0088](5)反应结束后，lOOOOrpm离心lOmin，收集上清液并干燥，得到红法夫酵母抽提物，测得氨基氮得率3.9%。
[0089](6)抽提后得到的沉淀洗涤干净，按25%的固液比分别添加浓度为质量百分比2%、4%和6%的氢氧化钠溶液，于45°C处理3h，lOOOOrpm离心lOmin，将沉淀洗涤干燥，得到葡聚糖。
[0090]通过苯酚-硫酸法测定葡聚糖量，结果如下:2%氢氧化钠的葡聚糖为12.8g,4%氢氧化钠的葡聚糖为10.3g，6%氢氧化钠的葡聚糖为8.6g。
[0091]二、设计三个试验组，碱液处理的温度不同
[0092](1)虾青素的提取和酵母抽提物的制备同步骤一⑴?(5)。
[0093](2)抽提后得到的沉淀洗涤干净，按固液比为25%添加浓度为2%的氢氧化钠溶液，分别于45°C、60°C和75°C处理3h，固液分离，将沉淀洗涤干燥，得到葡聚糖。
[0094]结果如下:45°C的葡聚糖为13.lg, 60°C的葡聚糖为10.9g，75°C的葡聚糖为9.5g。
[0095]三、设计三个试验组，碱液的添加量不同
[0096](1)虾青素的提取和酵母抽提物的制备同步骤一⑴?(5)。
[0097](2)抽提后得到的沉淀洗涤干净，按固液比为12.5%、25%和50%分别加入浓度为2%的氢氧化钠溶液，于45°C处理3h，lOOOOrpm离心lOmin，将沉淀洗涤干燥，得到葡聚糖。
[0098]结果如下:12.5%的葡聚糖为12.lg，25%的葡聚糖为12.9g，50 %的葡聚糖为13.5g0
[0099]四、设计三个试验组，碱液处理的时间不同
[0100](1)虾青素的提取和酵母抽提物的制备同步骤一(1)?(5)。
[0101](2)抽提后得到的沉淀洗涤干净，按固液比为50%加入浓度为2%的氢氧化钠溶液，于45°C分别处理lh、2h和3h，lOOOOrpm离心lOmin，将沉淀洗涤干燥，得到葡聚糖。
[0102]结果如下:反应lh的葡聚糖为14.lg,反应2h的葡聚糖为13.9g，反应3h的葡聚糖为13.5g0
[0103]对比例1
[0104](1)以100mL为体系，水为溶剂，按固液比10 %称取红法夫酵母菌体，分别添加4%、10%和14%的酵母专用破壁酶(购于广西庞博生物工程有限公司)，用3M盐酸调PH4-5，于 50°C、150RPM 反应 6h，灭酶。
[0105](2)反应结束后，lOOOOrpm离心lOmin，将沉淀洗涤干净，得到破壁酵母。
[0106](3)往破壁酵母中添加100ml乙醇，振荡避光提取60min，lOOOOrpm离心lOmin，收集上清，重复提取多次，每次提取60min，直至提取液为无色，得到虾青素液。酶添加量10%的虾青素提取率为22.38%;酶添加量10%的虾青素提取率为26.24%;酶添加量14%的虾青素提取率为22.94%。
[0107]对比例2
[0108](1)以100mL为体系，以水为溶剂，固液比(g:mL) 1:10、1:90、1:150称取酵母湿菌体置于250mL烧杯中，并将烧杯置于冰中，进行超声波破碎。破碎条件:功率38%，超声开4s，超声关5s，总时间15min。
[0109](2)破碎后，lOOOOrpm离心lOmin，并将沉淀洗涤干净，得到破壁酵母。
[0110](3)往破壁酵母中添加100ml乙醇，振荡避光提取60min，lOOOOrpm离心lOmin，收集上清，重复提取多次，每次提取60min，直至提取液为无色，得到虾青素液。固液比为1:10的虾青素提取率为3.1%，固液比为1:90的虾青素提取率为11.5%，固液比为1:200的虾青素提取率为2.5%。
[0111]对比例3
[0112](1)以lmL为体系，固液比(g:mL) 2%称取酵母菌体，添加pH7.0磷酸钠缓冲液，加入同体积的微细玻璃珠，用Mini Beadbeater珠磨机进行细胞破碎。破碎条件:2500RPM，30s，破碎次数16次。
[0113](2)破碎后，lOOOOrpm离心lOmin，将沉淀洗涤干净，得到破壁酵母。
[0114](3)往破壁酵母中添加5ml乙醇，振荡避光提取60min，lOOOOrpm离心lOmin，收集上清，重复提取多次，每次提取60min，直至提取液为无色，得到虾青素液，从沉淀中取出玻璃珠洗净回收利用。得到虾青素提取率为74.5%。
[0115]对比例4
[0116](1)以5mL为体系，固液比(g:mL) 2%称取酵母菌体，添加pH7.0磷酸钠缓冲液，用高压均质机(Constant systerm LID)进行破碎，破碎条件:功率18kpsi，破碎次数5次。
