998, 53, 1216 ；3)Chem.Pharm. Bull. 1992, 40, 1481 ；4)Chem.Heterocycl.Compd. 2002, 38, 539〇
[0280]方案lb
[0281]
[0282] 可选择地，如在方案lb中所示，可使用标准酰胺键或肽键形成偶联试剂使胺 2与酸3偶联。本领域有机化学家知晓用于酰胺键偶联的许多试剂并且几乎所有这些 试剂可用于实现偶联的酰胺产物。EDAC和三乙胺在四氢呋喃或B0PC1中以及二异丙基 乙胺在氯仿中的组合已被最频繁地使用，而DEPBT或其它偶联试剂诸如PyBop也可使 用。其它有用的偶联条件采用拟1'1]((&)丄0^111.5〇(3.〇16111(：〇_.1994,201 ;〇3)工八111· Chem.Soc. 1994, 116, 11580)。此外，DEPBT(3-(二乙氧基磷酰氧基）-1，2, 3-苯并三 嗪-4(3H)_酮）和N，N-二异丙基乙胺，通常称为许尼希碱，代表了形成酰胺键且提供式I 化合物的另外的有效方法。DEPBT可购自Aldrich或根据在OrganicLett.，1999, 1，91中 所述的操作制备。通常，可使用惰性溶剂诸如DMF或THF，而也可使用其它非质子溶剂。
[0283] 实施例
[0284] 以下实施例说明了如上文一般性描述的式I化合物的典型合成法。这些实施例仅 是说明性的，并且不是以任何方式限制本发明。对于本领域普通技术人员而言这些试剂和 起始物质是容易得到的。
[0285] 化学实验
[0286]所诜实施例的典铟橾作和表征：
[0287] 除非另有说明，溶剂和试剂是在从商业来源所获得时的状态直接使用的，在氮气 气氛下进行反应。在硅胶60(0. 040-0. 063粒度；EMScience提供）上进行快速色谱。1HNMR光谱在BrukerDRX-500f上以 500MHz记录（或者BrukerDPX-300B或VarianGemini300 上以300MHz记录，根据所描述的）。化学位移以ppm记录，δ标尺相对于δTMS= 0而言。 以下内参比用于以下溶剂中的残余质子：CDC13〇h 7. 26)、CD3OD〇h 3. 30)和DMS0-d6〇H 2. 50)。标准首字母缩略词用于描述多重性模式：s(单峰），d(双重峰），t(三重峰），q(四 重峰），m(多重峰），b(宽峰），app(表观）。偶合常数（J)以赫兹给出。所有液相色谱（LC) 数据是在ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上使用SPD-10AVUV-Vis检测器及质谱记录的，并 且质谱（MS)数据测定使用电喷雾模式的LC的Micromass平台。
[0288] HPLC方法（即化合物分离）
[0289] 经制备性HPLC纯化的化合物稀释于甲醇（1.2mL)并使用Shimadzu LC-8A或 LC-10A自动化制备性HPLC系统纯化。
[0290] 所选实施例的典型操作和表征：
[0291] 中间体AC0C00H或AC0C0C1:
[0292] 中间体AC0C00H或AC0C0C1的制备描述于先前公开的申请（W. Blair, et al.W0-200076521，0· Wallace, et al W0-200204440，T· Wang, et al.W0-200162255和 T. Wang, et al. TO-2002062423)。AC0C00H的某些实例如下列出。
[0293]
[0294] 制备式I的一般橾作：
[0295] A)
[0296]
[0297] 将2-酮基酸（1当量）、胺（1-5当量）、3_(二乙氧基磷酰氧基）-1，2,3_苯并三 嗪-4 (3H)-酮（DEPBT)或0-(1H-苯并三唑-1-基）-N，N，Ν'，Ν'-四甲基脲鑰六氟硼酸盐 (TBTU) (1-5当量）或（2-(7-氮杂-1Η-苯并三唑-1-基）-1，1，3, 3-四甲基脲鑰六氟磷酸 盐）（HATU) (1 - 5当量）和许尼希碱或N-甲基吗啉（1-100当量）混合于THF或DMF中。将 混合物在室温或115°C搅拌17小时。将THF或DMF经减压蒸发除去并将残留物在乙酸乙 酯和饱和的NaHC(yK溶液之间分配。将水层用乙酸乙酯萃取。合并有机相并经无水MgS04 干燥。真空浓缩得到粗产物，将其经滴定或重结晶或硅胶柱色谱法或Shimadzu自动化制备 性HPLC系统纯化。
