专利名称：一种测定药物中蒽醌含量的方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，涉及一种测定药物中蒽醌含量的方法，具体涉及一种中 药制剂胆宁片中蒽醌含量的测定方法。
背景技术：
中药制剂胆宁片具有疏肝利胆、清热通下的功效，临床用于肝郁气滞、湿热未清 所致的右上腹隐隐作痛，食入作胀，胃纳不香、嗳气、便秘；慢性胆囊炎见上述症候 者的治疗。胆宁片自问世以来，因临床疗效明确，无毒副作用而深受病家的欢迎，目 前已成为胆道疾病的首选药物。
目前临床常用的胆宁片多为上海和黄药业有限公司研发的独家生产产品，为国家 二级中药保护品种，保护品种编号ZYB2072002097。所述的胆宁片由大黄、虎杖、山楂、 郁金、陈皮、青皮和白茅根七味药材经现代中药制药技术制备而成，研究表明，胆宁 片中主要含有蒽醌类、黄酮类、联苄类、三萜类和苯丙素类。
现有技术公开了胆宁片中含有游离蒽醌和结合蒽醌，游离蒽醌与结合蒽醌合称 为总蒽醌。其中的游离蒽醌包括大黄酸(rhein)，芦荟大黄素(aloe-eraodin)，大 黄素(emodin)，大黄素甲醚(physcion)，大黄酚(chrys叩hanol)，游离蒽醌的主要 药理作用为抑菌消炎；其中的结合蒽醌包括蕃泻苷A、 B、 C、 D (SermosideA、 B、 C、 D)，大黄素甲醚-8-葡萄糖苷(Physcion-8-P-D-glucoside)等，结合蒽醌主要药理 作用为泻下。
目前有关胆宁片的质量标准，通过游离蒽醌大黄素和大黄酚的含量测定进行评估， 即现有技术只对疏肝利胆的有关功效提供了质量控制方法；而清热通下的有关功效则 没有很好的质量控制方法。有关胆宁片的质量控制，仅有《中华人民共和国药典(一 部)》(2005年版)收载了胆宁片大黄酚、大黄酸含量测定方法。迄今，尚未见涉及胆 宁片总蒽醌和游离蒽醌含量测定方法。为了使中药制剂尤其是胆宁片中的有效成分提 取完全、含量稳定，为中药胆宁片的提供质量标准，给临床提供一个安全、高效的制 剂，本领域需要制定胆宁片中蒽醌的含量测定方法。
发明内容
本发明的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种测定药物中蒽醌含量的方法， 尤其涉及中药制剂胆宁片中蒽醌含量的测定方法。本发明方法进一步用于胆宁片质量控制。
本发明所涉及的胆宁片用于治疗胆道疾病，由大黄、虎杖、山楂、郁金、陈皮、 青皮和白茅根七味药材经现代中药制药技术制备而成，其中各药材可以直接使用，或 使用药材的提取物。
本发明上述治疗胆道疾病的药物，其中包含蒽醌类和黄酮类等主要化学成分，本 方法采用索氏提取或超声提取法对所述药物提取后，进行酸性水解，以l， 8-二羟基蒽 醌为对照品，以5%醋酸镁甲醇液为显色剂，采用分光光度法，对所述药物的蒽醌进行 含量测定。
上述提取蒽醌的溶剂采用下述试剂中的任意一种或者是他们中的任意配比，如 三氯甲烷、二氯甲垸等弱极性的有机试剂。
所述水解的酸为以下试剂中的任意一种与水的任意配比或者是它们中的几种与水 的任意配比，如硫酸、盐酸等中强酸。
本发明方法通过建立总蒽醌(Total anthraquinones，简称TA)和游离蒽醌 (Dissocitative anthraquinones，简称DA)的含量测定方法后，由总蒽醌含量减去游 离蒽醌含量得到结合蒽醌(Associtative anthraquinones,简称AA)的含量，计算公 式公式为结合蒽醌=总蒽醌-游离蒽醌(AA=TA-DA)，包括以下步骤
1、测定总蒽醌
精密称取l， 8-二羟基蒽醌对照品适量，加三氯甲垸或二氯甲烷制成每lml含l， 8-二羟基蒽醌0. lmg，摇匀，作为对照品溶液。
