一种香蕉b基因组鉴定的scar分子标记及其鉴定方法
【专利摘要】本发明属于植物分子生物学技术领域，具体涉及一种香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记及其鉴定方法。公开了一个可以鉴定香蕉品种是否含有B基因组的方法。利用IRAP分子标记gypsy?IRAP扩增条带，进行B基因组特异条带的回收、克隆测序，获得其序列，进行特异性引物设计，将gypsy?IRAP标记转化成表现为特异条带有无的SCAR分子标记，用于快速、准确的鉴定香蕉的B基因组，为品种鉴定以及香蕉的选育及品种改良提供良好的技术支持。
【专利说明】
-种香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标巧及其鉴定方法
技术领域
[0001] 本发明属于植物分子生物学技术领域，具体设及一种香蕉B基因组鉴定的SCAR分 子标记及其鉴定方法。
【背景技术】
[0002] 香蕉(Musa SPP.)属于芭蕉科芭蕉属，是世界上重要的热带水果之一，是除水稻、 小麦、玉米W外的第四大粮食作物(FA0，1992)，我国作为香蕉的主产国之一，至今己有两千 多年的栽培历史，主要集中在我国的广东、广西、福建、云南等省区。随着香蕉生产的迅速发 展，香蕉产业已经成为我国热带地区的农业支柱性产业。
[000引香蕉有2个祖先，即尖叶蕉（M.acuminata Colla，记为A基因组）和长梗蕉 (M.ba化isiana Colla，记为B基因组）。香蕉栽培种就是运2个原始野生蕉种内或种间杂交 后代进化而成的。香蕉的栽培品种，全世界约300多个，然而由于蕉类植物特殊的生物生态 学特性，如多倍体、无性繁殖、小染色体等，同时其形态特征极为相似，使得蕉类种质资源的 分类及系统学研究一直是个难题。目前国际国内对香蕉的分类比较混乱，没有统一、完善的 分类标准（李宝荣等，2002,热带农业科学，22(2): 35-38)。目前香蕉的分类习惯上沿用 Simmonds分类法，W两个基本野生种M.a州minata(AA型）和M.ba化isiana(BB型）的形态特 征为参照，结合染色体倍数，将各种栽培蕉分为44、444、448、48等类型。但是香蕉的形态学 性状易受到环境和生长发育期的影响，运种分类往往出现偏差，且周期长、需要大量人力物 力。开发更为简便快速准确的香蕉基因组鉴定方法具有十分重要的意义。
[0004] Robinson等研究表明香蕉的硬度、耐旱性、抗病性、营养改良、淀粉提高等基因是 受B基因组控制的（Robinson,J.C. 1996.Bananas and Plantains.CAB International, U.K.)"Ramadass等研究发现，香蕉在处于干旱胁迫时，大部分A基因组占主导的品种与B基 因组占主导的品种相比较，其产量性状下降严重（Ramadas S R等.1 993，Madras Agricultural Journal,80(3): 130-133.)。黄建昌等研究发现香蕉的遗传基础与抗旱性密 切相关，即ABB类抗旱性强，AAB类次之，AAA类最弱（黄建昌.1999，仲惜农业技术学院学报， 12(4) :40-42.)。可见B基因组中带有重要的优良性状基因，B基因组的鉴定对香蕉品种选育 及品种改良具有重要的意义。
[0005] 随着生物技术的发展，许多研究者研究了利用分子生物技术的手段来研究香蕉的 基因组类型，分子标记技术具有稳定、简便、可靠、不易受环境影响优点。Pilla等利用RAPD 标记筛选出了A、B、BB基因组的特异性标记(Pi 11a等，2000,Genome，43:763-767) ;Nwakanma 等根据香蕉核糖体DNA内转录间隔区（ITS)限制性酶切位点的差异，利用PCR-RFLP技术来鉴 定香蕉的A、B基因组(Nwakanma等，2003theoretical and A卵lied, 108:154-159);化ir等 利用IRAP标记筛选出B基因组的特异性标记gyps厂IRAP、BB基因组的特异性标记copia- IRAP(化ir等，2005，Ewh5rtica，144: 285-290)。国内关于香蕉基因组的特异性标记研究报 道很少。发明人应用了 W上4种分子标记，其中口S的PCR-RFLPW及copia-IRAP标记需要酶 切，耗时、成本高;RATO标记和gypsy-IRAP标记，由于其扩增后条带多而复杂，在不同的蕉类 中会出现条带大小的差异，有时难于判断，对DM提取质量W及电泳的要求比较高。
