酸晶体
[0019]经氨基酸分析仪分析测定纯度达97.0%以上。
【具体实施方式】
[0020]实施例1
[0021]a、取4-羟基异亮氨酸发酵液25L(4-羟基异亮氨酸含量18.0g/L)于80 °C加热1min以上，用盐酸调节PH为4.0，进入微滤膜分离系统进行微滤，得到去除菌体的4-羟基异亮氨酸微滤液以及菌体蛋白；所述微滤膜分离系统采用金属膜分离系统，微滤膜孔径为50nm，操作温度为30?40°C，进膜压力与出膜压力差为0.04Mpa，过滤过程分多次利用纯化水顶洗，直至浓液中4-羟基异亮氨酸含量低于2.0g/L后停机，得到除去菌体的4-羟基异亮氨酸微滤液。清液4-羟基异亮氨酸回收率达95.2%，菌体去除率大于99.9%，膜通量达到78L.(m2.h)-、
[0022]b、将经a步得到澄清的4-羟基异亮氨酸过滤液栗入超滤膜过滤器，对过滤液进行除蛋白和脱色处理，得到4-羟基异亮氨酸过滤液。所述超滤膜过滤器采用中空纤维膜分离系统，截留分子量为6000，其操作条件为ρΗ4.0，操作温度30°C，进膜压力与出膜压力差为
0.08MPa，得到4-羟基异亮氨酸过滤液。
[0023]C、将b步获得的过滤液上732阳离子交换树脂吸附，吸附饱和后用去离子水反洗，之后采用5 %的氨水洗脱，收集pH为7.0-10.5的4-羟基异亮氨酸高流分洗脱液。
[0024]d、将c步获得高流分洗脱液加入洗脱液重量的1.5%的活性炭脱色，温度60°C，搅拌脱色25min，过滤获得4-羟基异亮氨酸脱色液。
[0025]e、将d步获得的脱色液用盐酸调pH为7.2，进行减压蒸发至原体积液的12%，获得含有大量4-羟基异亮氨酸晶体的悬混液；
[0026]f、将e步得到4-羟基异亮氨酸晶体的悬混液放置于4°C结晶8h，过滤，获得4-羟基异亮氨酸晶体，称重293.0g，计算收率为65.1%,纯度为95.8%。
[0027]实施例2
[0028]取4-羟基异亮氨酸发酵液20L(4-羟基异亮氨酸含量20.3g/L)于80°C加热1min以上，用盐酸调节PH为4.0，按照实施例1的方法进行微滤除菌体和超滤除蛋白，采用3%的氨水洗脱树脂，收集PH为7.0-10.0的洗脱液，加入洗脱液重量的1.8%的活性炭脱色，温度55°C，搅拌脱色25min，过滤获得4-羟基异亮氨酸脱色液，用盐酸调pH为7.2后进行减压蒸发至原体积液的12%，得到4-羟基异亮氨酸晶体的悬混液，放置于4°C结晶4h，过滤，获得4-羟基异亮氨酸晶体，称重252.5g，计算收率为62.2%,纯度为96.5 %。
[0029]实施例3
[0030]取4-羟基异亮氨酸发酵液28L(4-羟基异亮氨酸含量19.1g/L)于80°C加热1min以上，用盐酸调节PH为4.0，按照实施例1的方法进行微滤除菌体和超滤除蛋白，采用6%的氨水洗脱树脂，收集PH为7.5-10.5的洗脱液，加入洗脱液重量的1.5%的活性炭脱色，温度50°C，搅拌脱色20min，过滤获得4-羟基异亮氨酸脱色液，用盐酸调pH为7.2后进行减压蒸发至原体积液的15%，得到4-羟基异亮氨酸晶体的悬混液，放置于4°C结晶4h，过滤，获得4-羟基异亮氨酸晶体，称重322.5g，计算收率为60.3%,纯度为96.8 %。
【主权项】
1.一种从发酵液中分离提取4-羟基异亮氨酸的方法，该技术从发酵液中分离提取4-羟基异亮氨酸，首先将4-羟基异亮氨酸发酵液通过双膜即微滤膜、超滤膜分离系统错流过滤去除发酵液中的菌体、大部分蛋白和部分色素，然后通过阳离子交换柱除去杂酸酮戊二酸、粉末活性炭脱色、真空浓缩、冷冻结晶、离心收集产品和干燥成品操作步骤，得到纯度97.0 %以上的4-羟基异亮氨酸结晶，收率达到65 %以上，具体步骤如下: a、将4-羟基异亮氨酸发酵液经活菌灭活，用盐酸调节pH为4.0，进入微滤膜分离系统进行微滤，得到去除菌体的4-羟基异亮氨酸微滤液以及菌体蛋白； b、将经a步得到澄清的4-羟基异亮氨酸过滤液栗入超滤膜过滤器，对过滤液进行除蛋白和脱色处理，操作温度为20-50°C，操作压力为0.0l-0.1MPa，得到4-羟基异亮氨酸过滤液； c、将b步获得的过滤液上732阳离子交换树脂吸附，吸附饱和后用去离子水反洗，之后采用2 % -7 %的氨水洗脱，收集pH为7.0-10.5的4-羟基异亮氨酸高流分洗脱液； d、将c步获得高流分洗脱液加入洗脱液重量的0.05%-2%的活性炭脱色，温度30-600C，搅拌脱色20-30min，过滤获得4-羟基异亮氨酸脱色液； e、将d步获得的脱色液用盐酸调pH为7.0-8.0后进行减压蒸发至原体积液的10%-20%，获得含有大量4-羟基异亮氨酸晶体的悬混液； f、将e步得到的4-羟基异亮氨酸晶体的悬混液放置于4°C结晶2-10h，过滤，获得4-羟基异亮氨酸晶体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于上述a步所述微滤膜分离系统采用金属膜分离系统，微滤膜孔径为50nm，操作温度为20?80°C，进膜压力与出膜压力差为0.01?0.1Mpa，过滤过程分多次利用纯化水顶洗，直至浓液中4-羟基异亮氨酸含量低于2.0g/L后停机，得到除去菌体的4-羟基异亮氨酸微滤液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于b步所述超滤膜过滤器采用中空纤维膜分离系统，截留分子量为6000，其操作条件为pH 2-12，操作温度20-50°C，进膜压力与出膜压力差为0.01-0.1MPa，得到4-羟基异亮氨酸过滤液。
【专利摘要】一种从发酵液中分离提取4-羟基异亮氨酸的方法，该方法首先通过双膜即微滤膜、超滤膜分离系统错流过滤去除发酵液中的菌体、大部分蛋白和色素，然后通过阳离子交换柱除去酮戊二酸等杂酸、粉末活性炭脱色、真空浓缩、冷冻结晶、离心收集产品、干燥成品操作步骤，得到纯度97.0％以上的4-羟基异亮氨酸结晶，收率达到65％以上。本发明采用微滤和超滤双膜过滤菌体蛋白，菌体蛋白去除彻底，过滤液澄清透明；采用阳离子离子交换工艺，高效去除难分离的酮戊二酸等杂质。
【IPC分类】C07C229/22, C07C227/40
【公开号】CN105566136
【申请号】CN201610033463
【发明人】陈宁, 麻杰, 徐庆阳, 范晓光, 谢希贤, 张成林, 李燕军
【申请人】天津科技大学
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月19日