专利名称：生物组织样本常规石蜡制片he染色无二甲苯全程处理液的制作方法
技术领域：
本发明涉及医疗器械中的体外诊断试剂，具体说就是一种生物组 织样本常规石蜡制片HE染色无二甲苯全程处理液。
(二)
背景技术：
组织病理学的诞生已有150多年的历史。在所有的医院，只要做 手术，均由医院病理科对手术组织样本作出组织病理学诊断。常规石 蜡包埋HE染色制片仍是当前用以处理组织样本的最基本技术，它是 病理诊断方法学的基础，也是许多新方法、新技术优劣的评定参照标 准。我国著名病理学家北京协和医院陈杰教授近年多次在会议上强 调"目前病理技术多处于手工阶段，各自配制各自的染液，很难达 到统一标准，严重阻碍了病理技术的标准化及质量的提高。我们呼吁 诸如试剂、染液能实现标准化、社会化供求。"
目前，全国乃至全世界依然在使用传统的老方法，即在置放处 理液的缸中，依次倒入或调入不同处理液，样本依次在每个缸中按规 定浸泡不同时间完成处理、切片、染色、封片等全过程。该过程使操 作人员置身于有毒环境，操作复杂，浪费资源，缺乏统一标准。
病理行业组织处理液用品的标准化生产，社会化供求，是行业发 展的必然趋势。
(三)
发明内容
本发明的目的在于提供一种主要应用于各级医院病理科对各类 组织样本进行处理的病理学诊断试剂，可满足组织样本在手工或自动 脱水机操作下的制片技术和脱落细胞HE染色技术的需要的生物组织 样本常规石蜡制片HE染色无二甲苯全程处理液。
本发明的目的是这样实现的本发明的技术方案主要体现在配方
与操作工艺。生物组织样本常规石蜡制片服染色无二甲苯全程处理
液分为组织脱水和切片染色两部分
l.组织脱水组织固定液用分析纯级无水乙醇85%，甲醛10%，冰醋酸5%。 常温下将甲醛倒入分析纯级无水乙醇中，最后滴入冰醋
酸，搅匀。PH值为6.5，分析纯级无水乙醇浓度为85
/b 。
组织脱水液I:用分析纯级乙醇70%，酮类30%。按比例常温下混 溶均匀即得。分析纯级乙醇浓度为70%。
组织脱水液II:用分析纯级乙醇60%，酮类20%，多功能团20%。 常温下按比例混配。分析纯级乙醇浓度为60%。
组织透明液用分析纯级桉油素25%，苯甲酸甲酯75%,常温下按 比例混配。
组织浸蜡液I:病理切片专用石蜡90%，硬脂酸10%。置于容器内， 加温7(TC混溶后，常温冷却分切成型。熔点56 61 。C。
组织浸蜡液II:石蜡80%，蜂蜡10%，硬脂酸10%。置于容器内， 加温7(TC混溶后，常温冷却分切成型。熔点56 61 。C。
2.切片染色
切片脱蜡液I: 93号汽油30%，多功能团40%，松节油30%。按比
例常温下混配均匀。 切片脱蜡液II:用分析纯醇类50%,，苯甲酸甲酯50%。按比例常温
下混配均匀。
苏木素染色液苏木精100g，无水酒精5000ml，蒸馏水5000ml，甘 油5000ml，冰醋酸500ml，硫酸铝钾(钾矶)400g。 先将苏木精溶于无水酒精中，然后依次加入蒸馏水、 甘油和冰醋酸，最后加入研细的硫酸铝钾(钾矾)，边 加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。混合后溶液 颜色呈淡红色，放入容器中，用纱布封口，自然氧化 1~2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用。 伊红染色液伊红300g，蒸馏水50000ml,乙醇60000ml，冰乙酸 600ml。在伊红中倒入少量的蒸馏水，使其溶解，然
后一边缓慢倒入冰乙酸， 一边用玻璃棒搅拌，直至溶
