一种制备灵芝胞外多糖的方法_2

文档序号:9919830阅读:来源:国知局
0042](VI):葡萄糖的质量百分含量为3.0%、酵母粉的质量百分含量为1.5%,MgSO4.7Η20的质量百分含量为0.1%、ΚΗ2Ρ04的质量百分含量为0.2%、汉麻杆粉的质量百分含量为3.0%,余量为水;
[0043](VH):葡萄糖的质量百分含量为2.5%、酵母粉的质量百分含量为1.5%,MgSO4.7H20的质量百分含量为0.1 %、1(!12?04的质量百分含量为0.2%、栎木粉的质量百分含量为1.0%,余量为水;
[0044](Μ):葡萄糖的质量百分含量为2.5%、酵母粉的质量百分含量为1.5%,MgSO4.7H20的质量百分含量为0.1%、KH2P04的质量百分含量为0.2%、汉麻杆粉的质量百分含量为1.0%,余量为水。
[0045]以上任一所述灵芝具体可为“沪农灵芝I号”(即上海市农业科学院食用菌研究所的“沪农灵芝I号”)。
[0046]以上任一所述栎木粉具体可为:将干燥的栎树木材粉碎成粒径为50-150目的粉末。
[0047]以上任一所述汉麻杆粉具体可为:将干燥的汉麻杆粉碎成粒径为50-150目的粉末。
[0048]本发明的优势在于:
[0049](I)在培养基中添加木质素类物质,可有效地提高发酵液中胞外多糖的产量,其胞外多糖产量是未添加木质素类物质的1-2倍;
[0050](2)发酵工艺简单,发酵时间相对较短,生产效率相对较高,适合工业化生产;
[0051](3)栎木粉是培养灵芝子实体原料的废弃物,汉麻杆是去除汉麻皮(主要为麻纤维)和汉麻叶(用作提取)后的废弃物,且均无毒副作用,添加量较少,原料成本较低。
【具体实施方式】
[0052]以下的实施例便于更好地理解本发明,但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值。
[0053]实施例中所用的灵芝(GanodermaIucidum)为上海市农业科学院食用菌研究所的“沪农灵芝I号”。栎木粉:将干燥的栎树木材粉碎成粒径为50-150目的粉末。汉麻杆粉:将干燥的汉麻杆粉碎成粒径为50-150目的粉末。
[0054]种子液:灵芝菌种接种至种子培养基,28°C,ISOrpm振荡培养,得到菌浓度为3-4mg/mL的种子液(3-4mg指的是菌体干重)。种子培养基(pH6.0):葡萄糖20g/L、酵母粉5.0g/L^KH2PO41.0g/L,MgSO4.7H20 1.0g/L,余量为蒸馏水。
[0055]实施例中所用的溶液,如无特殊说明,均为水溶液。
[0056]实施例中采用苯酚-硫酸法检测胞外多糖,描述有苯酚-硫酸法的参考文献如下:范传颍,陶正明,吴志刚.苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定铁皮石斛中多糖含量的比较[J].浙江农业科学,2013(7):799-801。
[0057]实施例1、
[0058]液体培养基1(%代表质量百分含量):葡萄糖3.0%、酵母粉1.5%、MgS04.7H200.1%,KH2PO4 0.2%、栎木粉1.0%,余量为蒸馏水。
[0059]对照培养基1:不含有栎木粉,其它同液体培养基I。
[0060]1、将15mL种子液接种至装有135mL液体培养基I (或对照培养基I)的500mL摇瓶中,28 °C、180rpm振荡培养5天。
[0061]2、完成步骤I后,取整个发酵体系,进行抽滤并收集液相(收集到的液相的体积为140-146mL)o
[0062]3、取5mL步骤2得到的液相,加入4倍体积的95% (体积百分含量)乙醇水溶液,4°C静置12小时,然后1000rpm离心20min,收集沉淀。
[0063]4、取步骤3得到的沉淀,用10mL蒸馏水复溶,得胞外多糖溶液。
[0064]5、取步骤4得到的胞外多糖溶液,检测其中的胞外多糖含量。
[0065]设置五次重复实验,结果取平均值。
[0066]采用对照培养基I进行上述步骤,步骤4得到的胞外多糖溶液中的胞外多糖浓度为1.35 ±0.05mg/mL。采用液体培养基I进行上述步骤,步骤4得到的胞外多糖溶液中的胞外多糖浓度为1.62 ± 0.08mg/mL。结果表明,采用液体培养基I的胞外多糖产量是采用对照培养基I的1.2倍。
[0067]实施例2、
[0068]液体培养基Π(%代表质量百分含量):葡萄糖3.0%、酵母粉1.5%、MgS04.7H200.1% ,KH2PO4 0.2%,栎木粉2.0%,余量为蒸馏水O
[0069]对照培养基Π:不含有栎木粉,其它同液体培养基Π。
[0070]1、将15mL种子液接种至装有135mL液体培养基Π (或对照培养基Π )的500mL摇瓶中,28 °C、180rpm振荡培养5天。
