715g(HPLC检测其所含Bla为5. 76% );
[0044] (2)向第一油膏中加入甲基乙烯酮2860g，在70°C搅拌溶解第一油膏，之后程序降 温（每小时l〇°C)至5°C，然后过滤除去沉淀物（HPLC检测沉淀物中Bla含量彡0. 5% )， 回收滤液；
[0045] ⑶所得滤液在0.OIMpa下50°C脱溶浓缩得到第二油膏540g(HPLC检测第二油膏 中含Bla= 7. 56% )，在第二油膏中加入结晶溶剂乙醇540g，在65°C搅拌溶解第二油膏，然 后程序降温至20°C(每小时降10°C)，然后在此温度下搅拌（搅拌的条件是30rpm)养晶 5. 5h;将所得的晶浆过滤，所得晶体洗涤并干燥，即得到阿维菌素Bla粗粉（55. 9g)，晶浆过 滤后所得滤液经浓缩后剩余481.lg;
[0046] 用HPLC对本步所得粗粉和浓缩后的滤液中含有的Bla、Blb和B2 (包括B2a和B2b) 组分的含量进行检测，结果见表2 ;
[0047] 表 2 :
[0048]
[0049] (4)在所得60. 9g粗粉加入609mL(相当于481. 7g)甲醇溶解，然后加热至65°C并 加入粗粉质量1 %的活性炭，加热保持微沸状态1小时后，过滤除去活性炭；所得滤液边搅 拌（60rpm)边程序降温（每小时降5°C)到25°C后养晶2h进行重结晶，然后抽滤回收晶体， 以除去粗粉中的主要杂质阿维菌素B2 ;
[0050] (5)将步骤（4)抽滤回收的晶体按步骤（4)的条件再重复进行1次重结晶处理，得 到阿维菌素Bla含量95 %的阿维菌素Bla精粉35. 98g。
[0051] 此实例可将阿维菌素Bla-次结晶母液中83%的Bla组分进行再提取，使阿维菌 素Bla总收率提高为95%。
[0052] 实施例3
[0053] (1)取2000mL(相当于2300g)阿维菌素Bla-次结晶母液，在80°C脱溶2h，得到 第一油膏为715g(HPLC检测其所含Bla为5. 76% );
[0054] (2)向第一油膏中加入环己酮2500g，在75°C搅拌溶解第一油膏，之后程序降温 (每小时10°C)至10°C，然后过滤除去沉淀物（HPLC检测沉淀物中Bla含量彡0. 5% )，回 收滤液；
[0055] (3)所得滤液在0· 02Mpa下80°C脱溶浓缩得到第二油膏510g(HPLC检测第二油膏 中含Bla= 7. 76% )，在第二油膏中加入结晶溶剂正丁醇510g，在60°C搅拌溶解第二油膏， 然后程序降温至25°C(每小时降10°C)，然后在此温度下搅拌（搅拌的条件是30rpm)养 晶6h;将所得的晶浆过滤，所得晶体洗涤并干燥，即得到阿维菌素Bla粗粉（60. 05g)，晶浆 过滤后所得滤液经浓缩后剩余447. 8g;
[0056] 用HPLC对本步所得粗粉和浓缩后的滤液中含有的Bla、Blb和B2 (包括B2a和B2b) 组分的含量进行检测，结果见表3 ;
[0057]表 3:
[0058]
[0059] (4)在所得60. 5g粗粉加入605mL(相当于478. 5g)甲醇溶解，然后加热至65°C并 加入粗粉质量3%的活性炭，加热保持微沸状态1小时后，过滤除去活性炭；所得滤液边搅 拌（60rpm)边程序降温（每小时降5°C)到25°C后养晶2h进行重结晶，然后抽滤回收晶体， 以除去粗粉中的主要杂质阿维菌素B2 ;
