8:顺式-元件 #4
[0235]SEQIDN0:9 :含顺式-元件#3的顺式-元件的引物
[0236]SEQIDN0:10:含顺式-元件#3的顺式-元件的引物
[0237]SEQIDN0:11 :含顺式-元件#4的顺式-元件的引物
[0238] SEQIDN0:12 :含顺式-元件#4的顺式-元件的引物
[0239] SEQIDNO: 13 :在5'侧附加Bgl11识别序列，含顺式-元件#2的顺式-元件的引 物
[0240]SEQIDN0:14:在3'侧附加Hindlll识别序列，含顺式-元件#2的顺式-元件的 引物
[0241]SEQIDN0:15:在5'侧附加Bglll识别序列，用于扩增顺式-元件#1的引物
[0242] SEQIDN0:16 :在3'侧附加Hindlll识别序列，用于扩增顺式-元件#1的引物
[0243] SEQIDN0:17 :顺式-元件的基序（9聚体）
[0244]SEQIDN0:18:顺式-元件的基序（10聚体）
[0245] SEQIDN0:19 :顺式-元件的基序（11聚体）
[0246]SEQIDN0:20:顺式-元件的基序（12聚体）
[0247] SEQIDN0:21 :顺式-元件 #5
[0248]SEQIDN0:22:顺式-元件 #6
[0249]SEQIDN0:23 :顺式-元件#7
[0250] SEQIDN0:24 :顺式-元件 #8
[0251] SEQIDN0:25 :顺式-元件 #9
[0252]SEQIDN0:26:顺式-元件 #10
[0253] SEQIDN0:27 :顺式-元件 #11
[0254]SEQIDN0:28:在5'侧附加Bglll识别序列，含顺式-元件#5的顺式-元件的引 物
[0255] SEQIDN0:29 :在3'侧附加Hindlll识别序列，含顺式-元件#5的顺式-元件的 引物
[0256]SEQIDN0:30:在5'侧附加Bglll识别序列，含顺式-元件#6的顺式-元件的引 物
[0257] SEQIDN0:31 :在3'侧附加Hindlll识别序列，含顺式-元件#6的顺式-元件的 引物
[0258]SEQIDN0:32:含顺式-元件#8的顺式-元件的引物
[0259]SEQIDN0:33:含顺式-元件#8的顺式-元件的引物
[0260]SEQIDN0:34:含顺式-元件#9的顺式-元件的引物
[0261]SEQIDN0:35:含顺式-元件#9的顺式-元件的引物
[0262]SEQIDN0:36:含顺式-元件#10的顺式-元件的引物
[0263] SEQIDN0:37 :含顺式-元件#10的顺式-元件的引物
[0264]SEQIDN0:38:在5'侧附加Bglll识别序列，含顺式-元件#11的顺式-元件的 引物
[0265]SEQIDN0:39:在3'侦_加Hindlll识别序列，含顺式-元件#11的顺式-元件 的引物
【主权项】
1. 在细胞内的作为目的物的蛋白质的合成能力或分泌能力亢进的重组细胞，在所述细 胞中，促进pl80蛋白质的全长或其部分的表达、mRNA的小胞体（ER)定位的蛋白质的表达、 或者这两方的表达均亢进。2. 权利要求1所述的重组细胞，其中pl80蛋白质选自： (a) 由与人来源的pl80蛋白质的氨基酸序列（SEQIDN0:2)有至少70%的序列相同 性的氨基酸序列组成，有促进细胞内的在小胞体膜上的多核糖体形成的功能的蛋白质、 (b) 由在人来源的pl80蛋白质的氨基酸序列（SEQIDNO:2)中缺失、取代、或者附加1 个或数个氨基酸的氨基酸序列组成，有促进细胞内的在小胞体膜上的多核糖体形成的功能 的蛋白质、 (c) 由编码人来源的pl80蛋白质的基因的核苷酸序列（SEQIDΝΟ:1)有至少70%的 序列相同性的核苷酸序列所规定的氨基酸序列组成，有促进细胞内的在小胞体膜上的多核 糖体形成的功能的蛋白质、 (d) 由在编码人来源的pl80蛋白质的基因的核苷酸序列（SEQIDNO: 1)中缺失、取代、 或者附加1个或数个核苷酸的核苷酸序列所规定的氨基酸序列组成，有促进细胞内的在小 胞体膜上的多核糖体形成的功能的蛋白质、及 (e) 由可和与编码人来源的pl80蛋白质的基因的核苷酸序列（SEQIDNO: 1)互补的核 苷酸序列在严格的条件下杂交的核苷酸序列所规定的氨基酸序列组成，有促进细胞内的在 小胞体膜上的多核糖体形成的功能的蛋白质。