液成糊状，然后将其放在烤箱中5crc烘烤，使之成粉
状，加入75X的乙醇600ml，溶解。将剩余水溶液加 入伊红液，待其全部溶解。PH值为4. 5 5. 5 除浮染液为95%乙醇。
除水透明液乙醇80%，丙酮20%。按比例常温下混配均匀。乙 醇浓度为80。％。
切片透明液四氢呋喃30%，苯甲酸甲酯700%。按比例常温下混配 均匀。
本发明生物组织样本常规石蜡制片HE染色无二甲苯全程处理 液，将做为第一个行业标准化试剂，实现统一配制，标准化质量管理， 无需单独购配试剂。作为节约型环保新技术，它在加快了制片速度的 同时又不使组织发生过度收縮、硬、裂、脆，使细胞及组织结构更接 近原有形态；对组织脱水较彻底，使用效果稳定，操作简单快捷、易 掌握、有良好的可控性；各类新型混合试剂为低挥发或不挥发、无毒 性(除固定液使用微量甲醛)、无污染的分析纯有机化学试剂，在组 织标本制备和组织切片HE染色的全程制片中，取缔了原大量使用的 有毒性、致癌性(引起造血、神经系统等损伤)、环境污染重的二甲 苯试剂，消除由此产生的职业病。使制片质量达到优质标准，同时具 备了标准化质量控制管理，是新一代可替代型产品。 具体实施例方式
下面结合附图
对本发明作进一步说明。
本发明生物组织样本常规石蜡制片HE染色无二甲苯全程处理液 分为组织脱水和切片染色两部分 1.组织脱水
组织固定液用分析纯级无水乙醇85%，甲醛10%，冰醋酸5%。 常温下将甲醛倒入分析纯级无水乙醇中，最后滴入冰醋 酸，搅匀。PH值为6.5，分析纯级无水乙醇浓度为85
/b 。
组织脱水液I:用分析纯级乙醇70%，酮类30%。按比例常温下混
溶均匀即得。分析纯级乙醇浓度为70%。 组织脱水液II:用分析纯级乙醇60%，酮类20%，多功能团20%。
常温下按比例混配。分析纯级乙醇浓度为60%。 组织透明液用分析纯级桉油素25%,苯甲酸甲酯75%，常温下按
比例混配。
组织浸蜡液I:病理切片专用石蜡90%，硬脂酸10%。置于容器内， 加温7(TC混溶后，常温冷却分切成型。熔点56 61 。C。
组织浸蜡液II:石蜡80%，蜂蜡10%，硬脂酸10%。置于容器内， 加温7(TC混溶后，常温冷却分切成型。熔点56 61 。C。
2.切片染色
切片脱蜡液I: 93号汽油30%，多功能团40%，松节油30%。按比
例常温下混配均匀。 切片脱蜡液II:用分析纯醇类50%，苯甲酸甲酯50。X。按比例常温
下混配均匀。
苏木素染色液苏木精100g，无水酒精5000ml，蒸馏水5000ml，甘 油5000ml，冰醋酸500ml，硫酸铝钾(钾矶)400g。 先将苏木精溶于无水酒精中，然后依次加入蒸馏水、 甘油和冰醋酸，最后加入研细的硫酸铝钾(钾矾)，边 加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。混合后溶液 颜色呈淡红色，放入容器中，用纱布封口，自然氧化 1 2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用。
伊红染色液伊红300g，蒸馏水50000ml,乙醇60000ml，冰乙酸 600ml。在伊红中倒入少量的蒸馏水，使其溶解，然 后一边缓慢倒入冰乙酸， 一边用玻璃棒搅拌，直至溶 液成糊状，然后将其放在烤箱中5(TC烘烤，使之成粉 状，加入75X的乙醇600ml，溶解。将剩余水溶液加 入伊红液，待其全部溶解。PH值为4. 5 5. 5
除浮染液为95%乙醇。