[0060] (5)将步骤（4)抽滤回收的晶体按步骤（4)的条件再重复进行1次重结晶处理，得 到阿维菌素Bla含量95 %的阿维菌素Bla精粉35. 4g。
[0061] 此实例可将阿维菌素Bla-次结晶母液中86%的Bla组分进行再提取，使阿维菌 素Bla总收率提高为96%。
[0062] 实施例4
[0063] (1)取2000mL(相当于2300g)阿维菌素Bla-次结晶母液，在80°C脱溶2h，得到 第一油膏为715g(HPLC检测其所含Bla为5. 76% );
[0064] (2)向第一油膏中加入甲基异丁酮2145g，在80°C搅拌溶解第一油膏，然后程序降 温（每小时l〇°C)至0°C，然后过滤除去沉淀物（HPLC检测沉淀物中Bla含量彡0. 5% )， 回收滤液；
[0065] (3)所得滤液在0· 02Mpa下70°C脱溶浓缩得到第二油膏500g(HPLC检测第二油膏 中含Bla= 8.03% )，在第二油膏中加入结晶溶剂丙醇1000g，在70°C搅拌溶解第二油膏， 然后程序降温至30°C(每小时降10°C)，然后在此温度下搅拌（搅拌的条件是30rpm)养晶 5h;将所得的晶浆过滤，所得晶体洗涤并干燥，即得到阿维菌素Bla粗粉；
[0066] (4)将所得粗粉加入按质量体积比lg: 10mL加入甲醇溶解，然后加热至65°C并 加入粗粉质量5%的活性炭，加热保持微沸状态1小时后，过滤除去活性炭；所得滤液边搅 拌（60rpm)边程序降温（每小时降5°C)到25°C后养晶2h进行重结晶，然后抽滤回收晶 体；
[0067] (5)将步骤（4)抽滤回收的晶体按步骤（4)的条件再重复进行1次重结晶处理，得 到阿维菌素Bla含量95%的阿维菌素Bla精粉。
[0068] 本实施例所制备的阿维菌素Bla精粉中阿维菌素Bla的回收率可达与实施例1-3 同等水平。
[0069]对比例1
[0070] (1)取第一油膏为715g;
[0071](2)在油膏中加入结晶溶剂丙醇715g(HPLC检测其所含Bla为5· 76% )，在70°C搅 拌溶解油膏，然后程序降温（每小时l〇°C)至30°C，然后在此温度下搅拌（搅拌的条件是 30rpm)养晶5h;将所得的晶浆过滤，所得晶体洗涤并干燥，即得到阿维菌素Bla粗粉（5g)， 晶浆过滤后所得滤液经浓缩后剩余708g;
[0072] 用HPLC对本步所得粗粉和浓缩后的滤液中含有的Bla、Blb组分的含量进行检测， 结果见表4 ;
[0073] 表 4 :
[0074]
[0075] (3)在所得5g粗粉加入50mL(相当于39.5g)甲醇溶解，然后加热至65°C并加 入粗粉质量5 %的活性炭，加热保持微沸状态1小时后，过滤除去活性炭；所得滤液边搅拌 (60rpm)边程序降温（每小时5°C)到25°C后养晶2h进行重结晶，然后抽滤回收晶体；
[0076] (4)将步骤（3)抽滤回收的晶体按步骤（3)的条件再重复进行1次重结晶处理，得 到阿维菌素Bla含量95 %的阿维菌素Bla精粉1. 47g。
[0077] 此实施例虽可将阿维菌素Bla-次结晶母液中的Bla组分进行再提取，但收率仅 为3. 6%，使阿维菌素Bla总收率提高为71 %。较实施例1、实施例2、实施例3的收率相差 甚远。
【主权项】