3. 权利要求1或2所述的重组细胞，其中pl80蛋白质是哺乳动物来源的。4. 权利要求3所述的重组细胞，其中哺乳动物的pl80蛋白质的全长或其部分是人 P180 蛋白质（SEQIDNO:2)、小鼠pl80 蛋白质（GenBank登录号No.NP_077243)、大鼠 P180蛋白质（GenBank登录号No.XP_230637)、中国仓鼠pl80蛋白质（GenBank登录号 No.XM_003496471)、狗pl80 蛋白质（GenBank登录号No.NP_001003179)、马pl80 蛋白质 (GenBank登录号No.XP_001915027)、猴pl80 蛋白质（GenBank登录号No.XP_002798281)、 黑猩猩pl80蛋白质（GenBank登录号No.XP_514527)、猪pl80蛋白质（GenBank登录号 No.XP_001926148)、或者它们的部分。5. 权利要求1~4之任一项所述的重组细胞，其中pl80蛋白质的部分选自： 含对应于由有SEQIDN0:2所示的氨基酸序列的蛋白质（人pl80蛋白质）的第27~ 157氨基酸组成的区域的氨基酸序列的部分、 含对应于由第623~737氨基酸组成的区域的氨基酸序列的部分、 含对应于由第738~944氨基酸组成的区域的氨基酸序列、对应于由第945~1540氨 基酸组成的区域的氨基酸序列的部分。6. 权利要求1~5之任一项所述的重组细胞，其中促进mRNA的小胞体（ER)定位的蛋 白质选自剪接因子3B亚基4(SF3b4)蛋白质的全长或其部分（SEQIDN0:4的全长氨基酸 序列 424AA;作为RRM1 的SEQIDN0:4 的 13 ~91AA;作为.RRM2 的SEQIDN0:4 的 100。7. 权利要求6所述的重组细胞，其中SF3b4蛋白质选自： ⑴由与人来源的SF3b4蛋白质的氨基酸序列（SEQIDN0:4)有至少70%的序列相同 性的氨基酸序列组成，有促进mRNA的向小胞体的定位的功能的蛋白质、 (ii)由在人来源的SF3b4蛋白质的氨基酸序列（SEQIDN0:4)中缺失、取代、或者附加 1个或数个氨基酸的氨基酸序列组成，有促进mRNA的向小胞体的定位的功能的蛋白质、 (iii) 由与编码人来源的SF3b4蛋白质的基因的核苷酸序列（SEQIDN0:3)有至少 70%的序列相同性的核苷酸序列所规定的氨基酸序列组成，有促进mRNA的向小胞体的定 位的功能的蛋白质、 (iv) 由在来源的SF3b4蛋白质的基因的核苷酸序列（SEQIDNO:3)中缺失、取代、或者 附加1个或数个核苷酸的核苷酸序列所规定的氨基酸序列组成，有促进mRNA的向小胞体的 定位的功能的蛋白质、 (v) 由可和与编码人来源的SF3b4蛋白质的基因的核苷酸序列（SEQIDNO:3)互补的 核苷酸序列在严格的条件下杂交的核苷酸序列所规定的氨基酸序列组成，有促进mRNA的 向小胞体的定位的功能的蛋白质。8. 权利要求6或7所述的重组细胞，其中SF3b4蛋白质是哺乳动物来源的。9. 权利要求8所述的重组细胞，其中哺乳动物的SF3b4蛋白质的全长或其部分是人 SF3b4 蛋白质（SEQIDN0:4)、小鼠SF3b4 蛋白质（GenBank登录号No.NP_694693. 1)、大 鼠SF3b4 蛋白质（GenBank登录号No.ΝΡ_001011951· 1)、中国仓鼠SF3b4 蛋白质（GenBank 登录号No.ΧΡ_003498680· 1)、狗SF3b4 蛋白质（GenBank登录号No.ΧΡ_540295· 3)、马 SF3b4 蛋白质（GenBank登录号No.ΧΡ_001488649. 2)、猴SF3b4 蛋白质（GenBank登录号 No.NP_001097793. 