【发明内容】
[0006] 为了解决上述问题，本发明的目的之一在于提供一种香蕉B基因组鉴定的SCAR分 子标记；
[0007] 本发明的目的之二是提供了所述香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记鉴定香蕉B基 因组的方法；
[0008] 本发明的目的之S是提供了所述鉴定的范围。
[0009] 本发明是通过W下技术方案来实现的：
[0010] 一种香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记，该标记来源于IRAP标记gyps厂IRAP的 333bp的特异条带，其基因序列为：
[0011] CTTAGGCAAAACCAGCTAAGTCCGTGACAGAGTGGCCGATAGCACTGTGCCACCTGGG
[0012] GGGTTCCAGGGTGCTGAGATGGCTGACATTTCGCTCTACTCACCACGGTCACCGCAGT
[0013] ATGCAAAAAGGGCCCAAAAATGGGCCAAAACAACCCAAAAAGCTGGCCAAAATTGGT
[0014] TATTTTTGTCTGTGCGAGCGAGCAGCGAACTGTCACGACTTAGCTGGAATTGTTTAAGT
[0015] CGTGAGGCACCCTTGCGGCTAAGATGCGAACTTTGCTTGAGTTACCTAAGTCGCGAAG
[0016] CACCCTTGCACCAACTTCTCGGACTTAGCTGGTTTTGCCTAAA
[0017] 所述香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记，片段长度为257bp，在原特异条带的第 6 化P-31 化P。
[0018] 所述香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记，能准确用于鉴定的香蕉有香牙蕉、大蕉、 粉蕉、粉大蕉、龙牙蕉、贡蕉、四倍体香蕉和野生蕉。
[0019] 用所述香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记鉴定香蕉B基因组的方法：
[0020] (1)、提取香蕉叶片DNA;
[0021] (2)、用SCAR标记的特异引物11/13进行PCR扩增检测；
[0022] (3)、检测:结果表现为257bp特异条带的有无;有该特异条带，则该香蕉品种中有B 基因组，反之，则该香蕉品种中无 B基因组。
[002引较佳地，所述用SCAR标记的特异引物11/13序列为：
[0024] 正向引物II :5'-CTCAAGCAAAGTTCGCATCT-3'
[0025] 反向引物 13:5 ' -TAAGTCCGTGACAGAGTGGC-3 '。
[0026] 较佳地，所述扩增方法为：
[0027] 最优的PCR程序:94°C预变性5min; 94°C变性30s，60 °C退火30s，72 °C延伸30s，循环 35 次；72°C 延伸 lOmin。
[0028] 最优的PCR体系：20i^l的反应体积含有10Xbuffer(含Mg2+)2ul，0.2mmol/LdNTPs (2.5nM)化 1，上下引物（1 Oumo 1 /L)分别 1 u 1，DM (50ng/L) 1 u 1 及 1.2 5U hgONA聚合酶。
[0029] 较佳地，所检测方法为:采用1.2%的琼脂糖凝胶，110v电压电泳30分钟，紫外灯下 观察。
[0030] 本发明利用IRAP分子标记gypsy-IRAP扩增条带，进行B基因组特异条带的回收、克 隆测序，获得其序列，进行特异性引物设计，将gypsy-IRAP标记转化成表现为特异条带有无 的SCAR分子标记，用于快速、准确的鉴定香蕉的B基因组，为品种鉴定W及香蕉的选育及品 种改良提供良好的技术支持。可w准确鉴定香蕉包括香牙蕉、大蕉、粉蕉、粉大蕉、龙牙蕉、 贡蕉、四倍体香蕉、野生蕉中是否含有B基因组。具有准确、简便、稳定的优点。为香蕉品种鉴 定、香蕉新品种选育及品种改良提供技术支持。
