br>[0209] **BBC,批号 #11848-79
[0210] 对于5 μ g rhBMP-2剂量，含有两种BBC批次的植入物显示出相当的成骨诱导潜 力。对于1. 5 μ g rhBMP-2剂量，新批次的BBC (批号#17075-43)显示出更大的成骨诱导潜 力。
[0211] 对于所有rhBMP-2剂量，两种缓冲液显示出相当的成骨诱导潜力。含有2. 5% HA 和20%普朗尼克F-127/2. 5% HA的植入物，具有可变的组织学分数并且比20%普朗尼克 F-127组中小。
[0212] 结论：
[0213] ?测试的两个批次的BBC在5 μ g BMP-2剂量处具有相当的成骨诱导潜力。
[0214] · 20%普朗尼克F-127/2. 5% HA和2. 5% HA具有比20%普朗尼克F-127更低的 成骨诱导密度。
[0215] ?两种缓冲液，谷氨酸盐缓冲液和PBS显示出了相当的成骨诱导潜力。
[0216] 实施例 11(09-2764)：
[0217] 研究目标：
[0218] ?为了评估不同浓度的OGF载体。
[0219] 研究设计
[0220] 12组4-5周龄的雄性Long Evans大鼠在胸部接受了双边皮下植入物。手术植入 物体积维持恒定在250 μ 1并使用5 μ g剂量的BMP-2 (信号）。在存在或不存在BBC的情况 下测试载体。在移植后第14天将所有大鼠经0)2室息处死，并收取植入物。
[0221] 研究设计详情如下表13中所示。
[0222] 表13 :研究设计
[0224] 评估：
[0225] 收取植入物，在40%酒精中固定，包埋于甲基丙烯酸甲酯中，以约5微米切片并用 苏木素和伊红（H&E)及甲苯胺蓝染色。
[0226] 组织病理学分析由Kuber Sampath(Genzyme)进行，并包括用表14中所示记分系 统对植入物中新骨产生进行半定量评定。
[0227] 图14 :新骨产生的记分系统
[0228]
[0229] 结果：
[0230] 不含BBC的样品（第2、4、7、9和11组）和不含载体的样品（第1组）在收取组 织时无法鉴定，因此这些组未收集到样品。
[0231] 病理学分数如表15和图17中所不。
[0232] 表15 :组织学分数表
[0234] 结论：
[0235] · BBC的存在对于载入了 rhBMP-2的植入物诱导骨形成的能力是至关重要的。
[0236] ?仅含20%普朗尼克作为载体的制剂以一致的方式诱导良好的骨形成
[0237] 实施例 12(08-2973)：
[0238] 研究目标：
[0239] ?比较两种大鼠异位模型：皮下（SQ)对比肌内（頂）移植
[0240] ?评估不同浓度的OGF载体
[0241] 研究设计：
[0242] 12组（η = 3/组）4-5周龄的雄性Long Evans大鼠接受了双边植入物。在这之 中，6个组在胸部中接受了双边皮下植入物（第1-6组）而6个组接受了背部的肌内植入 物（第7-12组）。两组手术植入物（对照）含有125 μ 1的谷氨酸盐缓冲液中的伴随25mg BBC (骨架）的5 μ g BMP-2 (信号）。10种手术植入物含有150 μ 1的不同载体中的伴随25mg BBC (骨架）的5 μ g BMP-2 (信号）。在移植后第14天将所有大鼠经0)2室息处死，并收取 植入物。
[0243] 研究设计详情如下表16中所示。
[0244] 表16 :研究设计
[0246] 评估：
[0247] 收取植入物，在40%酒精中固定，包埋于甲基丙烯酸甲酯中，以约5微米切片并用 苏木素和伊红（H&E)及甲苯胺蓝染色。
[0248] 组织病理学分析由Kuber Sampath(Genzyme)进行，并包括用表17中所示记分系 统对植入物中新骨产生进行半定量评定。
[0249] 表17 :新骨产生的记分系统
[0251] 结果：
[0252] 数据如表18和图18所示。
[0253] 表18 :组织学分数表
[0254]
[0255] ?两个模型的新骨产生的分数之间没有差异。
[0256] ?具有不同普朗尼克F-127浓度的制剂显示出相似的组织学分数并且与对照是相 似的。
[0257] ?用2. 5% HA和Hylan A的植入物与对照相比具有较低的组织学分数。
[0258] 结论：
[0259] ?植入到皮下和肌内植入部位中的制剂对所有载体显示出相当的成骨诱导分数。
[0260] ?所有普朗尼克载体都诱导与阳性对照相似水平的骨形成，而两种HA载体诱导比 阳性对照更少的骨形成。
[0261] 实施例 13(09-4064)：
[0262] 研究目标：
[0263] ?造影剂的效果
[0264] ?评价聚合物浓度
[0265] ?评价载体OGF比率
[0266] ?评价多种载体
[0267] 研究设计：
[0268] 10组（η = 4/组）4_5周龄的雄性Long Evans大鼠在胸部中接受了双边皮下植 入物。手术植入物具有150 μ 1的体积并含有0或10 μ g BMP-2 (信号）、25mg的牛骨胶原 (BBC，批号#17075-183,骨架）和不同类型的载体。
[0269] 研究设计详情如表19中所示。在第14天将所有大鼠经0)2室息处死，并获取样 本用于分析。