[0071]2、完成步骤I后,取整个发酵体系,进行抽滤并收集液相(收集到的液相的体积为140-146mL)o
[0072]3、取5mL步骤2得到的液相,加入4倍体积的95% (体积百分含量)乙醇水溶液,4°C静置12小时,然后1000rpm离心20min,收集沉淀。
[0073]4、取步骤3得到的沉淀,用10mL蒸馏水复溶,得胞外多糖溶液。
[0074]5、取步骤4得到的胞外多糖溶液,检测其中的胞外多糖含量。
[0075]设置五次重复实验,结果取平均值。
[0076]采用对照培养基Π进行上述步骤,步骤4得到的胞外多糖溶液中的胞外多糖浓度为1.35±0.5mg/mL。采用液体培养基Π进行上述步骤,步骤4得到的胞外多糖溶液中的胞外多糖浓度为2.0 ± 0.03mg/mL。结果表明,采用液体培养基Π的胞外多糖产量是采用对照培养基Π的1.5倍。
[0077]实施例3、
[0078]液体培养基111(%代表质量百分含量):葡萄糖3.0%、酵母粉1.5%、1^304.7H200.1% ,KH2PO4 0.2%,栎木粉3.0%,余量为蒸馏水O
[0079]对照培养基m:不含有栎木粉,其它同液体培养基m。
[0080]1、将15mL种子液接种至装有135mL液体培养基ΙΠ (或对照培养基ΙΠ)的500mL摇瓶中,28 °C、180rpm振荡培养5天。
[0081]2、完成步骤I后,取整个发酵体系,进行抽滤并收集液相(收集到的液相的体积为140-146mL)o
[0082]3、取5mL步骤2得到的液相,加入4倍体积的95% (体积百分含量)乙醇水溶液,4°C静置12小时,然后1000rpm离心20min,收集沉淀。
[0083]4、取步骤3得到的沉淀,用10mL蒸馏水复溶,得胞外多糖溶液。
[0084]5、取步骤4得到的胞外多糖溶液,检测其中的胞外多糖含量。
[0085]设置五次重复实验,结果取平均值。
[0086]采用对照培养基m进行上述步骤,步骤4得到的胞外多糖溶液中的胞外多糖浓度为1.35±0.5mg/mL。采用液体培养基ΙΠ进行上述步骤,步骤4得到的胞外多糖溶液中的胞外多糖浓度为2.40±0.03mg/mL。结果表明,采用液体培养基ΙΠ的胞外多糖产量是采用对照培养基ΙΠ的1.8倍。
[0087]实施例4、
[0088]液体培养基IV(%代表质量百分含量):葡萄糖3.0%、酵母粉1.5%、MgS04.7H200.1% ,KH2PO4 0.2%,汉麻杆粉1.0%,余量为蒸馏水O
[0089]对照培养基IV:不含有汉麻杆粉,其它同液体培养基IV。
[0090]1、将15mL种子液接种至装有135mL液体培养基IV(或对照培养基IV)的500mL摇瓶中,28 °C、180rpm振荡培养5天。
[0091]2、完成步骤I后,取整个发酵体系,进行抽滤并收集液相(收集到的液相的体积为140-146mL)o
[0092]3、取5mL步骤2得到的液相,加入4倍体积的95% (体积百分含量)乙醇水溶液,4°C静置12小时,然后1000rpm离心20min,收集沉淀。
[0093]4、取步骤3得到的沉淀,用10mL蒸馏水复溶,得胞外多糖溶液。
[0094]5、取步骤4得到的胞外多糖溶液,检测其中的胞外多糖含量。
[0095]设置五次重复实验,结果取平均值。
[0096]采用对照培养基IV进行上述步骤,步骤4得到的胞外多糖溶液中的胞外多糖浓度为1.35±0.5mg/mL。采用液体培养基IV进行上述步骤,步骤4得到的胞外多糖溶液中的胞外多糖浓度为1.75±0.05mg/mL。结果表明,采用液体培养基IV的胞外多糖产量是采用对照培养基IV的1.3倍。
[0097]实施例5、
[0098]液体培养基¥(%代表质量百分含量):葡萄糖3.0%、酵母粉1.5%、1^304.7H200.1% ,KH2PO4 0.2%,汉麻杆粉2.0%,余量为蒸馏水。
[0099]对照培养基V:不含有汉麻杆粉,其它同液体培养基V。
[0100]1、将15mL种子液接种至装有135mL液体培养基V (或对照培养基V )的500mL摇瓶中,28 °C、180rpm振荡培养5天。
[0101]2、完成步骤I后,取整个发酵体系,进行抽滤并收集液相(收集到的液相的体积为140-146mL)o
[0102]3、取5mL步骤2得到的液相,加入4倍体积的95 % (体积百分含量)乙醇水溶液,4°C静置12小时,然后1000rpm离心20min,收集沉淀。
[0103]4、取步骤3得到的沉淀,用10mL蒸馏水复溶,得胞外多糖溶液。
[0104]5、取步骤4得到的胞外多糖溶液,检测其中的胞外多糖含量。
[0105]设置五次
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