一种浸染蛋白的方法
【专利摘要】本发明提供了一种浸染蛋白的方法，其步骤包括：提取植物蛋白；将植物蛋白提取液跑聚丙烯酰胺凝胶电泳，得到待染色的蛋白胶；将蛋白胶置于放有浓度为80％的核桃青皮染液的盘或皿中染色15-25分钟；然后用乙醇脱色3-5小时即可；所述的核桃青皮染液通过如下步骤的方法制得：取核桃青皮原料洗净，组织捣碎机捣碎取汁液，过滤去渣后快速放入加盖的容器中；每500ml汁液加1粒维C片；加热至65℃-75℃使其浓缩至浓度为20％-30％，于4℃冰箱保存。本发明用核桃青皮浸出液浸染蛋白，染色20分钟，单乙醇脱色3-5小时，就可以用于识别不同的蛋白及蛋白的大小。此方法成本低廉、操作简便，能快速用于蛋白胶的染色显示。
【专利说明】一种浸染蛋白的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及蛋白染色技术，具体是一种利用核桃青皮浸出液作为染色液浸染蛋白的方法。
【背景技术】
[0002]目前，在生物科学领域研究蛋白质时，经常用到聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，以分析其功能成分的变化及作用关系，通过分析蛋白凝胶电泳后的色带图谱，可识别不同的蛋白，其中的显色技术是关键。考马斯亮蓝染色法是最常用的染色方法。实验过程中配制试剂较多且都为化学合成试剂，对人体有一定的伤害，且费时费力(考马斯亮蓝染色后需用甲醇和乙酸复合液作为脱色液，且脱色时间通常要过夜)。
【发明内容】
[0003]鉴于已有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种浸染蛋白的方法，该方法经济、环保，操作简单，工作效率高。
[0004]为实现上述目的，本发明所采用的技术解决方案是:
[0005]I)提取植物蛋白
[0006]2)将植物蛋白提取液跑聚丙烯酰胺凝胶电泳，得到待染色的蛋白胶；
[0007]3)将蛋白胶置于放有浓度为70-90%的核桃青皮染液的盘或皿中染色15-25分钟(浸出液需淹没胶体本身)；
[0008]4)然后用乙醇脱色3-5小时即可；
[0009]所述的核桃青皮染液通过如下方法制备得到:A)取核桃青皮原料洗净，组织捣碎机捣碎取汁液，过滤去渣后快速放入加盖的容器中；B)每500ml汁液加I粒维C片作为抗氧化剂；C)加热至65°C _75°C使其浓缩至浓度为20% -30%，于4°C冰箱保存。
[0010]所述步骤3)中染色时间优选为20分钟。
[0011]所述步骤3)中核桃青皮染液的浓度优选为80%。
[0012]本发明的有益效果:
[0013]核桃青皮浸出液作为纯植物染液，环保性强，染色时间较短，本身具有抗菌杀虫作用，因此该染色液不需加防霉抗菌剂。脱色液也较单一仅乙醇一种，操作性强，毒副作用较甲醇小。
[0014]总之，本发明使用纯植物染液，成本低、环保；方法简单，技术难度小，易掌握；适宜于快速判定蛋白不同组分和大小的研究。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1:核桃青皮染液浸染白菜总蛋白电泳图
[0016]具体实施方法
[0017]实施例1
[0018]1、制备核桃青皮染液:
[0019](I)取核桃青皮原料洗净，组织捣碎机捣碎取汁液，过滤去渣后快速放入加盖的容器中；
[0020](2)每500ml汁液加I粒维C片；
[0021](3)加热至65°C -75°C使其浓缩至浓度为20% -30%，于4°C冰箱保存。
[0022]2、提取白菜叶片总蛋白:
[0023](I) Ig样品加入3.5ml蛋白质提取液，准备提取液放在冰上；
[0024](2)把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置3小时；
[0025](3)用离心机离心 8000rpm 40min 4°C ；
[0026](4)提取上清液，样品制备完成。
[0027]蛋白质提取液:300mlUlMTris-HCl (PH8)45ml 2、甘油(Glycerol) 75ml 3、聚乙烯批咯烧酮(Polyvinylpolypyrrordone) 6g。
[0028]3、将提取出的白菜总蛋白提取液跑聚丙烯酰胺凝胶电泳；
[0029](I)制备分离胶和浓缩胶；
[0030](2)四泳道分别上样20微升、18微升、16微升、14微升；
[0031](3)80V跑20分钟，然后调高电压到120V，直到溴酚蓝跑到板底停止；
[0032]4、将跑好待染色的胶置于放有80%核桃青皮染液的盘或皿中染色20分钟(浸出液淹没胶体本身)；
[0033]5、经乙醇脱色4小时；
[0034]6、脱色后可见到大小不同的清晰条带(见图1)。由于上样量不同，所以各泳道条带粗细有差别。
【权利要求】
1.一种浸染蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)提取植物蛋白 2)将植物蛋白提取液跑聚丙烯酰胺凝胶电泳，得到待染色的蛋白胶； 3)将蛋白胶置于放有浓度为70-90%的核桃青皮染液的盘或皿中染色15-25分钟； 4)然后用乙醇脱色3-5小时即可； 所述的核桃青皮染液通过如下步骤的方法制得:A)取核桃青皮原料洗净，组织捣碎机捣碎取汁液，过滤去渣后快速放入加盖的容器中；B)每500ml汁液加1粒维C片；C)加热至65°C _75°C使其浓缩至浓度为20% -30%，于4°C冰箱保存。
2.如权利要求1所述的一种浸染蛋白的方法，其特征在于，所述步骤3)中染色时间为20分钟。
3.如权利要求1所述的一种浸染蛋白的方法，其特征在于，所述步骤3)中核桃青皮染液的浓度为80%。
【文档编号】G01N1/30GK104390833SQ201410674079
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年11月21日 优先权日:2014年11月21日
【发明者】马晓丽, 裴雁曦, 梁雅丽, 金竹萍, 刘旦梅, 刘志强, 张丽萍, 景巧丽 申请人:山西大学