为了进一步说明本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行 描述，但是应当理解，运些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权 利要求的限制。
[0029] 本发明实施例和对比例采用的目标菌株来源于鞍钢四期生化系统曝气池中的活 性污泥，60株氯化物降解菌，其中，目标菌株数量可依情况选择。
[0030] 连施俩I1
[0031] 本实施例用于解释说明本发明所公开的技术方案。
[003引培养液按如下组分配制：2g/L巧樣酸钢，0.9g/L皿2?04,6. 5g/L胞2册04. 12&0， 0. 4g/L(NH4)2S04,0. 2g/LM拆04? %0 ;每IL培养液中加入I血微量元素溶液（微量元素 溶液配制：1 评eS04? 7&0,lgMnS04?&0,0. 25gNa2Mo04 ? 2&0,0.IgHsBO" 0. 25gCuCl2 ? 2&0， 0. 25拉nClz，0.1邑畑4?V03,0. 25gCo(N03)2? 6&0,0.lgNiS04? 6&0)，溶解于 900血蒸馈水中， 加 5血浓&804,20mg氯化钟，补蒸馈水至1000血。
[0033] 显色剂的配制：称取2.Og氨氧化钢（化OH)，溶于50血水中，冷却至室溫。称取 〇.7g舰化钟化I)和LOg舰化隶化gl2)，5g酒石酸钟，溶于水中，然后将此溶液在揽拌下， 缓慢加入到上述50ml氨氧化钢溶液中，用水稀释至100ml。胆于聚乙締瓶内，用橡皮塞或聚 乙締盖子盖紧，于暗处存放，有效期1年。
[0034] 酒石酸钟钢溶液的配制方法：称取50.Og酒石酸钟钢（KNaC^Oe 溶于100mL 水中，摇匀备用。
[0035] 本实施例1氯化物降解菌的高通量筛选方法如下：
[0036] (1)往96孔板中加入上述培养液，每孔加入200y1上述培养液；
[0037] (2)将目标测试菌株接种于步骤（1)中的96孔板中，目标菌株添加量为15iil/ 孔，记录好每个单菌落与96孔板相对应的编号，于30°C培养24h;
[0038] (3)在步骤（2)中每孔中加入显色剂50y1、酒石酸钟钢溶液50y1，显色5min后， 在420nm波长处进行酶标仪的紫外吸收测定，OD值高的孔对应的菌株即为筛选出的氯化物 降解率高的菌株。
[0039] 连施俩I2
[0040] 本实施例用于解释说明本发明所公开的技术方案。
[0041] 和实施例1相比，实施例2的区别在于：实施例2为先接种目标菌株，再添加培养 液。
[0042] 连施俩I3
[0043] 本实施例用于解释说明本发明所公开的技术方案。
[0044] 和实施例1相比，实施例3的区别在于：
[0045] 培养液按如下组分配制：1. 5g/L巧樣酸钢，0. 9g/LKH2PO4,6. 5g/L胞2册〇4? 12&0， 0. 3g/L(畑4)2SO4,0. 25g/LM拆〇4?%0;每IL培养液中加入0. 5血微量元素溶液，90mg氯 化钢，补蒸馈水至1000血。
[0046] 显色剂的配制：称取1.Og氨氧化钢（化OH)，溶于50血水中，冷却至室溫。称取 0.Olg舰化钟化I)和0.Olg舰化隶化gl2)，20g酒石酸钟，溶于水中，然后将此溶液在揽拌 下，缓慢加入到上述50ml氨氧化钢溶液中，用水稀释至100ml。胆于聚乙締瓶内，用橡皮塞 或聚乙締盖子盖紧，于暗处存放，有效期1年。
[0047] 本实施例氯化物降解菌的高通量筛选方法如下：
[0048] (1)将目标测试菌株接种于96孔板中，目标菌株添加量为5y1/孔；
[0049] (2)往该96孔板中加入上述培养液，每孔加入100y1上述培养液；记录好每个单 菌落与96孔板相对应的编号，于40°C培养35h;
[0050] (3)在步骤（2)中每孔中加入显色剂150y1，显色55min后，在420nm波长处进行 酶标仪的紫外吸收测定，OD值高的孔对应的菌株即为筛选出的氯化物降解率高的菌株。
[0051] 连施俩I4
[0052] 本实施例用于解释说明本发明所公开的技术方案。
[0053] 和实施例I相比，实施例4的区别在于：
[0054] 培养液按如下组分配制：2. 5g/L巧樣酸钢，0. 9g/L KH2PO4,6. 5g/L胞2册〇4?12&0， 0. 5g/L(NH4)2S〇4,〇. 15g/L M拆〇4? 7&0 ;每IL培养液中加入1. 5血微量元素溶液，6血浓 H2S〇4,20mg氯化钢，补蒸馈水至1000血。
[00巧]显色剂的配制：称取20.Og氨氧化钢（化OH)，溶于50血水中，冷却至室溫。称取IOg舰化钟化I)和IOg舰化隶化gl2)，l〇〇g酒石酸钟，溶于水中，然后将此溶液在揽拌下， 缓慢加入到上述50ml氨氧化钢溶液中，用水稀释至100ml。胆于聚乙締瓶内，用橡皮塞或聚 乙締盖子盖紧，于暗处存放，有效期1年。
[0056] 本实施例氯化物降解菌的高通量筛选方法如下：
[0057] (1)将目标测试菌株接种于96孔板中，目标菌株添加量为50y1/孔；
[0058] (2)往该96孔板中加入上述培养液，每孔加入300y1上述培养液；记录好每个单 菌落与96孔板相对应的编号，于50°C培养48h;