【附图说明】
[0031] 图1，1:1006口的0魁1曰也1-16号样品为:泰国贡蕉、云南小米蕉、花叶蕉、紫花蕉， 红花蕉、地涌金莲、盛2、天宝矮蕉、东竞高把大蕉、加纳野蕉、粉杂1号、桂平大蕉、防城大蕉、 BB野蕉、银丰1号、大蜜舍。
[0032] 图2，M:2000bp DNA Mark;样品1-11为:大蜜舍、花叶蕉、农科1号、泰国贡蕉、佳丽、 紫茎蕉、粉杂1号、抗病大蕉、华农中把大蕉、BB野蕉、银丰1号。
[0033] 图3，M:2000bp DNA Mark;样品1-12为大蕉：东竞中把大蕉、华农中把大蕉、矮大 蕉、罗巧大蕉、=江大蕉、四方大蕉、中山大蕉、番离大蕉、潮州大蕉、广西中把大蕉、龙华大 蕉、海南大蕉。
[0034] 图4，M:2000bp DNA Mark;样品1-15为粉蕉:粉杂1号、中粉、东竞白粉、孟加拉粉大 蕉、海南粉大蕉。香牙蕉:大蜜舍、农科1号、8818-1、龙州中把、己西、齐尾、粤丰1号、泰国香 蕉、天宝矮蕉、荷兰香蕉。
[0035] 图5，M:2000bp DNA Mark;样品1-9为野蕉:BB野蕉、云南那邦野蕉、五山野蕉、天宝 野蕉、广西凭祥野蕉、加纳野蕉、花叶蕉、小果野蕉、红花蕉。
[0036] 图6，M:2000bp DNA Mark;样品1-9为龙牙蕉：紫茎蕉、金沙香、金指、过山香贡蕉、 海贡、贡蕉、贡选、泰国贡蕉、佳丽。
[0037] 图7，M:2000bp DNA Mark;样品1-7为四倍体香蕉:银丰1号、1297、1507、印尼蕉、千 旁培、1307、飞亚。
[00測具体的实施方式
[0039] 通过W下实例进一步对本发明进行了说明与定义而并非限制。通过实例，科研人 员可W对本发明有更清楚的了解，可W在此基础上对本发明做出一定的变更和修改，W获 得不同的研究效果。下述实例中的实验方法，如无特殊说明均为常规方法。实验过程中设及 到的试剂均为常规试剂，使用均参照产品使用说明书使用。
[0040] 一、香蕉叶片的DNA提取
[0041] 选取不同基因型的香蕉品种(表1)，样品采至东竞市香蕉蔬菜研究所香蕉资源圃， 分别进行DNA提取。
[0042] DNA提取方法采用改良CTAB法，具体操作如下：
[0043] 1、香蕉的DNA提取，采用香蕉的叶片，选取没有病虫害的新抽出的嫩叶，用水冲洗 干净，惊干后取0.2克，用液氮进行研磨，研磨的过程中加入少量交联聚乙締化咯烧酬 (PVPP)，将叶片快速研磨至粉末状。
[0044] 2、在研磨好的样品中加入80化1的预热好的4*CTAB，混匀，65 °C水浴30min，期间轻 摇样品3次，12000巧m离屯、1 Omin。
[0045] 3、加入600]il氯仿-异戊醇（24:1)，混匀，12000巧m离屯、6min。
[0046] 4、吸取上清，重复步骤3,进行第二次抽提。
[0047] 5、吸取上清，加入等体积的异丙醇（-20°C预冷），室溫静置5min，12000巧m离屯、 10min〇
[004引 6、弃上清，用75 %预冷的乙醇漂洗2次。
[0049] 7、真空抽干，加入SOiilTE缓冲液，常溫溶解，-20°C冰箱保存备用。
[0050] 通过W上改良CTAB法提取香蕉叶片DNA，采用BioDropiiLite(超微量蛋白核酸分析 仪)检测其浓度和纯度，DNA浓度可达到80-150ng. iil/i，0D260/0D280 = 1.8-2.0，质量较好， 符合试验要求。
[0051] 表1供试香蕉品种表
[0化2]
[0053]注:东竞中把大蕉、东竞白粉、为东竞本地品种;华农中把大蕉、1297、1507、1307引 自华南农业大学;大蜜舍、农科1号、8818-1、龙州中把、己西、齐尾、粤丰1号、泰国香蕉、天宝 矮蕉、荷兰香蕉、贡蕉、贡选、海贡、佳丽、泰国贡蕉、过山香、紫茎蕉、金指、金沙香、矮大蕉、 罗巧大蕉、=江大蕉、四方大蕉、中山大蕉、番离大蕉、潮州大蕉、广西中把大蕉、龙华大蕉、 海南大蕉、粉杂1号、中粉、孟加拉粉大蕉、海南粉大蕉、BB野蕉、云南那邦野蕉、五山野蕉、天 宝野蕉、广西凭祥野蕉、加纳野蕉、花叶蕉、小果野蕉、红花蕉、银丰1号、金手指、印尼蕉、飞 亚引自广东省农科院果树研究所。