除水透明液乙醇80%，丙酮20%。按比例常温下混配均匀。乙
醇浓度为80%。
切片透明液四氢呋喃30%，苯甲酸甲酯70%。按比例常温下混配均匀。
实施例1
本发明生物组织样本常规石蜡制片HE染色无二甲苯全程处理液 所述的组织固定液设定编号为第一缸，组织脱水液I为第二缸，组织 脱水液II为第三缸，组织透明液为第四缸，组织浸蜡液I为第五缸， 组织浸蜡液II为第六缸。在生物组织样本进行脱水处理时，将生物组
织样本依次分别放入第一缸至第六缸，其操作要求如下
放入第一缸的时间当日下午16时到19时30分；(泡时间3
小时30分)
放入第二缸的时间；当日晚上19时30分到21时；(浸泡时间
1小时30分)
放入第三缸的时间当日晚上21时到22时30分；(浸泡时间
1小时30分)
放入第四缸的时间当日晚上22时30分到次日1时O分；(浸 泡时间2小时30分)
放入第五缸的时间次日1时0分到4时0分；(浸泡时间3 小时O分)
放入第六缸的时间次日4时0分到8时0分；(浸泡时间4 小时O分)
以上为组织脱水过程。
本发明生物组织样本常规石蜡制片HE染色无二甲苯全程处理液 所述的切片脱蜡液I设定编号为第七缸，切片脱蜡液II为第八缸，苏 木素染色液为第九缸，伊红染色液为第十缸，除浮染液为第十一缸， 除水透明液为第十二缸，切片透明液为第十三缸。
下面是生物组织样本切片的染色过程
(1) 将生物组织样本切片放入第七缸中浸五分钟，取出放入第八缸。
(2) 将生物组织样本切片在第八缸中浸五分钟，取出；
(3) 将生物组织样本切片用自来水缓流清洗两分钟，然后放入第九 缸中，在第九缸中浸5-8分钟，取出，用自来水缓流清洗蓝花 两分钟，然后放入第十缸里；
(4) 生物组织样本切片在第十缸中浸2-5分钟后取出，用自来水缓
流清洗一分钟，然后放入第十一缸中浸10秒钟取出；
(5) 将生物组织样本切片放入第十二缸中浸3分钟后取出放入第十 三缸中再浸5分钟。
至此，完成了生物组织样本切片的染色。 实施例3
较大及微小组织切片HE染色操作程序要求:
(1) 较大组织与微小组织切片HE染色方法及用时相同。载玻片磨 砂处仅能用2B铅笔标号，否则字迹难保留。室温在15'C以上时，蜡 块要置于冰块上冷却，以防皱褶不易打开和不易切片。组织切片厚 度3 4um，充分打开皱褶。
(2) 防止脱片液使用方法主要用于凝血块及易脱片的组织切片，
每张切片在载玻片适当位置滴极少该液，用另一张载玻片贴合拉开 即可使用，或用手指抹去多余防脱片剂。
(3) 干燥处理表好的组织切片在熔蜡恒温箱内或烘片机内干燥，
用时20 30min。
(4) 组织切片在脱蜡、染色、透明各处理程序时，均要求反复手 提染色架3 5次，是提高染色质量所必须。
(5) 组织切片在12、 13、 14号液内分别完成后，要充分沥干液体 达到切片潮干或用电吹风机冷风吹干。需在IOO瓦灯照明下， 逐一滴胶封片(用套材中配制的无苯树胶)，不可以一次性把 全部切片滴完封胶再依次加盖玻片封片，封片中要按压盖玻 片排净气泡。
实施例4
脱落细胞HE染色操作程序要求
需单独设立一套染色液，染色程序及所用试剂编号如下
(1) 固定^同组织标本制备技术中1号固定液一缸，lmin; 水洗——自来水小流量缓慢流水清洗，lmin;
(2) 苏木素染色——同编号9号苏木素染色液一缸，5min; 水洗蓝化——自来水小流量缓慢流水清洗，3 min;
(3) 伊红染色——同编号IO号伊红染色液一缸，5min; 水洗^"自来水小流量缓慢流水清洗，lmin;
