HA载体的样品具有比其他测试的制剂高 25 %的Ca浓度。
[0105] 结论：
[0106] ?含有25和50mg的BBC的植入物中和含有批号#10834-124和批号#10834-104 骨架的植入物中的新骨/软骨的程度和分布模式、钙和碱性磷酸酶浓度是相当的。
[0107] ?对于载体中含有不同浓度的HA和普朗尼克F-127的植入物而言，新骨产生的程 度上没有差异，然而，随着HA浓度增加，新骨作为围绕含BBC骨架的腔体中心的环边而形成 和出血的趋势是显著的。
[0108] 实施例 8 (09-3467)：
[0109] 本实施例调查了：
[0110] ?软骨粒径的影响
[0111] ?载体中聚合物浓度对成骨诱导的影响
[0112] ?载体/聚合物比率的影响
[0113] ?造影剂的影响
[0114] 研究设计：12组4-5周龄的雄性Long Evans大鼠在胸部接受了双边皮下植入物。
[0115] 3个组接受了手术植入物，该手术植入物含有5 μ g BMP_2(信号），其与不同比例 的造影剂（Isovue-370)/普朗尼克F-127家载于25mg的牛骨胶原（BBC，批号#17075-43， 骨架）上作为载体（组1-3)。
[0116] 8个组接受了含有5 yg BMP-2(信号）的手术植入物，其载于PBS中的普朗尼克 F-127(载体）中的25mg不同的胶原（骨架）上。本项研究中使用的胶原包括如下各项：
[0117] · BBC，批号 #17075-43, 70-425um
[0118] · BBC,批号 #17075-128, 70-250um
[0119] ?可溶胶原（MP Biologies)
[0120] ?发热（febrile)胶原（Instant MCH，Ethicon)
[0121] 两个组接受了含有5以881^-2(信号）的手术植入物，所述81^-2载于20%普朗 尼克F-127/2.5%HA或真皮凝胶提取物（Dermal Gel Extra;DGE)中的25mg的BBC (批号 #17075-43)骨架上。
[0122] 在第14天将所有大鼠经0)2室息处死，并获取样本用于分析。
[0123] 研究设计详情如下表4中所示。
[0124] 表4:研究设计
[0125]
[0126] 收取植入物，在40 %酒精中固定，包埋于甲基丙烯酸甲酯中，以约5微米切片并用 苏木素和伊红（H&E)及甲苯胺蓝染色。
[0127] 组织病理学分析由Kuber Sampath(Genzyme)进行，并包括用表5中所示记分系统 对植入物中新骨产生进行半定量评定。
[0128] 表5 :针对新骨的记分系统
[0130] 结果：含有发热胶原骨架的植入物在收取之时无法鉴定。因此没有取样（第8 组）。
[0131] 数据在表6和图10和11中呈现。
[0132] 表6:组织学分数
[0133]
[0135] ?对于1 μ g rhBMP-2剂量而言，含有25mg较小颗粒BBC的植入物显示出比等效剂 量的大颗粒BBC组更多新骨产生的趋势。
[0136] ?对于5 μ g rhBMP-2剂量而言，具有不同粒径的BBC植入物显示出相当的新骨产 生。
[0137] ?可溶胶原与两个批次的BBC相比都显示出非常贫乏的骨产生。
[0138] ?向22. 5%普朗尼克F-127载体添加20或40% Isovue对成骨诱导潜力没有影 响。
[0139] ?当向普朗尼克F-127添加80% Isovue时，植入物中的新骨/软骨产生趋向于更 低。
[0140] ?当向普朗尼克F-127添加 HA时，或当把DGE用作唯一载体时，植入物中的新骨/ 软骨产生趋向于更低。
[0141] 结论：
[0142] · BBC粒径对BMP-2成骨诱导潜力没有影响。
[0143] ?可溶胶原具有非常贫乏的新骨产生。
[0144] ?向22. 5%普朗尼克F-127载体添加 Isovue对成骨诱导潜力没有影响。
[0145] ?当向普朗尼克F-127添加 HA时，或当把DGE用作唯一载体时，植入物中的新骨/ 软骨产生更低。
[0146] 实施例 9 (09-3468)：
[0147] 本实施例调查了：
[0148] ?有或没有聚合物时的BMP剂量响应
[0149] ?通过重组BMP的成骨诱导
[0150] ?改变载体
[0151] 研究设计：13组（η = 4只/组）4_5周龄的雄性Long Evans大鼠在胸部接受了 双边皮下植入物。
[0152] 8个组接受了含有IOyg BMP-2 (信号）的手术植入物，所述BMP-2载于25mg的牛 骨胶原（BBC，批号#17075-43,骨架）上，并与不同的透明质酸（HA)市售产品（载体）配制 在一起。
[0153] 5个组接受了含有3-10 μ g BMP-2或BMP-4的手术植入物，所述BMP-2或BMP-4载 于 25mg 的含有JMuronic? F-127 的 BBC 上。
[0154] 在第14天或第28天将所有大鼠经0)2室息处死，并获取样本用于分析。
[0155] 研究设计详情如表7中所示。
[0156] 表7:研究设计
[0158] 评估：
[0159] 在尸检时从每个测试部位收集样品（14或28天）。将每个样品切成两块。一半的 样品在10%中性缓冲的福尔马林中固定，包埋于甲基丙烯酸甲酯中，以约5微米切片，并用 苏木素和伊红（H&E)、von Kossa和甲苯胺蓝染色。
