从柑橘皮、果中提取橙皮苷和新橙皮苷的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物提取领域，尤其是一种从柑橘皮、果中提取黄酮的方法。
【背景技术】
[0002]柑橘是芸香科柑橘属重要的植物，主要是利用其果肉而很少对效果和果皮进行综合利用，大多数被当作废物填埋处理。由于柑橘果、皮含有较多生物活性物质，因此对其的利用已经越来越广泛。橙皮苷(Hesperidin)是柑橘果皮中的天然黄酮类化合物，采用碱浸酸析法从脐橙中提取出的橙皮苷纯度为80.3%，得率为1.55%。新橙皮苷(Neohesperidin)是由橙皮素与新橙皮糖形成的糖苷，目前提取新橙皮苷的方法包括超声辅助提取法、索氏提取法、和水浴回流提取法。辛弗林(Synephrine)是枳实生物碱类物质的主要成分，辛弗林的含量随着柑橘果实的成熟而减少，因此一般选取未成熟的果实即落果来作为提取原料；辛弗林的提取方法有加热回流法、超声提取法和微波提取法。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种高效从枳实小果和柑橘皮混合物中同时提取分离橙皮苷、新橙皮苷的方法，将柑橘皮和枳实小果干燥、粉碎，按1:1比例混合后，用水渗漉提取；然后取药渣进行橙皮苷提取，橙皮苷含量可达98%以上，收率为6.0%以上；取渗漉液进行新橙皮苷提取，得到新橙皮苷提取物含量达90%以上，收率为2.0%以上。为了解决该技术问题，本专利具体实施步骤如下:
一、柑橘皮、苦橙枳实小果前处理
收集柑橘皮、干燥、粉碎，过筛，备用；收集枳实小果干燥、粉碎，过筛，备用。将柑橘皮粉和枳实小果粉按质量比1:1比例混合，置于提取罐中，按料液比1:(10-30)的比例，用30%-50%的乙醇水溶液进行渗漉提取，控制温度40-45°C，渗漉提取10_12h ;过滤；然后往滤液中添加0.01-0.1%的果胶酶，50 °C下搅拌30min，然后将温度调到70 °C，处理15_30min，将果胶酶杀灭；然后过滤，将药渣和滤液分离；药渣用于橙皮苷提取，滤液用于新橙皮苷提取。
[0004]所述过筛的筛网为10目、或者60目、或者100目；
所述渗漉提取可以进行3次。
[0005]二、橙皮苷提取、分离、纯化
将上述药渣用pH值为10.0-11.0碱液浸泡，进行提取；所得提取液用HC1调至pH值为2.0-3.0，放置，沉淀；将沉淀用水洗涤至中性，以料液比1: (50-60)g/mL加入甲醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0-11.0，30°C下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为3.0-5.0，在15°(:以下静置1211重结晶；重结晶后的晶体即为橙皮苷产品。该产品中橙皮苷含量可达98.0%，橙皮苷收率为6.0%以上。
[0006]
所述碱液为NaOH或者Ca (0H)2。
[0007]所述结晶和重结晶，温度要控制在15°C以下，以确保橙皮苷收率和纯度。
[0008]三、新橙皮苷提取、分离、纯化
取步骤一所述的滤液过强酸性苯乙烯型阳离子柱，收集离子柱流出液，然后用水洗。将离子柱流出液和水洗液混合，进大孔吸附树脂，经水洗后，先用20%低碳醇洗涤，再用65%低碳醇洗脱，将洗脱液浓缩，在15°C以下放置，用(NH4)2S04/NaCl助析，得新橙皮苷粗品；将新橙皮苷粗品用水洗涤至中性，以料液比1: (50-60) g/mL加入甲醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0-11.0，30°C下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为3.0，在15°C以下静置12h重结晶；析出类白色针状晶体；抽滤，烘干，得新橙皮苷；用HPLC检测，该产品中橙皮苷含量可达90.0%以上，橙皮苷收率为2.0%以上。
[0009]所述强酸性苯乙烯型阳离子柱优选001X7阳离子柱；
所述大孔吸附树脂优选D101 ;
所述结晶和重结晶，温度要控制在15°C以下，以确保新橙皮苷收率和纯度。
[0010]所述的渗漉、提取、酶解、过滤、层析吸附、洗脱、结晶、重结晶都为已知技术。
[0011]本发明具有下列优点和特性:
1、综合利用资源
将枳实小果和柑橘皮按1:1比例混合进行渗漉提取，提取后的药渣中提取橙皮苷，滤液中提取新橙皮苷，实现了橙皮苷、新橙皮苷同步综合提取。
[0012]2、组合技术新颖
通过本技术方案，将枳实小果、柑橘皮粉碎物按质量比1:1比例混合，按料液比渗漉提取后，从药渣中提取橙皮苷，从滤液中提取新橙皮苷，得到橙皮苷含量可达98.0%以上，收率为6.0%以上；得到新橙皮苷提取物含量可达90%以上，新橙皮苷收率为2.0%以上。尤其是橙皮苷和新橙皮苷提取同步提取，是利用渗漉滤液，新橙皮苷采用先阳离子层析柱，再D101大孔树脂柱，然后采用20%低碳醇洗涤，再用65%低碳醇洗脱，取65%低碳醇洗脱液浓缩，用浓缩液质量5%的(NH4)2S04/NaCl助析，结晶；将粗晶用甲醇溶解，经重结晶得到产品。所有结晶和重结晶步骤都是在15°C以下进行。这些技术特征组合在一起，橙皮苷和新橙皮苷提取物在含量和收率2个指标上产生了意想不到的效果。这些结果是技术组合方案种各技术特点互相支持、共同作用才实现的，已知技术没有报道，也没有该组合技术方案的技术启示，不是简单的叠加，具有突出的实质性特点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0013]以下所述实例详细地说明了本发明。
[0014]实施例1 前处理
将苦橙第三次生理落果的枳实小果作为提取原料，干燥，用高速多功能粉碎机粉碎，取粉碎物过10目的筛，备用。将苦橙皮干燥，粉碎，过10目筛，备用。准确称取枳实小果粉碎物25.0g和苦橙皮粉碎物25.0g置于烧杯中，加入500mL 30%乙醇水溶液，放入水浴锅中44°C下浸泡水浴提取10h，过滤，得提取液。往提取液中加入0.5g果胶酶处理，50°C下搅拌30min，然后将水浴锅调至70°C，处理30min，将果胶酶充分灭活。待其冷却后在纱布辅助下，用双层滤纸抽滤，得滤液和滤渣，滤渣用于提取橙皮苷，滤液用于提取新橙皮苷。
[0015]橙皮苷提取
取上述滤渣100g，加2000ml的水，30°C下边搅拌边加入1.75g Ca (0H) 2，搅拌0.5h后