法有利地与引导内源性神经干细胞分化为神经元或神经胶质的生长因子 结合使用，W及用于在基于来自离体源的神经细胞向损伤或恶化区域的递送的细胞替补疗 法。
[0142] 本发明还包括送样的化合物和药物组合物，其中本发明的化合物是W盐形式存 在。盐的实例包括碱性含氮双麟酸盐、倭盐、碱金属盐例如钟盐和钢（包括但不限于单钢、 二钢和Η钢）盐、碱±金属盐例如巧盐、镇盐和儘盐、具有有机碱的盐例如二环己胺盐、 Ν-甲基-D-葡糖胺W及具有有机氨基酸的盐例如精氨酸、赖氨酸或组氨酸。无毒的、药学上 可接受的盐是优选的。
[0143] 本发明还包括包含两个或更多个容器的试剂盒，其具有包含治疗有效量的、包含 式II的药物组合物的第一容器，和包含载体、赋形剂或稀释剂的第二容器，和/或其中第Η 容器包含治疗上可接受的量的另外的治疗活性剂。试剂盒还包括包含式II的组合物、标准 化的研究级试剂和对照标准物，并且还可包括包含式II的化合物的两种或更多种药物组 合物。
[0144] 本发明的其他目的、特征和优势将从W下的具体实施例中变得明显。具体实施例 表明本发明的具体方面，仅作为说明而提供。因此，本发明还包括本发明的精神和范围内的 多种改变和修改，送些改变和修改从送些详细描述中可对本领域技术人员变得明显。本发 明将通过W下非限制性实例进一步说明。
[0145] 实施例
[0146] 实施例1在唐氏综合征的小鼠模型中使用示例性化合物
[0147]
[0148] 购买6至8周的年龄的Ts65化小鼠。尽管送些突变小鼠不是唐氏综合征的完美 的模型，但小鼠具有许多重要的相似之处，送些相似之处提供了目前为止发现的最好的模 型。除了其他蛋白，送些突变小鼠产生比正常水平多150%的Dyrkla蛋白，等于唐氏综合 征中发现的基因剂量值OWjat等人，2007)。送些动物与其他小鼠模型相比显示目标识别 范例和Morris水迷宫的不足（Fernandez和Garner, 2007)和海马趾的长期增强的不足 化leschevnAov等人，2004)，而观察到最小的肌肉运动不足。比较而言，送些小鼠具有唐氏 综合征中观察到的许多行为特征化oltzman等人，1996)。研究者已使用Ts65化小鼠来更 好地理解病理学并且阐明是造成唐氏综合征的表型的原因的基因和蛋白产物。因为Ts65化 目前是唐氏综合征广泛接收的模型，所W我们将使用该突变小鼠来筛选用于所述疾病的可 能的治疗剂。将媒介物或式II从7至9周的年龄开始ip施用于小鼠，且每天继续直到4 个月的年龄。
[0149] 还将购买正常小鼠作为对照组。将如下使用3组12只小鼠；采用媒介物的 Ts65化；采用药物式II的Ts65Dn;和采用媒介物的正常小鼠。动物将处于12虹亮/暗周 期且被随意给予水和食物并且每个笼子居住2到3只。动物将被每天ip给予lOmg/kg或lOml/kg媒介物巧％DMS0/1 %甲基纤维素），持续7至8周直到小鼠约4个月的年龄。到 送个年龄，Ts65化动物将显示显著的学习和记忆损害。然后动物将开始在一连串的行为测 试中测试。所有动物在行为测试期间都将持续接收媒介物或药物（在下午给药并在上午测 试）。小鼠将被测试；（1)在单次训练加速跑之后在旋转棒设备（rotoroda卵aratus)上测 试；（2)在空场测试中测试角落穿过（cornercross)和中必穿过并且随时间变化采用使用 新软件计算的象限和速度；（3)在Morris水迷宫测试中测试每天3个测试周期进行4天， 最后一天的测试是探针试验（probetrial) 及（4)在目标识别范例中测试在新目标处 的百分比时间。
[0150]Ts65化小鼠与正常动物相比将显示认知缺陷，但不显示显著的运动缺陷。期望的 是，对于式II治疗组相比于媒介物将由于大概部分地通过对Dyrkla活性的抑制而增加的 神经发生，观察到认知改善。将使用T检验而与媒介物对照进行比较，来评定行为改善的确 定。药物诱导的行为改善在P<0. 5时将被视为统计学上显著的。
[0151] 实施例2-在唐氏综合征的小鼠模型中筛选式II的类似物
[0152] 式II可能不是为了最大Dyrkla抑制活性而被最优化的，其可能改善激酶抑制活 性而没有使神经发生活性减少至显著程度。
[0153] 因此，确定式II的任何类似物是否具有更大的Dyrkla抑制活性是实施例2的目 的。使用人神经祖细胞，式II化学家族对于其促进最大神经发生活性的能力而被最优化。 简言之，为了测量Dyrkla抑制作用，W0. 1-luM的浓度的式II的小分子类似物（~20)将 被添加到Dyrkl址LISA试剂盒（CarnaBiosciences)中，并且结果将使用Victor光度计 /英光/UV-可见光板式阅读器在化uronascent上测量。所述类似物将与式II抑制活性 比较。具有比式II大的抑制活性的郝些类似物（最少大10% )将接着在0. 1-luM下被测 试神经发生活性。类似物或媒介物将被添加到接种在微板中的人神经干细胞祖先化onza) 中。在每次喂食细胞时（喂食之间2至3天），该细胞将用媒介物或类似物处理。细胞将被 允许增殖，然后分化，之后在约2周时间后，将测量成熟的神经元的总数。
[0154] 简言之，细胞将被固定在多聚甲醒中并且神经元将在用核标记物和抗体对成 熟神经元进行处理后量化。神经元和其他细胞类型的数量将使用具有神经元压型软件 (neuronalpro円lingsoftware)的Neuronascent'sCellomicsArrayscan仪器来量化。 Τ检验将用来确定在神经元数量和Dyrkla活性上超过式II的任何显著差异（p< . 05)。
[0155] 实施例3-在唐氏综合征的小鼠模型中使用式II的最优化的类似物
