上述方法，其中，所述待测试样含有选自由钠离子、钾离子、钙离子及镁离子组成 的组中的1种或1种以上的离子。
[0248] [6. 2. 2]
[0249] 上述方法，其中，所述待测试样含有钠离子。
[0250] [6. 2. 3]
[0251] 上述方法，其中，所述待测试样含有钾离子。
[0252] [6. 2. 4]
[0253] 上述方法，其中，所述待测试样含有钙离子。
[0254] [6. 2. 5]
[0255] 上述方法，其中，所述待测试样含有镁离子。
[0256] [6. 3. 1]
[0257] 上述方法，其中，所述待测试样中的离子的含量是来自该待测试样的阳离子的浓 度以将该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到ImM以上的量。
[0258] [6. 3. 2]
[0259] 上述方法，其中，所述待测试样中的离子的含量是来自该待测试样的阳离子的浓 度以将该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到2mM以上的量。
[0260] [6. 3. 3]
[0261] 上述方法，其中，所述待测试样中的离子的含量是来自该待测试样的阳离子的浓 度以将该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到5mM以上的量。
[0262] [6. 3. 4]
[0263] 上述方法，其中，所述待测试样中的离子的含量是来自该待测试样的阳离子的浓 度以将该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到IOmM以上的量。
[0264] [6. 3. 5]
[0265] 上述方法，其中，所述待测试样中的离子的含量是来自该待测试样的阳离子的浓 度以将该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到20mM以上的量。
[0266] [6. 3. 6]
[0267] 上述方法，其中，所述待测试样中的离子的含量是来自该待测试样的阳离子的浓 度以将该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到50mM以上的量。
[0268] [6. 3. 7]
[0269] 上述方法，其中，所述待测试样中的离子的含量是来自该待测试样的阳离子的浓 度以将该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到IOOmM以上的量。
[0270] [6. 4]
[0271] 上述方法，其中，所述待测试样为注射剂。
[0272] [6. 5. 1]
[0273] 上述方法，其中，所述待测试样含有选自由氯化钠、硫酸镁、碳酸氢钠、柠檬酸钠、 氯化钙、氯化钾、碘他拉酸钠、依地酸二钠钙及磷酸二氢钠组成的组中的1种或1种以上的 盐。
[0274] [6. 5. 2]
[0275] 上述方法，其中，所述待测试样含有氯化钠。
[0276] [6. 5. 3]
[0277] 上述方法，其中，所述待测试样含有硫酸镁。
[0278] [6. 5. 4]
[0279] 上述方法，其中，所述待测试样含有碳酸氢钠。
[0280] [6. 5. 5]
[0281] 上述方法，其中，所述待测试样含有柠檬酸钠。
[0282] [6. 5. 6]
[0283] 上述方法，其中，所述待测试样含有氯化钙。
[0284] [6. 5. 7]
[0285] 上述方法，其中，所述待测试样含有氯化钾。
[0286] [6. 5. 8]
[0287] 上述方法，其中，所述待测试样含有碘他拉酸钠。
[0288] [6. 5. 9]
[0289] 上述方法，其中，所述待测试样含有依地酸二钠钙。
[0290] [6. 5. 10]
[0291] 上述方法，其中，所述待测试样含有磷酸二氢钠。
[0292] [6. 6. 1]
[0293] 上述方法，其中，所述待测试样中的盐的含量是来自该待测试样的盐的浓度以将 该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到ImM以上的量。
