用于微生物捕集的方法和材料的制作方法_4

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[0070] 实施例4 :合成乳糖-[支化]-砂(图5A)
[0071] 合成遵循这些步骤:使5克细砂与20mlDI水一起剧烈搅拌,接着经中等玻璃料 过滤。接着使它们与IOmlpH8. 520mM硼酸盐缓冲液混合,并且使其在室温下搅拌数分钟。 接着添加16mg1,1' -羰基二咪唑(0.lmmol,Mff162. 15)至混悬液中,并且使其再搅拌2 小时,随后添加0. 25g超支化双-MPA聚酯-16-羟基(0. 1425mmol,2. 28mmol当量0H)。在 额外2小时之后,添加0. 37g(2. 28mmol) 1,1' -羰基二咪唑至混悬液中,并且使其再搅拌2 小时,随后添加3.98(11.4111111〇1)|3-0-乳糖。接着添加51111?118.5硼酸盐缓冲液。使最终 "几乎澄清"混合物在室温下搅拌2天。最终溶液经中等玻璃料过滤,并且用50mlDI水冲 洗,从而分离4. 8943g砂复合物,其颜色类似于起始砂的颜色。保持固体的湿润性。
[0072] 实施例5 :合成乳糖-[支化]-Sepharose(图5B)
[0073] 合成遵循这些步骤:使1克湿润Sepharose(约5wt%于水中)与IOmlpH 8. 520mM硼酸盐缓冲液混合,并且使其在室温下搅拌数分钟。接着添加32mg1,1'_羰 基二咪唑(0. 2mmol,丽162. 15)至混悬液中,并且使其再搅拌2小时,随后添加0. 5g 超支化双-MPA聚酯-16-羟基(0. 285mmol,4. 56mmol当量0H)。在额外2小时之后, 添加0. 74g(4. 56mmol) 1,1' -羰基二咪唑至混悬液中,并且使其搅拌2小时,随后添加 7. 8g(22. 8mmol)f3-D-乳糖。再添加5mlpH8. 5缓冲液。使最终白色混合物在室温下搅拌 2天。添加50mlDI水至最终稠密白色溶液中以确保溶解所有游离试剂。最终溶液经中等 玻璃料过滤,并且用50mlDI水冲洗。保持固体的湿润性。
[0074] 实施例6 :合成乳糖-[支化]-PGM(图5C,1)
[0075] 合成(包括树枝状聚合物)遵循这些步骤:使IOOmgPGMA-NH2(0? 4mmol当量的 重复单元)与50mlpH 8. 520mM硼酸盐缓冲液混合,并且使其在室温下搅拌数分钟。接着 添加64mg1,1' -羰基二咪唑(0. 4mmol,Mff162. 15)至混悬液中,并且使其搅拌2小时,随 后添加Ig超支化双-MPA聚酯-16-羟基(0. 57mmol,9. 12mmol当量0H)。在额外2小时之 后,添加I. 48g(9. 12mmol) 1,1'-羰基二咪唑至混悬液中,并且使其再搅拌2小时,随后添加 15. 6g(45. 6mmol) 0 -D-乳糖。使最终白色混合物在室温下搅拌2天。添加50mlDI水至 最终稠密白色溶液中以确保溶解所有游离试剂。最终溶液经中等玻璃料过滤,并且用50ml DI水冲洗。保持固体的湿润性。
[0076]实施例7 :合成乳糖-[支化]-PGMA(图5C,2)
[0077]合成(包括壳聚糖)遵循这些步骤:通过添加2g酸至400mL水中来制备400ml的 含0. 5%乙酸的DI水。向这个酸溶液中添加2g壳聚糖,并且使溶液在室温下搅拌5分钟直 至它变为单相。接着,添加200mgPGMA,并且使最终混悬液在室温下搅拌2小时。接着经 中等玻璃料过滤最终灰白色混悬液,并且用100mlDI水洗涤固体。将分离的固体再混悬于 IOmlDI水中。它的pH是约4。添加1滴碳酸钠溶液(通过将500mgNa2CO3溶解于9. 5g DI水中来制备5wt%碳酸钠溶液)以使pH增加至约9。过滤目前是碱性的混合物,并且用 50mlDI水冲洗。产量是140mg壳聚糖-PGMA。将IOOmg这个中间体混悬于IOmlpH8.0 硼酸盐缓冲液中。添加〇. 148g(0. 9mmol) 1,1'-羰基二咪唑至混悬液中,并且使其搅拌2小 时,随后添加I. 56g(4. 5mmol) 0 -D-乳糖。使最终混合物在室温下搅拌2天。最终溶液经 中等玻璃料过滤,用100mlDI水冲洗。
[0078]实施例8 :合成乳糖-[支化]-砂