[0160] 组织病理学评估包括对样品中新软骨和骨形成的定量和半定量评估，并使用表8 中所示的记分系统。还对每个样品的新骨/软骨形成的分布模式进行打分（表9)(建新公 司病理学部，Lucy Phillips, B. V. Sc.，A. C. V. P)。
[0161] 表8 :用于新骨/软骨的记分系统
[0165] 清除另一半样品的附着组织。将样品置于2ml的冰冷的0. 15M NaCl/3mM NaHCO3中，然后用Polytron匀浆器进行匀浆。然后将其离心，把上清倒出。
[0166] 在5ml的20mM磷酸盐缓冲液中将残基洗涤两次，然后在5ml的0. 6N HCL中4°C提 取过夜。然后将其离心，倒出上清并进行妈分析。在Varian ICP-OES上于396nm发射光处 分析样品（建新公司分析研发部，Martin Hanus)。
[0167] 结果：
[0168] 在第14天尸检时，所有含有BMP-4的植入物（第11&12组）都无法鉴定并因此未 取样。
[0169] 在第28天尸检时，所有含有22. 5%普朗尼克F-127的植入物（第10组）都无法 鉴定并因此未取样。
[0170] 组织病理学评估
[0171] 在14天和28天针对HA产品的病理学分数的散点图如图12中所示。
[0172] ?无论使用什么HA载体（P>0. 05)，在14天和28天，所有组的植入物中新骨/软 骨的形成都具有相当的中位分数。
[0173] ?任何组中都没有一致的新骨/软骨的分布模式。
[0174] 钙评价
[0175] 含有DGE和Prevelle丝的植入物具有与Hylastan和Restylane相比较高的％ Ca 浓度的趋势。
[0176] 结论：
[0177] ?在14天，具有BMP-4的植入物无法鉴定
[0178] ?在28天，具有22. 5%普朗尼克F-127的植入物被完全再吸收
[0179] ?在14或28天，不论使用什么HA载体，含有rhBMP-2、BBC和HA市售产品的植入 物都具有相当的新骨/软骨形成
[0180] ?在28天，不论使用什么HA载体，含有加载了 rhBMP-2和HA市售产品的骨架的植 入物具有相当的Ca浓度
[0181] 实施例 10(08-3212)：
[0182] 本实施例调查了：
[0183] ?大鼠异位模型中胶原载体批次的成骨诱导潜力
[0184] ?载体中聚合物浓度对成骨诱导的影响
[0185] ?载体/聚合物比率的影响
[0186] 研究设计：在这项研究中使用了 16组雄性6周龄Long Evans大鼠。测试品在胸 部通过手术双边植入至皮下袋中。
[0187] ·2个组接受了含有1.5或5yg BMP-2(信号）的植入物，所述BMP-2载于谷氨酸 盐缓冲液（载体）中的150 μ 1 20%普朗尼克F-127中的25mg的BBC(批号#17075-43,骨 架）上（第1&2组）。
[0188] ·4个组接受了含有0-5 μ g BMP-2 (信号）的植入物，所述BMP-2载于PBS (载体） 中的15(^120%普朗尼克？-127中的2511^的88(：(批号#17075-43，骨架）上（第3-6 组）。
[0189] · 2个组接受了含有1.5或5yg BMP-2(信号）的植入物，所述BMP-2载于谷氨 酸盐缓冲液（载体）中的15(^120%普朗尼克？-127+2.5%撤中的2511^的88(：(批号 #17〇75_43,骨架）上（第 7&8 组）。
[0190] ·4个组接受了含有0-5yg BMP-2(信号）的植入物，所述BMP-2载于40μ1 PBS (阳性对照）中的25mg的BBC (批号#17075-43,骨架）上（第9-12组）。
[0191] ·3个组接受了含有0-5yg BMP-2(信号）的植入物，所述BMP-2载于PBS (载体） 中的150 μ 1 20%普朗尼克F-127中的25mg的BBC(批号#11848-79,骨架）上（第13-15 组）。
[0192] ·1个组接受了含有1.5yg BMP_2(信号）的植入物，所述BMP-2载于谷氨酸盐缓 冲液（载体）中的150 μ 1 2. 5% HA中的25mg的BBC(批号#17075-43,骨架）上（第16 组）。
[0193] 在植入后第14天将所有大鼠经0)2室息处死，并获取植入物。
[0194] 研究设计详情如下表10中所示。
[0195] 表10:研究设计
[0196]
[0197] *BBC,批号 #17075-43
[0198] **BBC,批号 #11848-79
[0199] 评估：
[0200] 收取植入物，在40%酒精中固定，包埋于甲基丙烯酸甲酯中，以约5微米切片并用 苏木素和伊红（H&E)及甲苯胺蓝染色。
[0201] 组织病理学分析由Kuber Sampath(Genzyme)进行，并包括用表2中所示记分系统 对植入物中新骨产生进行半定量评定。
[0202] 表11 :新骨产生的记分系统
[0204] 结果：
[0205] 数据如表12和图14、15和16中所示。
[0206] 表12 :组织学分数表
[0208] *BBC,批号 #17075-43<