[0298] B)
[0299]
[0300] 将2-酮基酰基氯（1当量）、胺（1-5当量）和许尼希碱或Et3N(l-100当量）在 THF或DMF中混合。将混合物在室温或115°C搅拌17小时。将THF或DMF经减压蒸发除去 并将残留物在乙酸乙酯和饱和NaHOVK溶液之间分配。将水层用乙酸乙酯萃取。合并有 机相并经无水MgS04干燥。真空浓缩得到粗产物，将其经滴定或重结晶或硅胶柱色谱法或 Shimadzu自动化制备性HPLC系统纯化。
[0301]
[0328] 化合物2001的合成：
[0329]步骤1:
[0330]
[0331] 在氮气气氛下在P将溴化氰（22g)缓慢加入至苯胺（10g)在无水乙醚（150mL)中 的经搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌约3小时。将反应混合物经硅藻土填料滤过并 用乙醚（3x20mL)洗涤。将滤液减压浓缩得到粗的N-苯基氨基氰（8g)，其为棕色液体，其 无需纯化即可用于下一步反应。1HNMR(DMS0-d6):δ6. 97-7. 03(m，3H)，7. 30-7. 36(m，2H), 10. 13(bs, 1H)。MS:117. 2(M-1)+。
[0332]步骤2:
[0333]
[0334] 在氮气气氛下在0°C向N-苯基氨基氰（8g)在无水乙醚（50mL)中的经搅拌溶液中 缓慢加入HC1在无水乙醚中的溶液（20mL)。将反应混合物在室温搅拌约30分钟。将析出的 盐经布氏漏斗滤过并在氮气气氛下用乙醚（3x20mL)洗涤。将N-苯基氨基氰的盐酸盐吸收 于无水乙醇（100mL)中，在氮气气氛下缓慢加入钯/碳（2g)。使用气囊将反应混合物在氢 气气氛下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物经硅藻土填料滤过并用甲醇（3x20mL) 洗涤。将滤液减压浓缩得到预期的N-苯基甲脒（7g)，其为无色液体。MS:119. 1(M-1)+。
[0335]步骤 3:
[0336]
[0337] 在氮气下在0°C向N-苄基氮杂革酮（5g)在无水乙醚（50mL)中的经搅拌溶液中 缓慢加入HC1在无水乙醚中的溶液（20mL)。将反应混合物在室温搅拌约30分钟。将析出 的盐经布氏漏斗滤过并在氮气气氛下用乙醚（3x20mL)洗涤。将N-苄基氮杂蕈酮的盐酸 盐吸收于乙酸（15mL)和HBr在乙酸（15mL)中的混合物中，然后在氮气气氛下缓慢加入溴 (4g)。将反应混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩除去挥发物并将残留物 用乙醚（10mL)稀释。析出固体，倾析溶剂并重复进行操作三至四次。将固体减压干燥得 到1-苄基-5-溴-2, 3, 6, 7-四氢-1H-氮杂革-4-醇的HBr盐（9g)，其无需任何纯化即可 进一步使用。4NMR(DMS0-d6) :δ2. 6-2. 95 (m, 3H)，3. 05-3. 17 (m, 1H)，3. 25-3. 41 (m, 1H)， 3· 45-3. 60 (m，2H)，4· 43-4. 48 (m，2H)，5· 12-5. 19 (m，1H)，7· 34-7. 55 (m，5H)，9· 96-10. 09 (bs, 1H)。MS:284. 2(M+1)+。
[0338]步骤 4:
[03391