[0117](2)破碎后，lOOOOrpm离心lOmin，将沉淀洗涤干净，得到破壁酵母。
[0118](3)往破壁酵母中添加5mL乙醇，振荡避光提取60min，lOOOOrpm离心lOmin，收集上清，重复提取多次，每次提取60min，直至提取液为无色，得到虾青素液。得到虾青素提取率为85%。
[0119]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种从酵母中提取虾青素、酵母抽提物和葡聚糖的方法，其特征在于包括如下步骤: (1)细胞的预处理:称取酵母菌体，按一定固液比配成酵母菌悬液，添加一定量纤维素酶，混匀，调节pH值为4?5，于45?55°C下酶解反应4?12h ;反应结束后，灭酶活，固液分离，取沉淀，将沉淀洗净，得到预处理的酵母菌体； (2)虾青素提取:在步骤(1)得到的预处理的酵母菌体中添加有机溶剂，避光振荡提取，固液分离，液体即为虾青素溶液，固体用于制备酵母抽提物； (3)酵母抽提物的制备:将水和步骤(2)得到的固体混匀后，接着加入酵母抽提酶和无机盐，于55°C反应，反应结束后灭酶活，固液分离，液体干燥后即为酵母抽提物，固体用于制备葡聚糖； (4)葡聚糖制备:将碱液和步骤(3)得到的固体混匀，反应，固液分离，将固体洗净并干燥，即得到酵母葡聚糖。2.根据权利要求1所述从酵母中提取虾青素、酵母抽提物和葡聚糖的方法，其特征在于:所述的酵母为红法夫酵母。3.根据权利要求1所述从酵母中提取虾青素、酵母抽提物和葡聚糖的方法，其特征在于: 步骤(2)中所述的有机溶剂为食用乙醇； 步骤(3)中所述的无机盐为氯化钾。4.根据权利要求1所述从酵母中提取虾青素、酵母抽提物和葡聚糖的方法，其特征在于: 步骤(1)中所述的酶解反应的体系为每lOOmL反应体系中含10?20g酵母菌体和0.5?10mL纤维素酶溶液； 步骤(2)中所述的有机溶剂的用量为按每g酵母干菌体配比40?80mL有机溶剂计算; 步骤(3)中所述的酵母抽提酶的添加量按每g酵母干菌体配比0.01?0.03g酵母抽提酶计算； 步骤(3)中所述的无机盐的添加量按每g酵母干菌体配比0.01?0.03g无机盐计算。5.根据权利要求1所述从酵母中提取虾青素、酵母抽提物和葡聚糖的方法，其特征在于:所述的有机溶剂的用量为按每g酵母干菌体配比60mL有机溶剂计算。6.根据权利要求1所述从酵母中提取虾青素、酵母抽提物和葡聚糖的方法，其特征在于: 步骤(3)中所述的水为去离子水或超纯水； 步骤(4)中所述的碱液为氢氧化钠溶液。7.根据权利要求1所述从酵母中提取虾青素、酵母抽提物和葡聚糖的方法，其特征在于:步骤(3)中所述的水的用量为按每10g步骤(2)得到的固体配比100ml水计算； 步骤(4)中所述的碱液的用量按每12.5?50g步骤(3)得到的固体配比100ml碱液计算。8.根据权利要求7所述从酵母中提取虾青素、酵母抽提物和葡聚糖的方法，其特征在于:所述的碱液的浓度为质量百分比2-6%。9.根据权利要求1所述从酵母中提取虾青素、酵母抽提物和葡聚糖的方法，其特征在于: 步骤(1)中所述的酶解反应的温度为50°C ; 步骤(2)中所述的提取的时间为20?90min ; 步骤(3)和步骤(4)中所述的干燥的方式包括冷冻干燥、喷雾干燥或者旋转蒸发干燥； 步骤⑷中所述的反应的条件为45?75°C反应1?3h ; 所述的灭酶活的条件为于95?100°C处理3?5min。
【专利摘要】本发明公开了一种从酵母中提取虾青素、酵母抽提物和葡聚糖的方法。本发明通过用纤维素酶对酵母菌体进行酶解，接着加入有机溶剂，避光振荡提取，固液分离，得到的液体为虾青素溶液，得到的固体和水混匀后，加入酵母抽提酶和无机盐，于55℃反应，固液分离，得到的液体干燥后为酵母抽提物，得到的固体和碱液混匀，反应，固液分离，将得到的固体洗净并干燥，为酵母葡聚糖。本发明耗时短，条件温和；虾青素提取率高，同时能够获得酵母提取物和葡聚糖等多种产物，从而提高了红法夫酵母的利用价值，增加经济效益，为工业化生产奠定坚实基础。
【IPC分类】C07C403/24, A23L33/145, C08B37/02
【公开号】CN105348165
【申请号】CN201510650278
【发明人】朱明军, 周玲燕
【申请人】华南理工大学
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年10月8日