[0079] 合成将遵循这些步骤:将使5克细砂与20mlDI水一起剧烈搅拌,接着经中等玻 璃料过滤。将接着使它们与IOmlpH8. 520mM硼酸盐缓冲液混合,并且使其在室温下搅拌 数分钟。将接着添加16mg1,1' -羰基二咪唑(0.Immol,Mff162. 15)至混悬液中,并且使 其再搅拌2小时,随后添加支链聚(乙二醇)(2. 28mmol当量0H)。在额外2小时之后,将 添加0. 37g(2. 28mmol) 1,1' -羰基二咪唑至混悬液中,并且使其再搅拌2小时,随后添加 3. 9g(11.4mmol)f3-D-乳糖。将接着添加5mlpH8. 5硼酸盐缓冲液。将使最终混合物在室 温下搅拌2天。最终溶液将经中等玻璃料过滤,并且用50mlDI水冲洗。将保持固体的湿 润性。
[0080] 实施例9:合成乳糖-[支化]-Sepharose
[0081] 合成将遵循这些步骤:将使1克湿润Sepharose(约5wt%于水中)与IOmlpH 8. 520mM硼酸盐缓冲液混合,并且使其在室温下搅拌数分钟。将接着添加32mg1,1'-羰基 二咪唑(0. 2mmol,Mff162. 15)至混悬液中,并且使其再搅拌2小时,随后添加支链聚(乙二 醇)(4. 56mmol当量0H)。在额外2小时之后,将添加0. 74g(4. 56mmol) 1,1' -羰基二咪唑 至混悬液中,并且使其搅拌2小时,随后添加7. 8g(22. 8mmol)P-D-乳糖。将再添加5mlpH 8. 5缓冲液。将使最终混合物在室温下搅拌2天。将添加50mlDI水至最终溶液中以确保 溶解所有游离试剂。最终溶液将经中等玻璃料过滤,并且用50mlDI水冲洗。将保持固体 的湿润性。
[0082] 实施例10:合成乳糖-[支化]-PGMA
[0083] 合成(包括支链聚合物)将遵循这些步骤:将使IOOmgPGMA-NH2(0. 4mmol当 量的重复单元)与50mlpH8.520mM硼酸盐缓冲液混合,并且使其在室温下搅拌数分 钟。将接着添加64mgl,1' -羰基二咪唑(0. 4mmol,丽162. 15)至混悬液中,并且使其 搅拌2小时,随后添加支链聚(乙二醇)(9. 12mmol当量0H)。在额外2小时之后,将添 加I. 48g(9. 12mmol) 1,1' -羰基二咪唑至混悬液中,并且使其再搅拌2小时,随后添加 15. 6g(45. 6mmol) 0 -D-乳糖。将使最终混合物在室温下搅拌2天。将添加50mlDI水至最 终溶液中以确保溶解所有游离试剂。最终溶液将经中等玻璃料过滤,并且用50mlDI水冲 洗。将保持固体的湿润性。
[0084] 实施例11:甲型流感病毒
[0085] 因为已知流感病毒的包膜蛋白血凝素(HA)会强烈结合宿主细胞的膜中的天生唾 液酸,所以使唾液酰基乳糖共价连接于不溶性载体上将使病毒吸附于这些表面。因此,使 用6' -唾液酰基乳糖而非P-D-乳糖作为起始物质,遵循图5C,2制备与PGM复合的唾液 酰基乳糖。其中连接体是壳聚糖。通过重组HA结合测定来监测材料的化学衍生化(通过 Bradford测试来定量)(图7)。
[0086] 在甲型流感病毒的PR8病毒株的缓冲(PBS)水溶液中测试PGMA连接的唾液酰基 乳糖以及一组对照,其中使用斑块测定来定量上清液中的病毒滴度。结果揭示PGM-壳聚 糖-乳糖自溶液移除超过98%的病毒(表1和图8)。此外,数据显示病毒吸附于公开的材 料复合物遵循线性等温线;吸附的甲型流感病毒相对于材料复合物的相对恒定百分比反映 Freundlich等温线,其描述实体在极低表面覆盖率下吸附于混悬表面上。实际上,log(吸 附的病毒)与log(初始病毒)之间的线性通过获得R2系数=〇. 994加以确认(表2和图 9) 〇
[0087]表1:甲型流感病毒与不溶性材料连接的定量[0088]
[0089]PGM=聚(甲基丙烯酸缩水甘油酯),Ch=壳聚糖,SL=唾液酰基乳糖,L=乳糖 [0090] 表2 :在改变甲型流感病毒的初始滴度下,复合的聚(甲基丙烯酸缩水甘油酯)聚 合物的活性 [0091]
[0092] 基于上述实施方案,本领域技术人员将了解本公开的其它特征和优势。因此,本公 开将不受限于已特定显示和描述的内容,例外之处是如通过随附权利要求所指示的内容。 本文引用的所有出版物和参考文献都以引用的方式整体明确并入本文。
【主权项】
1. 一种用于固定生物物质的方法,其包括: 穿过材料复合物混合包含所
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