[0270] 表19 :研究设计
[0272] 评估：
[0273] 在尸检之时从每个测试部位收集样品。
[0274] 将每个样品且为两块。一半的样品于10%福尔马林中固定，包埋在石蜡中，以约5 微米切片，并用苏木素和伊红（H&E)染色。
[0275] 组织病理学评估包括对样品中新软骨和骨形成的定量和半定量评估，所述评估使 用表20中所示的记分系统。还根据表21对每个样品的新骨/软骨形成的分布模式进行记 分（建新公司病理学部，Lucy Phillips, B. V. Sc.，A. C. V. P)。
[0276] 表20 :新骨/软骨产生的记分系统
[0279] 表21 :新骨/软骨产生的分布模式
[0281] 清除另一半样品的附着组织。将样品置于2ml的冰冷的0. 15M NaCl/3mM NaHCO3中，然后用Polytron匀浆器进行匀浆。然后将其离心，把上清倒出。
[0282] 在5ml的20mM磷酸盐缓冲液中将残基洗涤两次，然后在5ml的0. 6N HCL中4°C提 取过夜。然后将其离心，倒出上清并进行妈分析。在Varian ICP-OES上于396nm发射光处 分析样品（建新公司分析研发部，Martin Hanus)。
[0283] 结果：
[0284] 组织病理学评估
[0285] 病理学分数的散点图如图19中所示。
[0286] ?将普朗尼克F-127浓度增加至30%对中位新骨/软骨分数没有影响（P>0. 05)。
[0287] ?添加20%或80% Isovue - 370至22. 5%普朗尼克F-127载体对中位新骨/软 骨分数没有影响（P>〇. 05)。
[0288] ?添加2. 5%或5% HA至普朗尼克F-127趋向于较低的中位新骨/软骨分数，尽管 其并无统计学显著性（P>〇. 05)。
[0289] ?单独DGE或添加至普朗尼克F-127趋向于较低的中位新骨/软骨分数，尽管其并 无统计学显著性（P>〇. 05)。
[0290] ?Prevelle丝趋向于较低的中位新骨/软骨分数，尽管其并无统计学显著性 (Ρ>0· 05) 〇
[0291] ?含有普朗尼克F-127、普朗尼克F-127+Isovue 370或普朗尼克F-127+HA的组， 倾向于具有贯穿整个植入物的"实心的（solid) "骨分布或是具有混合模式，所述混合模式 中存在实心区域（模式C)和围绕增殖的间充质细胞的中心病灶的环边形成区域（模式B) 二者。
[0292] ?含有DGE或Prevelle丝的组倾向于形成围绕中心腔体区域的新骨的环边，所述 中心腔体区域含有BBC骨架和DGE/Prevelle丝材料（模式D&E)。
[0293] 钙评价
[0294] ?载体中增加的HA/F-127浓度不导致Ca浓度的任何差异。
[0295] ?添加20%或80% Isovue至22. 5%普朗尼克F-127对Ca浓度没有影响。
[0296] ?含有普朗尼克F-127的植入物（第2-7和10组）具有比没有普朗尼克F-127的 植入物更高的钙浓度（第8&9组）。
[0297] 结论：
[0298] ?含有植入物的普朗尼克F-127趋向于具有主要为实心的新骨/软骨分布模式，然 而DGE或Prevelle丝植入物经常具有环绕中心腔体区域形成的新骨环边，所述中心腔体区 域含有骨架和载体。
[0299] ?当添加 HA或DGE至普朗尼克F-127时，或当DGE或Prevelle丝用作唯一载体 时，植入物中的新骨/软骨产生趋向于较低。
[0300] ?添加20%或80% Isovue至22. 5%普朗尼克F-127载体对成骨诱导潜力没有影 响。
[0301] ?含有普朗尼克F-127的植入物（第2-7和10组）具有比没有普朗尼克F-127的 植入物更高的钙浓度（第8&9组）。
[0302] 实施例 14(09-4063)：
[0303] 研究目标：
[0304] 1.评估多种胶原
[0305] 2.造影剂的效果
[0306] 3.评估软骨粒径
[0307] 4.评估软骨质量（mass)的效果
[0308] 5.使用真皮凝胶提取物（DGE)评估大鼠异位模型中的OGF
[0309] 6.评估多种载体
[0310] 研究设计：
[0311] 12组（η = 4/组）4-5周龄的雄性Long Evans大鼠在胸部接受了双边皮下植入 物。
[0312] · 10 个组接受了含有 0-10 μ g BMP-2 (信号）、150 μ I PBS 中的 22. 5% PlultMe.? F-127 (载体）和不同量和类型的骨胶原（骨架）的植入物。
[0313] · 1 组接受 了含有 3yg BMP-2(信号）、150μ1 22.5% Pluronic/80% Isovue 370 (载体）和25mg BBC (骨架）的植入物。
[0314] · 1组接受了含有150 μ I DGE (载体）中的50 μ g BMP-2 (信号）的植入物。
[0315] 研究设计详情如下表22中所示。
[0316] 在第14天将所有大鼠经0)2室息处死，并获取样本用于分析。
[0317] 表22:研究设计
[0319] 评估：
[0320] 将每个样品切成两块。一半的