[0化4]二、香蕉B基因组特异条带回收及测序
[0055]供试香蕉品种为:泰国贡蕉、云南小米蕉、花叶蕉、紫花蕉，红花蕉、地涌金莲、盛2、 天宝矮蕉、东竞高把大蕉、加纳野蕉、粉杂1号、桂平大蕉、防城大蕉、BB野蕉、银丰1号、大蜜 舍。PCR扩增及分离参照化ir等设计的IRAP引物Gy LTRev 5-CTTAGGCAAAACCAGCTAAGTCCG-3 W及PCR程序(化ir等，2005，化曲^ica，144:285-290)，采用1.5 %的琼脂糖凝胶电泳，含有 B基因组的香蕉品种:东竞高把大蕉、粉杂1号、桂平大蕉、防城大蕉、BB野蕉、银丰1号出现一 条的特异条带（图1)。将该特异条带在紫外灯下切下，采用Tiangel Midi purification kit试剂盒进行产物回收。将回收产物送样至上海派森诺生物科技有限公司，进行TA克隆及 每个品种挑取5个克隆进行测序(PMD18-T载体连接、转化、涂板、菌检）。测序后得到了供试 品种中6个品种的333bp的条带的序列。
[0056] 东竞高把大蕉(333bp)
[0057] CTTAGGCAAAACCAGCTAAGTCCGTGACAGAGTGGCCGATAGCACTGTGCCACCTGGG
[005引 GGGTTCCAGGGTGCTGAGATGGCTGACATTTCGCTCTACTCACCACGGTCACCGCAGT
[0059] ATGCAAAAAGGGCCCAAAAATGGGCCAAAACAACCCAAAAAGCTGGCCAAAATTGGT
[0060] TATTTTTGTCTGTGCGAGCGAGCAGCGAACTGTCACGACTTAGCTGGAATTGTTTAAGT [0061 ] CGTGAGGCACCCTTGCGGCTAAGATGCGAACTTTGCTTGAGTTACCTAAGTCGCGAAG
[0062] CACCCTTGCACCAACTTCTCGGACTTAGCTGGTTTTGCCTAAA
[0063] 粉杂 1 号（333bp)
[0064] CTTAGGCAAAACCAGCTAAGTCCGTGACAGAGTGGCCGATAGCACTGTGCCACCTGGG [00化]GGGTTCCAGGGTGCTGAGATGGCTGACATTTCGCTCTACTCACCACGGTCACCGCAGT
[0066] ATGCAAAAAGGGCCCAAAAATGGGCCAAAACAACCCAAAAAGCTGGCCAAAATTGGT
[0067] TATTTTTGTCTGTGCGAGCGAGCAGCGAACTGTCACGACTTAGCTGGAATTGTTTAAGT
[006引 CGTGAGGCACCCTTGCGGCTAAGATGCGAACTTTGCTTGAGTTACCTAAGTCGCGAAG
[0069] CACCCTTGCACCAACTTCTCGGACTTAGCTGGTTTTGCCTAAA
[0070] 桂平大蕉(333bp)
[0071] CTTAGGCAAAACCAGCTAAGTCCGTGACAGAGTGGCCGATAGCACTGTGCCACCTGGG [00。] GGGTTCCAGGGTGCTGAGATGGCTGACATTTCGCTCTACTCACCACGGTCACCGCAGT
[0073] ATGCAAAAAGGGCCCAAAAATGGGCCAAAACAACCCAAAAAGCTGGCCAAAATTGGT
[0074] TATTTTTGTCTGTGCGAGCGAGCAGCGAACTGTCACGACTTAGCTGGAATTGTTTAAGT [00 巧]CGTGAGGCACCCTTGCGGCTAAGATGCGAACTTTGCTTGAGTTACCTAAGTCGCGAAG
[0076] CACCCTTGCACCAACTTCTCGGACTTAGCTGGTTTTGCCTAAA
[0077] 防城大蕉(333bp)