[0294] [6. 6. 2]
[0295] 上述方法，其中，所述待测试样中的盐的含量是来自该待测试样的盐的浓度以将 该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到2mM以上的量。
[0296] [6. 6. 3]
[0297] 上述方法，其中，所述待测试样中的盐的含量是来自该待测试样的盐的浓度以将 该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到5mM以上的量。
[0298] [6. 6. 4]
[0299] 上述方法，其中，所述待测试样中的盐的含量是来自该待测试样的盐的浓度以将 该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到IOmM以上的量。
[0300] [6. 6. 5]
[0301] 上述方法，其中，所述待测试样中的盐的含量是来自该待测试样的盐的浓度以将 该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到20mM以上的量。
[0302] [6. 6. 6]
[0303] 上述方法，其中，所述待测试样中的盐的含量是来自该待测试样的盐的浓度以将 该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到50mM以上的量。
[0304] [6. 6. 7]
[0305] 上述方法，其中，所述待测试样中的盐的含量是来自该待测试样的盐的浓度以将 该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到IOOmM以上的量。
[0306] [6. 7]
[0307] 上述方法，其中，包括将用于检测级联反应的进行的底物添加至反应体系的工序。
[0308] [6. 8]
[0309] 上述方法，其中，进一步包括计算出待测试样中的内毒素量的工序。
【附图说明】
[0310] 图1是表示鲎试验的级联反应体系的图。
[0311] 图2是表示日本产豐东方豐（Tachypleus tridentatus)来源的4种因子C(Sf9、 CHO、HEK、TAL)在非还原条件下的蛋白质印迹的结果的照片。
[0312] 图3是表示日本产鲎东方鲎来源的天然因子C(TAL)及重组因子C(CHO)的分子量 的照片（SDS-PAGE)。
[0313] 图4是表示因子C的活性测定的方案的图。
[0314] 图5是表示重构级联反应体系的图。
[0315] 图6是表示日本产鲎东方鲎来源的4种因子(：(5€9、〇10、册1(、了41^)的活性的图。
[0316] 图7是表示日本产鲎东方鲎来源的4种因子C(Sf9、CHO、HEK、TAL)的、基于各种 注射剂的活性抑制的图。
[0317] 图 8 是表不东方豐的因子 C(TtFC)和圆尾豐（Carcinoscorpius rotundicauda) 的因子C(834CrID4)的比对的图（接于图9)。下划线表示能够发生N型糖链修饰的共有序 列。
[0318] 图9是表示东方鲎的因子C(TtFC)和圆尾鲎的因子C(834CrID4)的比对的图（图 8的续图）。下划线表示能够发生N型糖链修饰的共有序列。
[0319] 图10是表示在还原条件下及非还原条件下的因子C与特异性抗体的反应部位的 示意图。
[0320] 图11是表示日本产鲎东方鲎来源的4种纯化因子C的分子量的照片（SDS-PAGE)。
[0321] 图12是表示日本产鲎东方鲎来源的4种纯化因子C的分子量的照片（蛋白质印 迹）。
[0322] 图13是表示日本产鲎东方鲎来源的4种纯化因子C的基于糖肽酶F的N型糖链 的除去结果的照片（蛋白质印迹）。
[0323] 图14中，（a)是表示日本产鲎东方鲎来源的4种纯化因子C的基于凝集素印迹的 N型糖链的检测结果的照片；(b)是表示凝集素的结合特异性的图；（c)是表示由实验结果 和文献报告预测的重组因子C的N型糖链的结构的示意图。
【具体实施方式】
[0324] (1)本发明的因子C
