序列，SEQ ID NO. 29-64所示的序列和SEQ ID NO. 65-94所示的序列。2. 根据权利要求1所述的PCR扩增引物，其特征在于，所述SEQ ID NO. 1-28所示的序 列是用于扩增HLA-A基因的引物序列； 优选地，所述SEQ ID NO. 1-2所示的序列是用于扩增HLA-A*和A*36子系的所有等位 基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 3-4所示的序列是用于扩增HLA-A*02、A*68、A*69和A*80子 系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 5-6所示的序列是用于扩增HLA-A*02和A*69子系的所有等 位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 7-8所示的序列是用于扩增HLA-A*01、A*36、A*68、A*69和 A*80子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 9-10所示的序列是用于扩增HLA-A*23和A*24子系的所有等 位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 11-12所示的序列是用于扩增HLA-A*31和A*33子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 13-14所示的序列是用于扩增HLA-A*29、A*32和A*74子系的 所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 15-16所示的序列是用于扩增HLA-A*03和A*30子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 17-18所示的序列是用于扩增HLA-A*01、A*02、A*03、A*ll、 A*36、A*68、A*69和A*80子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 19-20所示的序列是用于扩增HLA-A*30子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 21-22所示的序列是用于扩增HLA-A*11子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 23-24所示的序列是用于扩增HLA-A*29和A*80子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 25-26所示的序列是用于扩增HLA-A*25、A*26、A*29、A*31、 A*32、A*33、A*34、A*66、A*74和A*43子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 27-28所示的序列是用于扩增HLA-A所有血清学家系的等位 基因。3. 根据权利要求1或2所述的PCR扩增引物，其特征在于，所述SEQ ID NO. 29-64所示 的序列是用于扩增HLA-B基因的引物序列； 优选地，所述SEQ ID NO. 29-30所示的序列是用于扩增HLA-B*07和B*48子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 31-32所示的序列是用于扩增HLA-B*08子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 33-34所示的序列是用于扩增HLA-B*13子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 35-36所示的序列是用于扩增HLA-B*15和B*46子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 37-38所示的序列是用于扩增HLA-B*14、B*38、B*39和B*67 子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 39-40所示的序列是用于扩增HLA-B*15、B*51和B*52子系的 所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 41-42所示的序列是用于扩增HLA-B*35和B*73子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 43-44所示的序列是用于扩增HLA-B*18、B*44、B*73和B*82 子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 45-46所示的序列是用于扩增HLA-B*07、B*40 :01和B*81子 系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 47-48所示的序列是用于扩增HLA-B*18、B*27、B*37和B*40 : 02/06子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 49-50所示的序列是用于扩增HLA-B*41、B*45、B*49和B*50 子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 51-52所示的序列是用于扩增HLA-B*42子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 53-54所示的序列是用于扩增HLA-B*54、B*55、B*56和B*59 子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 55-56所示的序列是用于扩增HLA-B*57子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 57-58所示的序列是用于扩增HLA-B*18、B*27、B*35、B*37、 B*40、B*41、B*45、B*49、B*50、B*51、B*52、B*53、B*58 和 B*78 子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 59-60所示的序列是用于扩增HLA-B*07、B*08、B*15、B*42、 B*44和B*47子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 61-62所示的序列是用于扩增HLA-B*41、B*45、B*49、B*50、 B*51、B*52、B*53、B*58和B*78子系的所有等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 63-64所示的序列是用于扩增HLA-B*所有血清学家系的等位 基因。4.根据权利要求1-3中任一项所述的PCR扩增引物，其特征在于，所述SEQ ID NO. 65-94所示的序列是用于扩增HLA-C基因的引物序列； 优选地，所述SEQ ID NO. 65-66所示的序列是用于扩增HLA-OOl和002子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 67-68所示的序列是用于扩增HLA-OOl子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 69-70所示的序列是用于扩增HLA-O02子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 71-72所示的序列是用于扩增HLA-O03子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 73-74所示的序列是用于扩增HLA-O03子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 75-76所示的序列是用于扩增HLA-O04和018子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 77-78所示的序列是用于扩增HLA-O05和008子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 79-80所示的序列是用于扩增HLA-O06和012子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 81-82所示的序列是用于扩增HLA-O07和018子系的所有 等位基因； 优选地，所述SEQ ID NO. 83-84所示的序列是用于扩增HLA-O07子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 85-86所示的序列是用于扩增HLA-014子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 87-88所示的序列是用于扩增HLA-015子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 89-90所示的序列是用于扩增HLA-016子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 91-92所示的序列是用于扩增HLA-C*17子系的所有等位基 因； 优选地，所述SEQ ID NO. 93-94所示的序列是用于扩增HLA-C所有血清学家系的等位 基因。5. 根据权利要求1-4中任一项所述的PCR扩增引物，其特征在于，使用所述PCR扩增引 物进行PCR扩增所得到的产物片段包括相应的HLA-A、-B和-C基因的所有外显子、内含子 和所述基因两端调控区。6. 使用如权利要求1-5中任一项所述的PCR扩增引物扩增得到的HLA-A、-B和-C基 因的全长测序引物，其特征在于，所述基因的全长测序引物的序列选自：SEQ ID NO. 95-108 所示的序列，SEQ ID NO. 109-122所示的序列和SEQ ID NO. 123-136所示的序列。7. 根据权利要求6所述的基因全长测序引物，其特征在于，所述SEQ ID NO. 95-108所 示的序列用于测序HLA-A基因的全长； 优选地，所述SEQ ID NO. 109-122所示的序列用于测序HLA-B基因的全长； 优选地，所述SEQ ID NO. 123-136所示的序列用于测序HLA-C基因的全长。8. -种HLA基因测序分型方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： (1)根据样本的血清型，选取相应的、如权利要求1-5任一项所述的组特异性PCR扩增 引物，对样本DNA进行PCR扩增，纯化，得到HLA-A、-B和/或-C的基因扩增产物； ⑵利用如权利要求6或7所述的基因全长测序引物，分别对纯化后的HLA-A、-B和-C 的基因扩增产物进行测序反应，纯化，得到纯化后的测序扩增产物； (3)将步骤（2)得到的测序产物在ABI3730电泳仪中电泳，得到序列峰图，导入序列分 析软件中进行分析，以进行HLA基因分型。9. 一种HLA基因分型的试剂盒，其特征在于，包括：如权利要求1-5任一项所述的组特 异性PCR扩增引物和/或如权利要求6或7所述的基因全长测序引物。
【专利摘要】本发明涉及生物医学及免疫遗传学，特别是涉及HLA基因的组特异性扩增引物、测序分型方法和试剂盒，所述PCR扩增引物序列选自：SEQ？ID？NO.1-28所示的序列，SEQ？ID？NO.29-64所示的序列和SEQ？ID？NO.65-94所示的序列。本申请通过对HLA基因进行血清分类设计组特异性扩增引物，可对HLA-A、-B和-C所有等位基因进行测序分型；对HLA-A、-B和-C全长序列进行扩增测序，可有效解决模棱两可，达到绝对高分，数据更加准确可靠。
【IPC分类】C12N15/11, C12Q1/68
【公开号】CN105039332
【申请号】CN201510511080
【发明人】于浩洋, 徐筠娉, 马塞尔·G·J·蒂拉努斯
【申请人】苏静
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年8月19日