1)、黑猩猩SF3b4 蛋白质（GenBank登录号No.XP_513768. 2)、猪SF3b4 蛋 白质（GenBank登录号No.ΧΡ_001926524. 1)、或者它们的部分。10. 权利要求1~9之任一项所述的重组细胞，其中作为目的物的蛋白质的合成能力或 分泌能力通过转化编码作为目的物的蛋白质的核酸分子或使作为目的物的蛋白质的产生 量增加而亢进。11. 细胞株，其由保藏号NITEBP-01753(CH0 3D5)、保藏号NITEBP-01535(CH0YA7)、 或者保藏号NITEABP-01811(CH01B2)表示。12. 制造作为目的物的蛋白质的方法，其通过在使pl80蛋白质的全长或其部分的表达 充进，使促进mRNA的小胞体（ER)定位的蛋白质的表达充进，或使在这些蛋白质两方的表达 亢进的重组细胞中转化编码作为目的物的蛋白质的核酸分子或使作为目的物的蛋白质的 产生量增加。13. 权利要求12所述的方法，其中pl80蛋白质是哺乳动物来源的。14. 权利要求13所述的方法，其中哺乳动物的pl80蛋白质的全长或其部分是人 P180 蛋白质（SEQIDNO:2)、小鼠pl80 蛋白质（GenBank登录号No.NP_077243)、大鼠 P180蛋白质（GenBank登录号No.XP_230637)、中国仓鼠pl80蛋白质（GenBank登录号 No.XM_003496471)、狗pl80 蛋白质（GenBank登录号No.NP_001003179)、马pl80 蛋白质 (GenBank登录号No.XP_001915027)、猴pl80 蛋白质（GenBank登录号No.XP_002798281)、 黑猩猩pl80蛋白质（GenBank登录号No.XP_514527)、猪pl80蛋白质（GenBank登录号 No.XP_001926148)、或者它们的部分。15. 权利要求13或14所述的方法，其中哺乳动物的pl80蛋白质的部分选自： 含由有SEQIDN0:2所示的氨基酸序列的蛋白质（人pl80蛋白质）的第27~157氨 基酸组成的区域的部分、 含由第623~737氨基酸组成的区域的部分、 含由第738~944氨基酸组成的区域的部分、 含由第945~1540氨基酸组成的区域的部分。16. 权利要求12~15之任一项所述的方法，其中促进mRNA的小胞体（ER)定位的蛋白 质选自剪接因子3B亚基4(SF3b4)蛋白质的全长或其部分（SEQIDN0:4的全长氨基酸序 列 424AA;作为RRM1 的SEQIDN0:4 的 13 ~91AA;作为.RRM2 的SEQIDN0:4 的 100。17. 权利要求16所述的方法，其中SF3b4蛋白质是哺乳动物来源的。18. 权利要求17所述的方法，其中哺乳动物的SF3b4蛋白质的全长或其部分是人 SF3b4 蛋白质（SEQIDN0:4)、小鼠SF3b4 蛋白质（GenBank登录号No.NP_694693. 1)、大 鼠SF3b4 蛋白质（GenBank登录号No.ΝΡ_001011951· 1)、中国仓鼠SF3b4 蛋白质（GenBank 登录号No.ΧΡ_003498680· 1)、狗SF3b4 蛋白质（GenBank登录号No.ΧΡ_540295· 3)、马 SF3b4 蛋白质（GenBank登录号No.ΧΡ_001488649. 2)、猴SF3b4 蛋白质（GenBank登录号 No.NP_001097793. 1)、黑猩猩SF3b4 蛋白质（GenBank登录号No.XP_513768. 2)、猪SF3b4 蛋 白质（GenBank登录号No.ΧΡ_001926524. 1)、或者它们的部分。19. 权利要求12~18之任一项所述的方法，其中重组细胞是由保藏号NITE BP-01753(CHO3D5)、保藏号NITEBP-01535(CHOYA7)、或者保藏号NITEABP-01811(CH0 1B2)表示的细胞株。20. 权利要求12~19之任一项所述的方法，其中作为目的物的蛋白质是糖蛋白质。21. 权利要求20所述的方法，其中作为目的物的蛋白质是胶原、纤连蛋白或抗体。