[0059] (3)在步骤（2)中每孔中加入显色剂200y1和酒石酸钟钢70y1，显色120min后， 在420nm波长处进行酶标仪的紫外吸收测定，OD值高的孔对应的菌株即为筛选出的氯化物 降解率高的菌株。
[0060] 对比例1
[0061] 对上述60株氯化物降解菌使用《水质氨氮的测定纳氏试剂分光光度法》（町 535-2009)测定氯化物降解菌的降解效果。
[0062] 使用酶标仪测定吸光度，其中，仪器的工作原理为朗伯比尔定律。并将实施例1-4 和对比例1测定的氯化物降解菌的降解效果记录在表1和表2中。
[0069] 用excel中的CORREL函数统计表I:实施例1-2的测定结果分别与对比例I的测 定结果的相关系数可达到0. 95,实施例3的测定结果与对比例1的测定的相关系数可达到 0. 95,实施例4的测定结果与对比例1的测定的相关系数可达到0. 94,本发明公开的方法可 W用于快速筛选氯化物降解菌。本发明利用96孔板对比颜色深浅来定性判断氯化物降解 菌株降解性能的高低，并可同时定量菌株对氯化物的降解量，对筛选氯化物降解菌较为灵 敏和准确。
[0070] 对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。 对运些实施例中的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义 的一般原理可W在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发 明将不会被限制于本文所示的运些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相 一致的最宽的范围。
【主权项】
1. 一种氰化物高效降解菌的高通量筛选方法，其特征在于，包括步骤： 51、 配制培养液； 52、 将目标菌株接种于96孔板； 53、 往96孔板添加S1中所配制的培养液； 54、 往96孔板添加显色剂。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标菌株为氰化物降解菌株。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S4显色时间为5-120min;所述 步骤S4还包括：往96孔板添加酒石酸钾钠。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标菌株在所述培养液中培养 24-48h，培养温度为15-38°C，所述培养液的PH为6. 5-8. 0。5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养液按如下组成配制：柠檬酸 钠，1. 5g/L-2. 5g/L;ΚΗ2Ρ04,0· 9g/L;Na2HP04 · 12Η20,6· 5g/L; (NH4)2S04,0. 3g/L-0. 5g/L; MgS04 ·7Η20,0· 15g/L-0. 25g/L;20-200mg/L氰化物；每 1L培养液中加入 0· 5mL-l. 5mL微量 元素溶液。6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述氰化物选自络合氰、有机氰或者是无 机氰中的一种或多种。7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在96孔板的各孔中加入的培养液的添加 量为100-300μL，接种于96孔板的各孔中的目标菌株的添加量为5-50μL，在96孔板的各 孔中加入的显色剂的添加量为100-200μL。8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每100mL显色剂中包含：l-20g氢氧化钠， 0· 01-10g碘化钾，(λ01-10g碘化汞，5-100g酒石酸钾。9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，每100mL显色剂中包含：5-15g氢氧化钠， 0. 5-5g碘化钾，0. 5-5g碘化汞，10-50g酒石酸钾。10. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括步骤S5:在420nm波长处进行酶 标仪的紫外吸收测定。
【专利摘要】本发明公开了一种氰化物高效降解菌的高通量筛选方法，包括步骤：S1、配制培养液；S2、将目标菌株接种于96孔板；S3、往96孔板添加S1中所配制的培养液；S4、往96孔板添加显色剂。与现有技术相比，本发明提供的氰化物高效降解菌的高通量筛选方法能判断氰化物降解菌株降解性能的高低，并能同时定量菌株对氰化物的降解量，能较为灵敏和准确地筛选氰化物降解菌。
【IPC分类】C12Q1/02
【公开号】CN105296589
【申请号】CN201510771191
【发明人】朱希坤, 李丽, 杨德玉, 彭湃
【申请人】沈阳化工研究院有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月11日