制备标准曲线用微量移液器(上海安亭微量进样器厂)精密量取l， 8-二羟基蒽 醌对照品溶液0. 5ml、 0. 8ml、 1. lml、 1. 4ml、 1. 7ml和2ml，分别置10ml量瓶中，低 温蒸干溶剂，冷却，残渣分别精密加入5。/。醋酸镁甲醇液5ml,摇匀，加甲醇稀释至刻度， 摇匀，放置20min，以相应试剂为空白，在510nra的波长处测定吸光度，以吸光度为纵 坐标，1， 8-二羟基蒽醌对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线y:2.8914x+0.012; r=0.9996。
样品测定取胆宁片(保护品种编号ZYB207200209710)片，除去包衣，精密称定， 研细，取0.35g，精密称定，置圆底烧瓶中，加20-60%的硫酸溶液或加10-30%的盐酸 溶液10ml，用三氯甲垸或二氯甲烷加热回流提取3次(30、 20、 20ml)，第一次2小 时，第二、三次每次30分钟，合并三氯甲烷或二氯甲垸提取液于分液漏斗中，用适量 水洗涤，三氯甲烷或二氯甲烷液转移至100 ml量瓶中，加三氯甲烷或二氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取2ml置于10ml量瓶中，低温蒸干溶剂，冷却，残渣加5%醋酸镁甲醇 液5ml，摇匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置20min，以相应试剂为空白，在510nm 的波长处测定吸光度，采用外标一点法计算出样品中总蒽醌含量。
2、 测定游离蒽醌
精密称取l， 8-二羟基蒽醌对照品适量，加三氯甲烷或二氯甲烷制成每lml含l， 8-二羟基蒽醌0. lmg，摇匀，作为对照品溶液。
制备标准曲线用微量移液器(上海安亭微量进样器厂)精密量取l， 8-二羟基蒽 醌对照品溶液O. 5ml、 0. 8ml、 1. lml、 1.4ral、 1.7ml和2ml，分别置10ml量瓶中，低 温蒸干溶剂，冷却，残渣分别精密加入5y。醋酸镁甲醇液5ml,摇匀，加甲醇稀释至刻度， 摇匀，放置20min，以相应试剂为空白，在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵 坐标，1， 8-二羟基蒽醌对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线y=2.8914x+0.012; r=0. 9996。
样品测定取胆宁片10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.35g，精密称定， 置圆底烧瓶中，加三氯甲烷或二氯甲烷70tnl，索氏提取至提取液近无色或置超声提取 lh，滤过，洗涤，提取液或滤液转移至100ral量瓶中，加三氯甲垸或二氯甲烷至刻度， 摇匀，作为样品溶液。精密吸取样品溶液2ml置于10ml容量瓶中，低温蒸干溶剂，冷 却，残渣加5。/。醋酸镁甲醇液5ml，摇匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置20rain，以相 应试剂为空白，在510nm的波长处测定吸光度，采用外标一点法计算出样品中游离蒽 醌含量即得。
3、 由上述所算得的总蒽醌含量减去游离蒽醌含量得到结合蒽醌(Associtative anthraquinones,简称AA)的含量，计算公式公式为结合蒽醌=总蒽醌-游离蒽醌
(AA=TA-DA)。
与现有质量检测方法相比，本发明提供的含量测定方法精密度高、重复性好、回 收率高、涉及面广，提高了胆宁片的质量控制方法，可有效确保该制剂的全面质量控 制和临床疗效。
具体实施例方式
实施例l:胆宁片蒽醌的含量测定
1.总蒽醌含量测定方法
精密称取l， 8-二羟基蒽醌对照品适量，加三氯甲烷制成每lral含l, 8-二羟基蒽 醌O. lmg，摇匀，作为对照品溶液。