[0325] 本发明的因子C为鲎来源的因子C。本发明的因子C为重组蛋白。"重组蛋白"是 指通过将编码蛋白质的基因导入宿主细胞进行异源表达而得到的蛋白质。本发明的因子C 具有因子C的活性。
[0326] 作为豐，可以举出作为日本产豐的东方豐（Tachypleus tridentatus)、作为 美国产鲎的美洲鲎（Limulus polyphemus)、作为东南亚产（新加坡产）鲎的圆尾鲎 (Carcinoscorpius rotundicauda)、作为东南亚产豐的南方豐（Tachypleus gigas)。这些 之中，优选作为日本产鲎的东方鲎、或作为东南亚产（新加坡产）鲎的圆尾鲎来源的鲎。此 外，这些之中，更优选作为日本产鲎的东方鲎来源的鲎。将东方鲎的因子C的氨基酸序列示 于序列号2。此外，将编码东方鲎的因子C的基因的碱基序列示于序列号1。将圆尾鲎的因 子C的氨基酸序列示于序列号4。此外，将编码圆尾鲎的因子C的基因的碱基序列示于序列 号3。
[0327] 本发明的因子C可以进行N型糖链修饰。N型糖链是指与蛋白质的天冬酰胺残基 结合的糖链。在东方鲎的因子C和圆尾鲎的因子C中保存有能够发生N型糖链修饰的氨基 酸残基。将两因子C的比对和能够发生N型糖链修饰的共有序列（Asn-Xaa-Ser/Thr(Xaa 表示任意的氨基酸残基））示于图8、9。由此，认为尤其是圆尾鲎的因子C与东方鲎的因子 C同样地为合适的因子C。
[0328] 本发明的因子C可以具有唾液酸。作为唾液酸，例如可以举出N-乙酰神经氨酸 (Neu5Ac)、N-羟乙酰神经氨酸（Neu5Gc)。"具有唾液酸"是指，在本发明的因子C上结合有 唾液酸。唾液酸可以与因子C直接结合，也可以间接结合。例如，通过将包含唾液酸的糖链 与因子C结合，从而唾液酸也可以间接地与因子C结合。唾液酸例如可以为（α-2, 3)键的 唾液酸，更具体而言，可以为（α-2,3)键的末端唾液酸。"（α-2,3)键的唾液酸"是指，通过 (α -2, 3)糖苷键与糖结合的唾液酸。"（α -2, 3)键的末端唾液酸"是指，通过（α -2, 3)糖 苷键与糖结合且位于糖链的末端的唾液酸。作为糖链，例如可以举出N型糖链。对于唾液 酸来说，例如通过在宿主细胞（该宿主细胞可以通过翻译后修饰将包含唾液酸的糖链附加 至蛋白质）中表达因子C，从而可以附加至因子C中。作为这样的宿主细胞，可以举出哺乳 类细胞。唾液酸例如可以通过糖链解析而检测出。糖链解析可以通过公知的方法进行。例 如，可以利用凝集素或糖链抗体进行糖链解析。具体而言，例如，可以利用怀槐凝集素（MM) 进行凝集素印迹，从而特异性地检测出（α-2, 3)键的末端唾液酸。
[0329] 本发明的因子C与对照的因子C相比具有较多的唾液酸。"与对照的因子C相比 具有较多的唾液酸"是指，在换算成每一分子因子C的唾液酸的分子数时，与本发明的因子 C结合的唾液酸的量大于与对照的因子C结合的唾液酸的量。例如，在换算成每一分子因子 C的唾液酸的分子数时，与本发明的因子C结合的唾液酸的量可以为与对照的因子C结合的 唾液酸的量的I. 1倍以上、1. 2倍以上、1. 3倍以上、1. 5倍以上、2. 0倍以上、2. 5倍以上、或 3.0倍以上。
[0330] 作为对照的因子C，可以举出在昆虫细胞Sf9中表达的重组因子C或天然的因子 C。"将Sf9作为宿主细胞所表达的因子C"是指，通过将Sf9作为宿主细胞来表达编码包含 与本发明的因子C相同的氨基酸序列的因子C的基因而得到的因子C。"天然的因子C"是 指，由鲎的溶解物分离纯化的因子C。天然的因子C也可以是由本发明的因子C来源的鲎的 溶解物所分离纯化的因子C。即，具体而言，例如，在本发明的因子C为东方鲎的重组因子C 或其变体的情况下，天然的因子C可以为由东方鲎的溶解物所分离纯化的因子C。
[0331] "与对照的因子C相比是否具有较多的唾液酸"，可以通过用本发明的因子C和对 照的因子C比较唾液酸的量来确认。唾液酸的量例如可以通过糖链解析来确定。糖链解析 可以通过公知的方法进行。例如，可以利用凝集素或糖链抗体进行糖链解析。具体而言，例 如通过利用怀槐凝集素（MM)进行凝集素印迹，从而可以特异性地定量（α -