[0078] CTTAGGCAAAACCAGCTAAGTCCGTGACAGAGTGGCCGATAGCACTGTGCCACCTGGG [00 巧]GGGTTCCAGGGTGCTGAGATGGCTGACATTTCGCTCTACTCACCACGGTCACCGCAGT [0080] ATGCAAAAAGGGCCCAAAAATGGGCCAAAACAACCCAAAAAGCTGGCCAAAATTGGT [0081 ] TATTTTTGTCTGTGCGAGCGAGCAGCGAACTGTCACGACTTAGCTGGAATTGTTTAAGT
[0082] CGTGAGGCACCCTTGCGGCTAAGATGCGAACTTTGCTTGAGTTACCTAAGTCGCGAAG
[0083] CACCCTTGCACCAACTTCTCGGACTTAGCTGGTTTTGCCTAAA
[0084] BB 野蕉（333bp)
[00 化]CTTAGGCAAAACCAGCTAAGTCCGTGACAGAGTGGCCGATAGCACTGTGCCACCTGGG [00 化]GGGTTCCAGGGTGCTGAGATGGCTGACATTTCGCTCTACTCACCACGGTCACCGCAGT [0087] ATGCAAAAAGGGCCCAAAAATGGGCCAAAACAACCCAAAAAGCTGGCCAAAATTGGT
[0088] TATTTTTGTCTGTGCGAGCGAGCAGCGAACTGTCACGACTTAGCTGGAATTGTTTAAGT
[0089] CGTGAGGCACCCTTGCGGCTAAGATGCGAACTTTGCTTGAGTTACCTAAGTCGCGAAG
[0090] CACCCTTGCACCAACTTCTCGGACTTAGCTGGTTTTGCCTAAA
[0091] 银丰 1 号（333bp)
[00 巧]CTTAGGCAAAACCAGCTAAGTCCGTGACAGAGTGGCCGATAGCACTGTGCCACCTGGG [OOW ] GGGTTCCAGGGTGCTGAGATGGCTGACATTTCGCTCTACTCACCACGGTCACCGCAGT
[0094] ATGCAAAAAGGGCCCAAAAATGGGCCAAAACAACCCAAAAAGCTGGCCAAAATTGGT [00 巧]TATTTTTGTCTGTGCGAGCGAGCAGCGAACTGTCACGACTTAGCTGGAATTGTTTMGT
[0096] CGTGAGGCACCCTTGCGGCTAAGATGCGAACTTTGCTTGAGTTACCTAAGTCGCGAAG
[0097] CACCCTTGCACCAACTTCTCGGACTTAGCTGGTTTTGCCTAAA
[0098] S、香蕉B基因组鉴定的SCAR标记的引物筛选及PCR扩增优化
[0099] 将回收测序获得的东竞高把大蕉、粉杂1号、桂平大蕉、BB野蕉、防城大蕉、银丰1号 的序列在聚类分析软件MAGE6.0中进行排列比对发现序列基本一致。采用Primer premier 5.0设计了3对引物(表2)。
[0100] 表2SCAR引物序列表
[0101]
[0102] 采用香蕉品种:大蜜舍、花叶蕉、农科1号、泰国贡蕉、佳丽、紫茎蕉、粉杂1号、抗病 大蕉、华农中把大蕉、BB野蕉、银丰1号等11个香蕉品种进行引物筛选，其中11/13运对引物 扩增的目的条带清晰（图2)，其中紫茎蕉、粉杂1号、抗病大蕉、华农中把大蕉、BB野蕉、银丰1 号等品种扩增出了 257bp的特异条带，大蜜舍、花叶蕉、农科1号、泰国贡蕉、佳丽等品种没有 扩增出该特异条带，与其基因型一致，且无其他杂带，符合SCAR标记的要求，该条带位于原 特异条带的第61 bp-317bp。
[0103] 其最优的PCR程序:94°C预变性5min;94°C变性30s，60°C退火30s，72°C延伸30s，循 环 35 次；72°C 延伸 lOmin。
[0104] 其最优的PCR体系：20iU的反应体积含有lOXbuffer(含Mg2+)2ul，0.2mmol/L dNTPs (2.5nM) 2u 1，上下引物（1 Oumo 1 /L)分别 1U1，DM(50ng/L) 1U1 及 1.25U hgONA聚合酶.
