l/L，pH=5的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL浓度为2 mol/L的过氧化氢，0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐，10 yL浓度为4.76mg/mL的实例I制备的牛血清白蛋白-铀/祕复合纳米材料或牛血清白蛋白-铀纳米材料水溶液，混合后37 °C温浴10分钟，测定紫外可见吸收光谱。如图1所示，牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料和牛血清白蛋白-铂纳米材料均能催化3，3 ’，5，5 ’ -四甲基联苯胺盐酸盐显色，在652 nm处有一最大吸收峰，牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶活性明显高于牛血清白蛋白-铀纳米材料。
[0039]实例3:
在2.79 mL浓度为100 mmol/L，不同pH值(2-10)的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL浓度为2 mol/L的过氧化氢，0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐，10 yL浓度为4.76 mg/mL的实例I制备的牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液，混合后37 V温浴10分钟，测定652 nm波长处吸光度。如图2所示，牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料的模拟过氧化物酶活性在pH=5时达到最大。
[0040]实例4:
在2.79 mL浓度为100 mmol/L，pH=5的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL浓度为2 mol/L的过氧化氢，0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐，10 yL浓度为4.76mg/mL的实例I制备的牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液，混合后在不同的温度(20-70 °C)下温浴10分钟，测定652 nm波长处吸光度。如图3所示，牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料的模拟过氧化物酶活性在37°C时达到最大。
[0041]实例5:
在2.79 mL浓度为100 mmol/L，pH=5的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL浓度为2 mol/L的过氧化氢，0.2 mL不同浓度(0.025-0.5 mmol/L)的3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐，10 yL浓度为4.76 mg/mL的实例I制备的牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液，混合后37 V温浴I分钟，测定652 nm波长处的吸光度值，根据米氏方程进行拟合。如图4所示，牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料对TMB的米氏常数为0.054 mmol/L。
[0042]实例6:
在2.79 mL浓度为100 mmol/L，pH=5的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL不同浓度(0.0045-0.35 mol/L)的过氧化氢，0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐，10此浓度为4.76 mg/mL的实例I制备的牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液，混合后37 °C温浴I分钟，测定652 nm波长处的吸光度值，根据米氏方程进行拟合。如图5所示，牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料对过氧化氢的米氏常数为13.24 mmol/L。
[0043]实例7:
将牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液置于不同PH条件下保存2小时后，测定保存pH对其模拟过氧化物酶活性的影响。在2.79 mL浓度为100 mmol/L，pH=5的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL浓度为2 mol/L的过氧化氢，0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐，10 μ?^度为4.76 mg/mL的实例I制备的牛血清白蛋白-铀/祕复合纳米材料水溶液，混合后37 °C温浴10分钟，测定652 nm波长处的吸光度值。如图6所示，牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料在PH 3?11的条件下保存2小时后模拟过氧化物酶活性均无明显变化，具有良好的稳定性。
[0044]实例8:
将牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液置于不同浓度氯化钠中保存2小时后，测定氯化钠浓度对其模拟过氧化物酶活性的影响。在2.79 mL浓度为100 mmol/L，pH=5的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL浓度为2 mol/L的过氧化氢，0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐，10 yL浓度为4.76 mg/mL的实例I制备的牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液，混合后37 °C温浴10分钟，测定652 nm波长处的吸光度值。如图7所示，牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料在O?7.5 mol/L的氯化钠中保存2小时后模拟过氧化物酶活性均无明显变化，具有良好的稳定性。
[0045]实例9:
将牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液置于不同温度条件下保存2小时后，测定保存温度对其模拟过氧化物酶活性的影响。在2.79 mL浓度为100 mmol/L，pH=5的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL浓度为2 mol/L的过氧化氢，0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐，10 口1^浓度为4.76 mg/mL的实例I制备的牛血清白蛋白-铀/祕复合纳米材料水溶液，混合后37 °C温浴10分钟，测定652 nm波长处的吸光度值。如图8所示，牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料在30?80 °C的温度条件下保存2小时后模拟过氧化物酶活性均无明显变化，具有良好的稳定性。
[0046]实例10:
将牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液置于室温下保存30天，测定其模拟过氧化物酶活性。在2.79 mL浓度为100 mmol/L，pH=5的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL浓度为2mol/L的过氧化氢，0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐，10 yL浓度为4.76 mg/mL的实例I制备的牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液，混合后37 V温浴10分钟，测定652 nm波长处的吸光度值。结果所示牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料在室温放置了 30天之后其相对催化活性可达到98.9%。
[0047]以上所述仅为本发明的典型实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改，等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种牛血清白蛋白-铀/祕复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是由下述方法制备而成的:在5 mL浓度为50 mg/mL的牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL浓度为16 mmol/L氯铀酸溶液和0.5 11^浓度为1.5 mol/L氢氧化钠溶液，混匀后水浴80 °C下反应2 h，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-铂纳米复合材料水溶液，将牛血清白蛋白-铂纳米复合材料水溶液冷冻干燥得到牛血清白蛋白_铀纳米复合材料的粉末;在0.6 mL浓度为23.8 mg/mL的牛血清白蛋白-铀纳米复合材料水溶液中加入0.6 mL浓度为0.5 mmol/L的硝酸铋溶液和1.8 mL浓度为10 mmol/L，pH=7的磷酸盐缓冲液，混匀后水浴80 °C下反应2.5 h，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料的水溶液。2.根据权利要求1所述的一种牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是在磷酸盐缓冲液中依次加入过氧化氢，3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐和牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液，混合后温浴，溶液由无色变为蓝色，在652 nm处有一最大吸收峰。3.根据权利要求1或2所述的一种牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是催化过氧化氢氧化3，3 ’，5，5 ’ -四甲基联苯胺盐酸盐的活性在pH=5时达到最大。4.根据权利要求1或2所述的一种牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是催化过氧化氢氧化3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐的活性在37 °C时达到最大。5.根据权利要求1或2所述的一种牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是对3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐的米氏常数为0.054 mmol/L，对过氧化氢的米氏常数为13.24 mmol/L。6.根据权利要求1或2所述的一种牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是在2.79 mL浓度为100 mmol/L，pH=5的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL浓度为2mol/L的过氧化氢，0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐，10 yL浓度为4.76 mg/mL的牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料水溶液，混合后37 °C温浴10分钟，溶液由无色变为蓝色，在652 nm处有一最大吸收峰。7.根据权利要求1所述的一种牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是在30?80 °C温度下保存2小时后模拟过氧化物酶活性无明显变化，具有良好的稳定性。8.根据权利要求1所述的一种牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是在PH 3?11保存2小时后模拟过氧化物酶活性无明显变化，具有良好的稳定性。9.根据权利要求1所述的一种牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是在O?7.5 mol/L氯化钠溶液中保存2小时后模拟过氧化物酶活性无明显变化，具有良好的稳定性;或者在室温下保存30天后活性无明显变化，具有良好的室温稳定性，且相对催化活性达到98.9%。10.一种牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶的制备方法，包括如下步骤:在5 mL浓度为50 mg/mL的牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL浓度为16 mmol/L氯铂酸溶液和0.5 11^浓度为1.5 mol/L氢氧化钠溶液，混匀后水浴80 °C下反应2 h，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-铂纳米复合材料水溶液，将牛血清白蛋白-铂纳米复合材料水溶液冷冻干燥得到牛血清白蛋白-铂纳米复合材料的粉末;在0.6 mL浓度为23.8 mg/mL的牛血清白蛋白-铀纳米复合材料水溶液中加入0.6 mL浓度为0.5 mmol/L的硝酸铋溶液和1.8 mL浓度为10 mmol/L，pH=7的磷酸盐缓冲液，混匀后水浴80 °C下反应2.5 h，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000r/min离心超滤，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-铂/铋复合纳米材料的水溶液。
【专利摘要】本发明公开一种牛血清白蛋白?铂/铋复合纳米材料模拟过氧化物酶，在牛血清白蛋白?铂纳米材料水溶液中加入硝酸铋水溶液，与磷酸盐缓冲液混匀后水浴加热，加热完毕后的混合溶液经过超滤并水洗得到铋?牛血清白蛋白?铂纳米复合材料模拟过氧化物酶。牛血清白蛋白?铂/铋复合纳米材料模拟过氧化酶可催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’?四甲基联苯胺盐酸盐显色，对3,3’,5,5’?四甲基联苯胺盐酸盐的米氏常数为0.054 mmol/L，对过氧化氢的米氏常数为13.24 mmol/L。同时该模拟酶耐酸碱、耐高温、耐高盐，具有优异的室温稳定性。
【IPC分类】B82Y30/00, B01J31/02
【公开号】CN105728036
【申请号】CN201610063490
【发明人】陈伟, 沈奕珉, 吴钢伟, 邓豪华, 彭花萍
【申请人】福建医科大学
【公开日】2016年7月6日
【申请日】2016年1月29日