离心力进行离心分离15min，所得上清液即为前萃液。
[0020]按GB/T-500915-2003测得其蛋白质(NX 6.25)含量为0.0203g，菜籽蛋白的提取率为 81.17%ο
[0021](4)真空浓缩:
将上述前萃液在旋转蒸发器上蒸发，回收异辛烷，得到固形物。旋转蒸发的温度、真空度和转速分别控制为50°C、0.1Mpa和100r/s。
[0022](5)加入缓冲溶液，得到后萃液，萃取分离:
KC1缓冲溶液配制:称取110.8g十二水合瞵酸氢二钠，9.07g磷酸二氢钾，均配制成1L的溶液，分别取190mL和10mL混合均匀，再取11.133g KC1加入上述混合液中，使其完全溶解，得到pH为9，K+浓度为0.75mol.L 1的KC1缓冲溶液。
[0023]向固形物中加入25mL上述K+浓度为0.75mol.L 1的KC1缓冲溶液，磁力搅拌使剩余的固形物完全溶解。加入浓度为10% (v/v)的乙醇lmL，然后置于30°C恒温振荡器中振荡至溶液充分混匀，接着以1800Xg的相对离心力离心20min。
[0024]分液漏斗分层后取下层水相，以GB/T-5009.5-2003凯氏定氮法测其中的蛋白质(NX6.25)含量为0.0112g，计算蛋白质后萃取率为55.2%。
[0025]实施例2:
(1)菜籽柏粉的制备:
选用2008年产优质双低油菜籽，于砻谷机上进行脱壳处理，处理后进行风选。将脱壳后的菜籽于锤式旋风磨上进行粉碎，粉碎后过80目筛。于索式抽提器上用石油醚(30-60°C沸程)在50°C对粉碎后菜籽进行脱油处理，处理后放置在通风处进行脱溶，使石油醚挥发完全。再通风干燥，所得即为试验所需菜籽柏粉，测其蛋白质(NX6.25，干基)含量为45.6% ο
[0026](2)反胶束溶液的配制
KC1缓冲溶液配制:制备0.2mol.L 1的磷酸氢二钠溶液和0.lmol.L 1的柠檬酸溶液各1L,分别取10.30mL和9.70mL混合均匀。再取0.1193g氯化钾加入上述混合液中，使其完全溶解，得到pH为5，K+浓度为0.08mol.L 1的KC1缓冲溶液。
[0027]称取3g表面活性剂气溶胶0T，置于250mL的锥形瓶中，加入50mL异辛烧，磁力搅拌使表面活性剂完全溶解，待溶液透明后，加入上述KC1缓冲溶液，使反胶束溶液的W。值为33。然后置于30°C恒温振荡器中振荡至溶液充分混匀，接着以2000Xg的相对离心力离心15min，若透明则为反胶束溶液，反之则不是(底层少量水对体系影响不大)。
[0028](3)反胶束溶液提取菜籽蛋白，获得前萃液:
取上述反胶束溶液50mL，加入0.501g菜籽柏粉于锥形瓶，置于超声波清洗器中，频率40KHz，功率90KW，以20°C提取120min。以3600Xg的相对离心力进行离心分离lOmin，所得上清液即为前萃液。按GB/T-5009.5-2003测得其蛋白质(NX6.25)含量为0.1874g。菜籽蛋白的提取率为82.01%。
[0029](4)真空浓缩:
将上述前萃液在旋转蒸发器上蒸发，回收异辛烷，得到固形物。旋转蒸发的温度、真空度和转速分别控制为55°C、0.1Mpa和90r/s。
[0030](5)加入缓冲溶液，得到后萃液，萃取分离:
KC1缓冲溶液配制:制备0.2mol.L 1的磷酸氢二钠溶液和0.lmol.L 1的柠檬酸溶液各1L,分别取19.45mL和0.55mL混合均匀。再取1.86g氯化钾加入上述混合液中，使其完全溶解，得到pH为8.0，K+浓度为1.25mol.L 1的KC1缓冲溶液。
[0031]向固形物中加入5mL KC1缓冲溶液，其中钾离子浓度为1.25mol.L \ρΗ为8.0，磁力搅拌使剩余的固形物完全溶解。加入浓度为10% (v/v)的乙醇2mL,然后置于25°C恒温振荡器中振荡至溶液充分混匀，接着以2400Xg的相对离心力离心20min。
[0032]分液漏斗分层后取下层水相，以GB/T-5009.5-2003凯氏定氮法测其中的蛋白质(NX6.25)含量为0.095g，计算蛋白质后萃取率为50.69%。
【主权项】
1.一种提取菜籽蛋白的工艺，其特征在于，包括以下步骤:用反胶束溶液提取菜籽蛋白，得到前萃液，前萃液经真空浓缩，除去反胶束溶液中的有机溶剂后加入缓冲溶液，萃取分离，得到菜籽蛋白的水溶液；用反胶束溶液提取菜籽蛋白，得到前萃液的方法如下: 将菜籽柏粉加入反胶束溶液中，在频率30KHZ、功率120KW超声波作用下40°C萃取80min，然后以3200 Xg的相对离心力进行离心分离20min，得到前萃液，所述反胶束溶液由丁二酸二异辛酯磺酸钠、异辛烷和含K+的缓冲溶液混合而成，所述反胶束溶液中，丁二酸二异辛酯磺酸钠与异辛烷的质量体积比为0.02g/mL, ff0为33，缓冲溶液为KC1的磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲溶液，pH值为11，K+浓度为0.15mol.L \所加入的菜籽柏粉的与反胶束溶液的质量体积比为0.02g/mL。2.如权利要求1所述的提取菜籽蛋白的工艺，其特征在于，前萃液经真空浓缩后加入缓冲溶液后，还加入体积浓度为10%的乙醇水溶液。3.如权利要求1或2所述的提取菜籽蛋白的工艺，其特征在于，所述真空浓缩的方法为旋转蒸发，水浴温度控制在70°C。4.如权利要求3所逑的提取菜籽蛋白的工艺，其特征在于，旋转蒸发后加入的缓冲溶液为KC1的缓冲溶液。5.如权利要求4所述的提取菜籽蛋白的工艺，其特征在于，旋转蒸发后加入的KC1的缓冲溶液pH值7，K+浓度为1.0mol.L、6.权利要求5所述的提取菜籽蛋白的工艺，其特征在于，旋转蒸发后加入的KC1的缓冲溶液为KC1的磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲溶液。
【专利摘要】本发明涉及一种提取菜籽蛋白的工艺，该工艺简单，蛋白质变性程度大大减小，蛋白提取率高，表面活性剂的损失显著降低；节约水资源，并降低工业生产中的能耗。所述的反胶束提取菜籽蛋白的后萃方法为：用反胶束溶液提取菜籽蛋白，得到前萃液，前萃液经真空浓缩，除去反胶束溶液中的有机溶剂后加入缓冲溶液，萃取分离，得到菜籽蛋白的水溶液。用反胶束溶液提取菜籽蛋白的方法如下：将菜籽粕粉加入反胶束溶液中，在超声波作用下迸行萃取，然后经固液分离得到前萃液。所述真空浓缩的方法为旋转蒸发，水浴温度控制在50～70℃。本发明工艺简单，节约资源，生产成本低，操作条件温和，蛋白质提取率高。
【IPC分类】C07K1/30
【公开号】CN105294822
【申请号】CN201410348962
【发明人】周广安
【申请人】周广安
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2014年7月22日