[0105] 检测方法为:采用1.2%的琼脂糖凝胶上，llOv电压电泳30分钟，在紫外灯下观察。
[0106] 四、香蕉B基因组鉴定的SCAR标记的适用范围检测
[0107] 选取不同基因型的香蕉:香牙蕉、贡蕉、龙牙蕉、大蕉、粉蕉、粉大蕉、野蕉、四倍体 香蕉（品种见表1)，共计52个，采用11/13运对引物进行扩增检测，对本发明中香蕉B基因组 鉴定的SCAR标记的适用范围进行检测。
[0108] 从图3看，所有进行检测的12个大蕉品种，均能扩增出了 257bp的特异条带，也就是 均含有B基因组，符合大蕉的基因组类型。
[0109] 从图4看，供试的3个粉蕉、2个粉大蕉均检测扩增出了257bp的特异条带，即含有B 基因组；10个香牙蕉品种未扩增出该特异性条带，即不含有B基因组，符合粉蕉、粉大蕉、香 芽蕉的基因组类型。
[0110] 从图5看，供试的野蕉中BB基因型的野蕉:BB野蕉、云南那邦野蕉、五山野蕉、天宝 野蕉、广西凭祥野蕉等5个品种扩增出了 257bp的特异条带，也就是均含有B基因组，而AA基 因型的野蕉:加纳野蕉、花叶蕉、小果野蕉、红花蕉等4个品种未扩增出特异条带，即不含有B 基因组，符合其基因组类型。
[0111] 从图6看，供试的7个四倍体香蕉品种中银丰1号、金手指、印尼蕉、1297、1507等5个 品种扩增出了257bp的特异条带，即含有B基因组；1307、飞亚等2个品种未扩增出该特异性 条带，即不含有B基因组，符合其基因组类型。
[0112] 总之，本发明中的SCA財示记可W准确的鉴定出运52个香蕉品种中是否含有B基因 组，检测的香蕉品种涵盖了香牙蕉、贡蕉、龙牙蕉、大蕉、粉蕉、粉大蕉、野蕉、四倍体香蕉，可 见该SCA財示记的适用范围广，准确性高，且具有操作简单、快速的特点。
[0113] 上述实施例，只是本发明的较佳实施例，并非用来限制本发明实施范围，故凡W本 发明权利要求所述的特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括在本发明权利要求范围 之内。
【主权项】
1. 一种香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记，其特征在于，该标记来源于IRAP标记gypsy-IRAP的333bp的特异条带，其序列特征为： CTTAGGCAAAACCAGCTAAGTCCGTGACAGAGTGGCCGATAGCACTGTGCCACCTGGG GGGTTCCAGGGTGCTGAGATGGCTGACATTTCGCTCTACTCACCACGGTCACCGCAGT ATGCAAAAAGGGCCCAAAAATGGGCCAAAACAACCCAAAAAGCTGGCCAAAATTGGT TATTTTTGTCTGTGCGAGCGAGCAGCGAACTGTCACGACTTAGCTGGAATTGTTTAAGT CGTGAGGCACCCTTGCGGCTAAGATGCGAACTTTGCTTGAGTTACCTAAGTCGCGAAG CACCCTTGCACCAACTTCTCGGACTTAGCTGGTTTTGCCTAAA。2. 如权利要求1所述香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记，其特征在于，片段长度为 257bp，在原特异条带的第61bp-317bp。3. 如权利要求1所述香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记，其特征在于，所述香蕉为香牙 蕉、大蕉、粉蕉、粉大蕉、龙牙蕉、贡蕉、四倍体香蕉和野生蕉。4. 用权利要求1-3中任意一项所述香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记鉴定香蕉B基因组 的方法，其特征在于， (1) 、提取香蕉叶片DNA; (2) 、用SCAR标记的特异引物11/13进行PCR扩增检测； (3) 、检测:结果表现为257bp特异条带的有无;有该特异条带，则该香蕉品种中有B基因 组，反之，则该香蕉品种中无 B基因组。5. 如权利要求4所述香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记鉴定香蕉B基因组的方法，其特 征在于，所述用SCAR标记的特异引物11/13序列为： 正向引物 11:5 ' -CTCAAGCAAAGTTCGCATCT-3 ' 反向引物 13:5 ' -TAAGTCCGTGACAGAGTGGC-3 '。6. 如权利要求4所述香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记鉴定香蕉B基因组的方法，其特 征在于，所述扩增方法为： PCR 程序：94°C 预变性 5min;94°C 变性 30s，60°C 退火 30s，72°C 延伸 30s，循环 35 次；72°C 延伸lOmin。 PCR体系：20μ1的反应体积含有10 X缓冲液2ul，0.2mmol/L dNTPs(2.5nM)2ul，上下引 物（1 Oumo 1 /L)分别 1 u 1，DNA (50ng/L) 1 u 1 及 1 · 2 5U TaqDNA聚合酶。7. 如权利要求4所述香蕉B基因组鉴定的SCAR分子标记鉴定香蕉B基因组的方法，其特 征在于，所检测方法为:采用1.2%的琼脂糖凝胶，110v电压电泳30分钟，紫外灯下观察。
【文档编号】C12Q1/68GK106048032SQ201610508538
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月21日
【发明人】王芳, 吕顺, 牛玉清, 夏玲, 曾莉莎
【申请人】东莞市香蕉蔬菜研究所