1. 一种从阿维菌素Bla-次结晶母液中提取残留阿维菌素Bla的方法，其特征在于，该 方法包括以下步骤： ① 将阿维菌素Bla-次结晶母液脱溶浓缩，制成第一油膏； ② 向第一油膏中加入低级酮，在70°C~80°C条件下搅拌溶解第一油膏，然后程序降温 至0°C~10°C停止降温，然后离心或过滤，回收所得上清液或滤液，进行脱溶浓缩，得第二 油膏； 所述低级酮为二甲基酮、甲基乙基酮、2-戊酮、甲基异丁酮、甲基乙烯酮、环己酮中的任 意一种； ③ 向第二油膏中加入结晶溶剂，在70°C~80°C条件下搅拌溶解第二油膏，然后程序降 温至20°C~30°C停止降温，搅拌养晶5h~6h，所得的晶浆过滤或离心分离后，所得晶体洗 涤并干燥，即得阿维菌素Bla粗粉； ④ 所得粗粉中加入甲醇溶剂，粗粉：甲醇=lg: 10mL，升温至65°C溶解后加活性炭进 行脱色处理，然后过滤掉活性炭，所得滤液进行重结晶，经离心或过滤后得到晶体； ⑤ 将步骤④所得晶体再按步骤④的操作重复进行处理1-2次，得到阿维菌素Bla含量 彡95%的阿维菌素Bla精粉。2. 根据权利要求1所述的从阿维菌素Bla-次结晶母液中提取残留阿维菌素Bla的方 法，其特征在于，步骤②中，第一油膏与低级酮的质量比为1 : 3~4;步骤③中，第二油膏 与结晶溶剂的质量比为1 : 1~2。3. 根据权利要求1所述的从阿维菌素Bla-次结晶母液中提取残留阿维菌素Bla的方 法，其特征在于，步骤②中，程序降温方式为每小时降l〇°C。4. 根据权利要求1所述的从阿维菌素Bla-次结晶母液中提取残留阿维菌素Bla的方 法，其特征在于，步骤③中，结晶溶剂为甲醇、乙醇、丙醇和正丁醇中的任意一种。5. 根据权利要求1所述的从阿维菌素Bla-次结晶母液中提取残留阿维菌素Bla的方 法，其特征在于，步骤③中，程序降温方式为每小时降l〇°C。6. 根据权利要求1所述的从阿维菌素Bla-次结晶母液中提取残留阿维菌素Bla的方 法，其特征在于，步骤④中，加活性炭进行脱色处理的具体条件是：加入所得粗粉质量1-5% 的活性炭，然后加热状态下保持微沸状态lh。7. 根据权利要求1所述的从阿维菌素Bla-次结晶母液中提取残留阿维菌素Bla的方 法，其特征在于，步骤④中，进行重结晶的具体条件是：对所得滤液进行搅拌并程序降温至 25°C后停止降温，养晶2h。8. 根据权利要求7所述的从阿维菌素Bla-次结晶母液中提取残留阿维菌素Bla的方 法，其特征在于步骤④中，重结晶中程序降温方式为每小时降5°C。
【专利摘要】本发明公开了一种从阿维菌素B1a一次结晶母液中提取残留阿维菌素B1a的方法，该方法是向阿维菌素油膏中加入低级酮并升温搅拌溶解，然后降温并离心，回收所得上清液，浓缩后得第二油膏；第二油膏中加结晶溶剂，升温溶解第二油膏，然后降温养晶，分离晶体，得粗粉；粗粉中加入甲醇，然后加活性炭脱色处理，滤液重结晶两次得阿维菌素B1a含量≥95%的阿维菌素B1a精粉。采用本发明的方法能够有效回收一次结晶母液中B1a组分，经一次结晶就可回收母液中86%的B1a组分，并且所得粗粉中B1a组分含量高达65%。另外，本发明的方法具有工序简单、成本低廉的优点，符合工业生产的需要，满足了产业上的需求，同时解决了国家禁止使用油膏的现实问题。
【IPC分类】C07H1/08, C07H17/08
【公开号】CN105418708
【申请号】CN201510790025
【发明人】刘中须, 王琳慧, 聂会敏, 郭军杰, 鲁森, 宋立斌
【申请人】石家庄市兴柏生物工程有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年11月17日