[0039] 在各种方面中，根据本公开的表达载体还包含3' CHEFl转录调控DNA。在各种实施 方案中，3'CHEFl转录调控DNA包含在SEQ ID NO: 3中列出的多核苷酸。本公开还提供与在 SEQ ID N0:3中列出的多核苷酸至少99%、至少98%、至少97%、至少96%、至少95%、至 少94%、至少93%、至少92%、至少91 %、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%或至 少70 %相同的3' CHEFl转录调控DNA。在各种实施方案中，3' CHEFl转录调控DNA包含位于 SEQ ID NO: 3的位置1与位置4180之间的DNA，即，SEQ ID NO: 3的一部分。本公开还提供 与位于SEQ ID NO:3中的位置1与位置4180之间的DNA至少99%、至少98%、至少97%、 至少96%、至少95%、至少94%、至少93%、至少92%、至少91 %、至少90%、至少85%、至 少80%、至少75%或至少70%相同的3'CHEFl转录调控DNA，即，SEQ ID N0:3的一部分。 在各种方面中，3' CHEFl转录调控DNA包含位于SEQ ID NO: 3中的位置1与位置209之间 的DNA。本公开还提供与位于SEQ ID NO: 3中的位置1与位置209之间的DNA至少99%、 至少98%、至少97%、至少96%、至少95%、至少94%、至少93%、至少92%、至少91 %、至 少90 %、至少85 %、至少80 %、至少75 %或至少70 %相同的3' CHEFl转录调控DNA。在各 种实施方案中，3' CHEFl转录调控DNA可以包含约4. 2千碱基。
[0040] 在各种实施方案中，根据本公开的表达载体包含CHEFl转录调控DNA元件和CMV 启动子。在各种方面中，CMV启动子包括在SEQ ID N0:4中列出的多核苷酸。本公开还提供 与在SEQ ID N0:4中列出的多核苷酸至少99%、至少98%、至少97%、至少96%、至少95%、 至少94%、至少93%、至少92%、至少91 %、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%或 至少70%相同的CMV启动子。在各种方面中，所述表达载体包含5' CHEFl转录调控DNA和 CMV启动子，并且不含在SEQ ID NO:6中列出的多核苷酸。本公开还提供与在SEQ ID NO:6 中列出的多核苷酸至少99%、至少98%、至少97%、至少96%、至少95%、至少94%、至少 93%、至少92%、至少91 %、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%或至少70%相同的 5' CHEFl转录调控DNA和CMV启动子。在各种实施方案中，表达载体包含CHEFl转录调控DNA 和AdTPL序列。在各种方面中，AdTPL序列包含在SEQ ID N0:5中列出的多核苷酸。本公 开还提供与在SEQ ID N0:5中列出的多核苷酸至少99%、至少98%、至少97%、至少96%、 至少95%、至少94%、至少93%、至少92%、至少91 %、至少90%、至少85%、至少80%、至 少75 %或至少70 %相同的AdTPL序列。在各种实施方案中，表达载体包含CHEFl转录调控 DNA、CMV启动子以及AdTPL序列。在各种方面中，表达载体包含含有在SEQ ID NO: 7中列 出的多核苷酸的5' CHEFl转录调控DNA、CMV启动子以及AdTPL序列。本公开还提供与在 SEQ ID N0:7中列出的多核苷酸至少99%、至少98%、至少97%、至少96%、至少95%、至 少94%、至少93%、至少92%、至少91 %、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%或至 少70%相同的5' CHEFl转录调控DNA、CMV启动子、以及AdTPL序列。
[0041] 在各种实施方案中，CMV启动子和/或AdTPL序列被插入根据本公开的表达质粒 的5'CHEFl转录调控DNA。在各种实施方案中，在包含有SEQ ID NO: 1中列出的DNA的表 达载体中，SEQ ID NO: 1的位置1与位置11，716之间的一个或多个碱基缺失和代替为CMV 启动子和/或AdTPL序列。在各种实施方案中，用CMV启动子和/或AdTPL序列代替近侧 5' CHEFl启动子区。举例而言且并非限制，在各种方面中，用CMV启动子、AdTPL序列或CMV 启动子和AdTPL序列缺失和代替SEQ ID NO: 1的位置10, 512与位置11，716之间的一个或 多个碱基。