22. 使在表达系细胞内的作为目的物的蛋白质的表达量增大的方法，其通过在用于表 达作为目的物的蛋白质的表达单位中，向启动子之下游并且编码作为目的物的蛋白质的 DNA的核苷酸序列的起始密码子之上游插入RNA结合蛋白质所识别/结合（或者相互作用） 的顺式-元件而使在表达系细胞内的作为目的物的蛋白质的表达量增大。23. 权利要求22所述的方法，其中顺式-元件是RNA识别基序（RRM)型RNA结合蛋白 质所识别/结合（或者相互作用）的元件。24. 权利要求23所述的方法，其中顺式-元件是SF3b4蛋白质的RNA识别基序（RRM) 所识别/结合（或者相互作用）的元件。25. 权利要求22~24之任一项所述的方法，其中顺式-元件的核苷酸序列是含1个或 数个9聚体~12聚体的序列基序GAN「⑴n-ACN2(η= 3~6)汎及N2可独立地为A、T、C、 G之任何的核苷酸）。26. 权利要求25所述的方法，其中顺式-元件的核苷酸序列是含1个或数个9聚体~ 12 聚体的序列基序（GAG-(X)n-ACV(n= 3 ~6)(V表示A或G或C)、SEQIDNO: 17 ~20)。27. 权利要求22~26之任一项所述的方法，其中顺式-元件的核苷酸序列是选自下列 的序列： I型胶原基因的5'非翻译区域的核苷酸序列来源的序列、纤连蛋白基因的5'非翻译区 域的核苷酸序列来源的序列、基质金属蛋白酶14(MMP14)基因的5'非翻译区域的核苷酸序 列来源的序列、脯氨酰4-羟化酶A2(P4HA2)基因的5'非翻译区域的核苷酸序列来源的序 列、脯氨酰4-羟化酶A1(P4HA1)基因的5'非翻译区域的核苷酸序列来源的序列。28. 权利要求22~27之任一项所述的方法，其中顺式-元件的核苷酸序列除SEQID N0:5的全长或SEQIDN0:7的全长之外、是选自SEQIDN0:5之中第1~102核苷酸、第 1~78核苷酸、第1~60核苷酸、第61~126核苷酸、第16~57核苷酸、第79~126核 苷酸、第103~126核苷酸、第58~78核苷酸、第51~78核苷酸、第1~27核苷酸、第 70~78核苷酸的任何的序列。29. 权利要求22~28之任一项所述的方法，其中表达系细胞是无伤的宿主细胞、pl80 蛋白质的全长或其部分的表达亢进的细胞、SF3b4蛋白质的全长或其部分的表达亢进的细 胞、或者这两方的表达均亢进的细胞。30. 用于通过对SF3b4进行功能阻碍或表达抑制来抑制胶原合成，防止异常胶原所致 的肺胞上皮、纤维症的重症化的医药组合物。
【专利摘要】在高效率的蛋白质合成中，mRNA上附着多数的核糖体的多核糖体形成的促进被认为非常地有效，但不清楚p180蛋白质的多核糖体形成的促进功能的结构。本申请的发明人新发现，作为与作为p180蛋白质的多核糖体形成促进功能的责任区域的卷曲螺旋结构域特异性地相互作用的蛋白质、作为促进mRNA的小胞体(ER)定位的蛋白质的SF3b4蛋白质，然后知，在高表达促进mRNA的小胞体(ER)定位的蛋白质(例如SF3b4蛋白质)和p180蛋白质的两方的细胞中，mRNA的向小胞体上的定位显著地升高，使培养细胞的分泌功能升高变得可能。另外显示，通过在表达质粒中插入特定的核苷酸序列，将有表达蛋白质的增强效果的SF3b4蛋白质在小胞体膜上定位、及使多核糖体中mRNA重量化变动变得可能，经其可增强细胞的分泌能力。NITE BP-0175320131121
【IPC分类】A61K45/00, A61P43/00, A61K48/00, C12N5/10, C12P21/02, A61P11/00, C12N15/09
【公开号】CN105358682
【申请号】CN201480018249
【发明人】上野智规, 多贺祐喜, 后藤希代子, 加来祐子
【申请人】日本皮革株式会社
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2014年3月26日
【公告号】CA2908156A1, EP2990476A1, US20160075747, WO2014157429A1