(4) 除浮染——同编号11号除水液一缸，lmin;
(5) 透明——同编号13号透明液一缸，2min;
(6) 封片——用套液中无苯封片胶。也可不用滴封片胶，直接读 片，适用大批量快速阅片，阳性者再封片。
权利要求
1.一种生物组织样本常规石蜡制片HE染色无二甲苯全程处理液，分为组织脱水和切片染色两部分(1)组织脱水组织固定液用分析纯级无水乙醇85％，甲醛10％，冰醋酸5％；常温下将甲醛倒入分析纯级无水乙醇中，最后滴入冰醋酸，搅匀；PH值为6.5，分析纯级无水乙醇浓度为85％；组织脱水液I用分析纯级乙醇70％，酮类30％；按比例常温下混溶均匀即得；分析纯级乙醇浓度为70％；组织脱水液II用分析纯级乙醇60％，酮类20％，多功能团20％；常温下按比例混配；分析纯级乙醇浓度为60％；组织透明液用分析纯级桉油素25％，苯甲酸甲酯75％，常温下按比例混配；组织浸蜡液I病理切片专用石蜡90％，硬脂酸10％；置于容器内，加温70℃混溶后，常温冷却分切成型；熔点56～61℃；组织浸蜡液II石蜡80％，蜂蜡10％，硬脂酸10％；置于容器内，加温70℃混溶后，常温冷却分切成型；熔点56～61℃；(2)切片染色切片脱蜡液I93号汽油30％，多功能团40％，松节油30％，按比例常温下混配均匀；切片脱蜡液II用分析纯醇类50％，，苯甲酸甲酯50％；按比例常温下混配均匀；苏木素染色液苏木精100g，无水酒精5000ml，蒸馏水5000ml，甘油5000ml，冰醋酸500ml，硫酸铝钾(钾矾)400g；先将苏木精溶于无水酒精中，然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸，最后加入研细的硫酸铝钾(钾矾)，边加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止；混合后溶液颜色呈淡红色，放入容器中，用纱布封口，自然氧化1～2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用；伊红染色液伊红300g，蒸馏水50000ml，乙醇60000ml，冰乙酸600ml；在伊红中倒入少量的蒸馏水，使其溶解，然后一边缓慢倒入冰乙酸，一边用玻璃棒搅拌，直至溶液成糊状，然后将其放在烤箱中50℃烘烤，使之成粉状，加入75％的乙醇600ml，溶解；将剩余水溶液加入伊红液，待其全部溶解；PH值为4.5～5.5；除浮染液为95％乙醇；除水透明液乙醇80％，丙酮20％；按比例常温下混配均匀；乙醇浓度为80％；切片透明液四氢呋喃30％，苯甲酸甲酯70％；按比例常温下混配均匀。
全文摘要
本发明的目的在于提供一种主要应用于各级医院病理科对各类组织样本进行处理的病理学诊断试剂，可满足组织样本在手工或自动脱水机操作下的制片技术和脱落细胞HE染色技术的需要的生物组织样本常规石蜡制片HE染色无二甲苯全程处理液，分为组织脱水和切片染色两部分。作为节约型环保新技术，它在加快了制片速度的同时又不使组织发生过度收缩、硬、裂、脆，使细胞及组织结构更接近原有形态；对组织脱水较彻底，各类新型混合试剂为低挥发或不挥发、无毒性、无污染的分析纯有机化学试剂，在组织标本制备和组织切片HE染色的全程制片中，取缔了原大量使用的有毒性、环境污染重的二甲苯试剂，消除由此产生的职业病。
文档编号G01N1/30GK101344467SQ20081013696
公开日2009年1月14日 申请日期2008年8月20日 优先权日2008年8月20日
发明者赵晓辉 申请人:赵晓辉