[0042] 根据本公开的表达载体还包含编码目标蛋白质的多核苷酸。在各种方面中，多核 苷酸可操作地连接至5' CHEFl转录调控DNA、3' CHEFl转录调控DNA、CMV启动子和/或AdTPL 序列。表达载体可用于任何蛋白质并且旨在提供比单独CHEFl或CMV更高的蛋白表达。在 各种方面中，表达载体还包含选择性标记基因以用于鉴定转化的细胞。合适的选择性标记 基因的实例包括但不限于：新霉素磷酸转移酶（npt II)、潮霉素磷酸转移酶（hpt)、二氢叶 酸还原酶（dhfr)、博来霉素（zeocin)、腐草霉素（phleomycin)、争光霉素抗性基因（ble)、 庆大霉素乙酰基转移酶、链霉素磷酸转移酶、乙酰乳酸合酶突变形式（als)、溴苯腈腈水解 酶、草胺膦乙酰基转移酶（bar)、烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸（EPSP)合酶（aro A)、肌肉特异 性酪氨酸激酶受体分子（MuSK-R)、铜锌超氧化物岐化酶（sodl)、金属硫蛋白（cupl，MTl)、 β -内酰胺酶（BLA)、嘌呤霉素 N-乙酰基-转移酶（pac)、杀稻瘟菌素乙酰转移酶（bis)、 杀稻瘟菌脱氨酶（bsr)、组氨醇脱氢酶（HDH)、N-琥珀酰-5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸 (SAICAR)合成酶（adel)、精氨基琥珀酸裂解酶（arg4)、β-异丙基苹果酸脱氢酶（leu2)、 转化酶（suc2)、乳清酸核苷-5'-磷酸（OMP)脱羧酶（ura3)和前述标记蛋白中任一者的直 系同源物。
[0043] 本公开还提供用表达载体转化、转导或转染的宿主细胞，所述表达载体包含CHEFl 转录调控DNA和CMV启动子和/或AdTPL序列。在各种方面中，宿主细胞是原核细胞或真 核细胞。在各种方面中，宿主细胞是仓鼠细胞。在各种方面中，仓鼠细胞是CHO细胞。在各 种实施方案中，宿主细胞是非仓鼠哺乳动物细胞，并且在各种方面中，所述细胞是人细胞。
[0044] 鉴于前文描述来设想的实施方案包括但不限于以下编号的实施方案：
[0045] 1. 一种表达载体，其包含中国仓鼠延长因子-la (CHEFl)转录调控DNA和巨细胞 病毒（CMV)启动子和/或腺病毒三联前导（AdTPL)序列。
[0046] 2.实施方案1所述的表达载体，其中CHEFl转录调控DNA包含5' CHEF转录调控 DNA0
[0047] 3.实施方案2所述的表达载体，其中所述5' CHEFl转录调控DNA包含序列ID NO: 1 或与序列ID NO: 1至少95%相同的多核苷酸。
[0048] 4.实施方案2所述的表达载体，其中所述5' CHEFl转录调控DNA包含位于序列 ID NO: 1中的位置1与位置11，716之间的DNA，或与位于序列ID NO: 1中的位置1与位置 11，716之间的DNA至少95 %相同的多核苷酸。
[0049] 5.实施方案4所述的表达载体，其中所述5' CHEFl转录调控DNA包含位于序列ID NO: 1中的位置10, 774与位置11，716之间的DNA，或与位于序列ID NO: 1中的位置10, 774 与位置11，716之间的DNA至少95%相同的多核苷酸。
[0050] 6.实施方案2所述的表达载体，其中所述5' CHEFl转录调控DNA包含序列ID NO: 2 或与序列ID N0:2至少95%相同的多核苷酸。
[0051] 7.实施方案2所述的表达载体，其中所述5' CHEFl转录调控DNA包含位于序列ID NO: 2中的位置1与位置4057之间的DNA，或与位于序列ID NO: 2中的位置1与位置4057 之间的DNA至少95 %相同的多核苷酸。
[0052] 8.前述实施方案中任一项所述的表达载体，其还包含3' CHEFl转录调控DNA。
[0053] 9.实施方案8所述的表达载体，其中所述3' CHEFl转录调控DNA包含序列ID NO: 3 或与序列ID N0:3至少95%相同的多核苷酸。
[0054] 10.实施方案8所述的表达载体，其中所述3' CHEFl转录调控DNA包含位于序列ID NO: 3中的位置1与位置4180之间的DNA，或与位于序列ID NO: 2中的位置1与位置4180 之间的DNA至少95 %相同的多核苷酸。
[0055] 11.实施方案10所述的表达载体，其中所述3' CHEFl转录调控DNA包含位于序列 ID NO: 3中的位置1至位置209之间的DNA，或与位于序列ID NO: 3中的位置1至位置209 之间的DNA至少95 %相同的多核苷酸。
[0056] 12.实施方案8-11中任一项所述的表达载体，其中所述3' CHEFl转录调控DNA包 含约4. 2千碱基。
[0057] 13.前述实施方案中任一项所述的表达载体，其包含CMV启动子。
[0058] 14.前述实施方案中任一项所述的表达载体，其包含AdTPL序列。
[0059] 15.前述实施方案中任一项所述的表达载体，其包含CMV启动子和AdTPL序列。
[0060] 16.实施方案2所述的表达载体，其中所述5' CHEFl转录调控DNA包含在序列ID 勵:1中列出的0嫩，其中序列10勵:1中的位置1与位置11，716之间的一个或多个碱基缺 失和代替为CMV启动子和/或AdTPL序列。
[0061] 17.实施方案16所述的表达载体，其中位于序列ID NO: 1中的位置10, 512与位置 11，716之间的一个或