[0340] 在氮气气氛下将金属钠（1.6g)缓慢加入至无水乙醇（lOOmL)中。将反应混合物 在室温搅拌直到所有金属钠溶解，之后加入N-苯基甲脒（4g)，随后在氮气气氛下加入1-苄 基-5-溴-2, 3, 6, 7-四氢-1H-氮杂萆-4-醇（10g)。将反应混合物在80°C在氮气气氛 下搅拌16小时，之后冷却至室温。将反应混合物减压浓缩除去乙醇并将残留物用冰冷的 水（50mL)稀释。将产物用乙酸乙酯（3x50mL)萃取并将合并的有机层用盐水（50mL)洗 涤。将有机层经无水Na2S04干燥并使用旋转蒸发仪浓缩。将所得的粗产物经柱色谱（使用 MeOH/CHCl3 (0. 3:9. 7)作为洗脱剂）纯化得到6-苄基-1-苯基-1，4, 5, 6, 7, 8-六氢咪唑并 [4, 5-d]氮杂蕈（700mg)，其为棕色液体。1HNMR(DMS0-d6) :δ2. 59-2. 62 (m, 2H)，2. 75-2. 8 3 (m，6H)，3· 76 (s，2H)，7· 24-7. 30 (m，1H)，7· 32-7. 38 (m，2H)，7· 44-7. 50 (m，4H)，7· 50-7. 52 ( m，1H)，7· 52-7. 54 (m，2H)，7· 59 (s，1H)。MS: 304. 2 (M+l)+。
[0341]步骤 5:
[0342]
[0343] 在氮气气氛下向6-苄基-1-苯基-1，4, 5, 6, 7, 8-六氢咪唑并[4, 5_d]氮杂革 (〇.65g)在无水甲醇（20mL)中的经搅拌溶液中缓慢加入氢氧化钯（0.3g)。将反应混合物 在3kg压力在氢气气氛下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物经硅藻土填料滤过并 用甲醇（3x20mL)洗涤。将滤液减压浓缩得到预期的1-苯基-1，4, 5, 6, 7, 8-六氢咪唑并 [4, 5-d]氮杂輩:（160mg)，其为棕色固体。1HNMR(DMS0-d6) :δ2. 57-2. 61 (m, 2H)，2. 79-2. 8 5 (m，2H)，3· 56-3. 61 (m，2H)，3· 79-3. 85 (m，2H)，7· 35-7. 38 (m，2H)，7· 44-7. 51 (m，3H)，7· 65(s，1H) 〇MS:213. 2(Μ+1)+〇
[0344]步骤6:
[0345]
[0346]向 2- (4-甲氧基-7- (3-甲基-1H-1, 2, 4-三唑-1-基）-1H-吡咯并[2, 3-c] 吡啶-3-基）-2-氧代乙酸（200mg)在无水DMF(5mL)中的经搅拌溶液中加入1-苯 基-1,4, 5, 6, 7, 8-六氢咪唑并[4, 5-d]氮杂.蕈（150mg)在无水二氯甲烧（5mL)中的溶 液、2-氯-1，3-二甲基咪唑鑰氯化物（54mg)和iPr2NEt(0. 5mL)。将反应混合物在室温 搅拌16小时，之后将溶剂减压除去。将所得的油状物用二氯甲烷（50mL)稀释，用10% NaHC03(10mL)和盐水（10mL)洗涤。将有机层经无水Na2S04干燥并使用旋转蒸发仪浓 缩。将所得的粗品经柱色谱（使用Me0H/CHCl3(1.0:9.0)作为洗脱剂）纯化得到化合 物 2001 (30mg)，其为白色固体。1HNMR(400MHz,DMS0-d6) :δ2. 50 (s, 3H)，2. 70-2. 73 (t, 1H)，2· 76-2. 78 (t，1H)，2· 88-2. 95 (m，2H)，3· 63-3. 65 (t，2H)，3· 82-3. 84 (m，2H)，3· 94 (s， 3H)，7. 35 - 7. 59 (m，5H)，7. 68 (s，1H)，7. 86-7. 87 (d，1H)，8. 19-8. 22 (d，1H)，9. 23 (s，1H)，12 ? 37(bs，1H)。MS:497. 2(M+1)+。
[0347] 实施例的生物学数据
[0348] ."μΜ"表示微摩尔；
[0349] ."mL"表示毫升；
[0350] ."μ1"表示微升；
[0351] ?"mg"表示毫克；
[0352] 用于获得表1所报道的结果的物质和试验操作描述于下文。
[0353]细胞：
[0354] ·病毒制备-伸人怀肾细朐系293T(HEK293T)繁殖于Dulbecco's改良Eagle 培养基（11^;[1：1'08611，031'18匕3(1，0六）中，该培养基中含有10%胎牛血清（?133,3丨81]^，31:· Louis，M0)。人T细胞白血病细胞MT2(AIDSResearchandReferenceReagent Program,Cat. 237)繁殖于RPMI1640(Invitrogen,Carlsbad,CA)中，其含有 10%胎牛血清 (FBS,Hyclone,Logan,UT) 〇