[0156] 在实施例2中鉴别的、与式II比较表明增加的Dyrkla活性（> 15%，在luM下） W及最小的神经发生活性降低（< 15% )的试剂将W适于动物研究的量（通常约Igm)来 再合成，并然后施用于8至9周龄的突变Ts65化小鼠，且一直到4月龄。给药和测试将如 实施例中描述进行，除了目前更有活性的试剂将被WlOmg/kg，ip施用。如果没有类似物满 足增加的Dyrkla抑制作用且最小的神经发生活性降低的标准，则最初的先导化合物式II， 将W更大或更小的剂量被再测试。如果与实施例1中的媒介物对照相比认知未显著改善， 则更大的剂量将被使用，目的是努力达到行为测试中正常小鼠的值。
[0157] 实施例4确定来自实施例1和3的化合物的药效学性质
[015引为了任何候补药物进展到临床测试，获得药效信息是重要的。具体地，必须确定药 物在血液和/或脑中允许观察的功效的量。血液和脑样品将从实施例1和实施例3中使用 的动物获得。将使用邸TA管进行采血。脑将被快速冷冻于液氮中并保持冷冻直到分析时。 化加巧Omg/kg，ip)将经药物和媒介物给药的最后两天施用，然后脑将在灌注后被除去并最 终用于将来确定海马趾的神经发生。
[0159] 总之，送些研究将尝试确定神经源性小分子试剂和Dyrkla抑制剂在施用于模拟 唐氏综合征的小鼠时是否能够显著改善认知。展示功效并且是类似于药物的（化ug-1化e) (所有类似物具有有利的cLo浊B值的类似于药物的性质）试剂能够变成用于唐氏综合征患 者的先导治疗剂，对于送些患者，目前没有认知治疗选择。
[0160] 用于测试的化合物将被选择为具有合理的血脑屏障通透性（Lo浊B> -0. 3)并 且还具有类似于药物的性质，即，它们遵循"Lipinki的五原则"（参见CALipinski，Adv. Dru曲el.Rev. 1997, 23, 3)。"5原则"说明：当在W下情况下时更可能出现差的吸收或通透 性：
[016。 1.存在超过甜-键的供体（表示为0H和NH的和）。
[0162] 2.分子量大于500。
[0163] 3.Lo甜大于5 (或MLo评大于4. 15)。
[0164] 4.存在多于10H-键受体（表示为N和0的和）。
[0165] 现在已完整描述了本发明，本领域普通技术人员应理解，本发明可在宽的且等价 的条件、配方和其他参数的范围内进行而不影响本发明或其任意方面的范围。本文引述的 所有专利和出版物通过引用W其整体完全并入。
[0166] 申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细特征W及详细方法，但 本发明并不局限于上述详细特征W及详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细特征 W及详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发 明选用组分的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围 和公开范围之内。
【主权项】
1. 式（I)所示的化合物，其异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或前药，其中，每个Ri独立地选自由H、F、Cl、Br、Re和-O-Re组成的组，其中Re是取代的1-6个 碳的烷基或6-14个碳的芳基或芳烷基； Rz选自由H、F、Cl和化组成的组； Rs选自由甲烷基、己烷基和丙烷基组成的组； Ra选自由-CH-和-CH-CHz-组成的组； 每个Rs独立地选自由-X、-Re、-ORe、-SRe、-N(Re)2、-CN、-N02、-NC(0)Re、-C(0)Re、-C(0)N(Re)2、-S(0)zRe、-S(0)zNRe、-S(0)Re、-C(0)Re、-C(0)ORe或C(0)N(Re)2组成的组，其中，每个 X独立地是因素，且每个Re独立地是-H、烷基、帰基、快基、芳基、杂环、保护基或前药部分。2. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，至少一个Ri不是H。3. 根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，其中一个Ri是F。4. 根据权利要求1至3任一项所述的化合物，其特征在于，Rz是H。5. 根据权利要求1至4任一项所述的化合物，其特征在于，Rs是甲烷基。6. 根据权利要求1至5任一项所述的化合物，其特征在于，Ra是-CH-。7. 根据权利要求1至6任一项所述的化合物，其特征在于，至少一个Rs是-ORe,其中Re 烷基。8. 根据权利要求1至7任一项所述的化合物，其特征在于，其中一个咕是-OCH2CH3。9. 根据权利要求1至8任一项所述的化合物，其特征在于，所述化合物抑制Dyrkla活 性。10. 根据权利要求1至9任一项所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有式（II)所 示的结构式，
【专利摘要】本发明公开了一种用于治疗唐氏综合征的化合物及其药物组合物。该化合物具有式(I)所示的化学结构：其中，每个符号的定义如说明书所述。本发明提供的化合物及其组合物，具有较强的抑制Dyrk1a活性的能力，其对Dyrk1a活性的抑制能力明显强于现有的药物，可作为改善唐氏综合征的药物使用。
【IPC分类】A61K31/4709, A61P25/28, C07D401/04
【公开号】CN105367545
【申请号】CN201410396284
【发明人】李飞
【申请人】无锡成博科技发展有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2014年8月12日