[0355] ?病毒感染-通讨用表汰HIV-1LAI包膜的质粒以及含有HIV-1LAI前病毒cDNA的 质粒（其中包膜基因被荧火虫萤光素酶报道基因替换）来共转染HEK293T细胞，以制备单 圆感染报道子病毒（Chenetal·，Ref. 41)。使用制造商（Invitrogen,Carlsbad,CA)描述 的LipofectAMINEPLUS试剂进行转染。
[0356] 试验操作
[0357] 1.使MT2细胞接种于黑色384孔板中，细胞密度为5X103个细胞/孔，在含有10% FBS的 25μ1RPMI1640 中。
[0358] 2.将化合物（稀释于二甲基亚砜和生长培养基中）以12. 5μ1/孔加入至细胞中， 使最终测定浓度为彡50ηΜ。
[0359] 3.将12. 5μ1的在Dulbecco's改良Eagle培养基中的单圆感染报道子病毒加至 接种的细胞和化合物中，约〇. 01的感染复数（Μ0Ι)，使最终体积为50μ1/孔。
[0360] 4.使病毒感染的细胞在37°C的C02温育器中温育，感染之后72h收获。
[0361] 5.如制造商描述的，使用萤光素酶报道基因测定试剂盒 (Steady-Glo,Promega，Madison,WI)，通过测量感染细胞中荧光素酶表达来监测病毒感染。 然后使用EnVisionMultilabel板读取器（PerkinElmer,Waltham,MA)，通过测量焚光来定 量荧光素酶活性。
[0362] 6.通过以下方式计算每种化合物的抑制百分数：对在每种化合物存在时感染的 细胞中荧光素酶表达的水平定量为不存在化合物时感染的细胞观察到的百分数，再用100 减去此测定的值。
[0363] 7.EC5。提供了比较本发明化合物抗病毒效能的方法。用MicrosoftExcelXlfit 曲线拟合软件计算50%抑制的有效浓度（EC5。）。对于每一种化合物，通过使用四参数逻辑 模型（模型205)，以10种不同浓度计算的抑制百分数生成曲线。化合物的EC5。数据显示 于表2中。表1是表2中的数据的索引。
[0364] 表1.EC5。的索引生物学数据
[0365]
[0372] 前文描述仅仅是说明性的，并且不应理解为以任何方式限制本发明的范围或基本 原则。事实上，除了本文显示和描述的那些以外，对于本领域技术人员而言，根据实施例和 前文描述，本发明的各种修改都是显而易见的。这些修改也将落入所附权利要求书的范围 内。
【主权项】
1. 一种或多种式I化合物，包括其药用盐： 其中A选自：其中 a、b、c、d和 e 独立选自氢、卤素、氰基、硝基、C00R56、XR57、NAT、C (0) R7、C (0) NR55R56、B、 Q和E ; B 选自-C( = NR46) (R47)、C(0)NR4°R41、芳基、杂芳基、杂脂环基、S(0) 2Rs、S(0)2NR4°R41、 C(0)R7、XRSa、（C16)烷基NR4°R 41、（C16)烷基C00Rsb;其中所述芳基、杂芳基和杂脂环基任选 取代有一至三个相同或不同的卤素或一至三个相同或不同的选自基团F的取代基；其中所 述芳基为萘基或经取代的苯基；其中所述杂芳基为单环或二环系统，对于单环系统而言其 含有3至7个环原子且在稠合的二环系统中含有至多12个环原子，所述环原子包括1至4 个杂原子；其中所述杂脂环基为3至7元单环，其可在环骨架中含有1至2个杂原子且其可 稠合至苯或吡啶环； Q选自扣6)烷基、（C3 7)环烷基和（C2 6)烯基；其中所述（Q 6)烷基和（C2 6)烯基任 选取代有一至三个相同或不同的卤素或一至三个相同或不同的选自以下的取代基：c(0) NR55R56、羟基、氰基和XR57; E选自（Q 6)烷基、（C3 7)环烷基和（C2 6)烯基；其中所述（Q 6)烷基和（C2 6)烯基独立 地任选取代有选自以下的成员：苯基、杂芳基、SMe、SPh、-C(0)NR56R57、C(0)R 57、S0JQ 6)烷 基和S02Ph ;其中所述杂芳基为单环系统，其含有3至7个环原子，所述环原子包括1至4个 杂原子； F选自（Q 6)烷基、（C3 7)环