5取胆宁片(批号为A080508) 10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.35g，精密 称定0.3566 g，置圆底烧瓶中，加30%的硫酸溶液10ml，用三氯甲烷加热回流提取3 次(30、 20、 20ml)，第一次2小时，第二、三次每次30分钟，合并三氯甲垸提取液 于分液漏斗中，用适量水洗涤，三氯甲烷液转移至100ml量瓶中，加三氯甲垸至刻度， 摇匀，精密量取2ml置于10ml量瓶中，低温蒸干溶剂，冷却，残渣加5%醋酸镁甲醇 液5ml，摇匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置20min,以相应试剂为空白，在510nm 的波长处测定吸光度，采用外标一点法计算出样品中总蒽醌含量即得。测定批号为 A080508的胆宁片总蒽醌含量为1. 50%。
2.游离蒽醌含量测定方法
精密称取l， 8-二羟基蒽醌对照品适量，加三氯甲垸制成每lml含l， 8-二羟基蒽 醌O. lmg，摇匀，作为对照品溶液。
样品测定取胆宁片10片(批号为A080508)，除去包衣，精密称定，研细，取 0.35g，精密称定0.3516 g，置圆底烧瓶中，加三氯甲烷70ml，索氏提取至提取液近 无色。提取液转移至100ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，作为样品溶液。精密 吸取样品溶液2ml置于10ml容量瓶中，低温蒸干溶剂，冷却，残渣加5%醋酸镁甲醇 液5ml，摇匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置20min，以相应试剂为空白，在510nm 的波长处测定吸光度，采用外标一点法计算出样品中游离蒽醌含量即得。测定批号为 A080508的胆宁片总蒽醌含量为1. 24%。
3J旦宁片(批号为A080508)结合蒽醌含量
结合蒽醌(AA)为0. 26%。
实施例2:胆宁片蒽醌的含量测定
1.总蒽醌含量测定方法
精密称取l， 8-二羟基蒽醌对照品适量，加三氯甲垸制成每lml含l， 8-二羟基蒽 醌O. lmg，摇匀，作为对照品溶液。
取胆宁片(批号为A080508) 10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.35g，精密 称定0.3566 g，置圆底烧瓶中，加30%的硫酸溶液10ml，用三氯甲烷加热回流提取3 次(30、 20、 20ml)，第一次2小时，第二、三次每次30分钟，合并三氯甲烷提取液 于分液漏斗中，用适量水洗涤，三氯甲垸液转移至100ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度， 摇匀，精密量取2ml置于10ml量瓶中，低温蒸干溶剂，冷却，残渣加5%醋酸镁甲醇 液5ml，摇匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置20min，以相应试剂为空白，在510nm的波长处测定吸光度，采用外标一点法计算出样品中总蒽醌含量即得。测定批号为 A080508的胆宁片总蒽醌含量为1. 50%。
2. 游离蒽醌含量测定方法
精密称取l, 8-二羟基蒽醌对照品适量，加三氯甲垸制成每lml含l， 8-二羟基蒽 醌O. lmg，摇匀，作为对照品溶液。
样品测定取胆宁片10片(批号为A080508)，除去包衣，精密称定，研细，取 0.35g，精密称定0.3548 g，置具塞三角烧瓶中，加三氯甲烷70ml，置超声提取lh, 滤过，洗涤，滤液至100ml量瓶中，用适量三氯甲垸洗涤容器和残渣，洗液滤入同一 量瓶中，摇匀，作为样品溶液。精密吸取样品溶液2ml置于10ml容量瓶中，低温蒸干 溶剂，冷却，残渣加5%醋酸镁甲醇液5ml，摇匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置20min， 以相应试剂为空白，在510nm的波长处测定吸光度，采用外标一点法计算出样品中游 离蒽醌含量即得。测定批号为A080508的胆宁片总蒽醌含量为1.21%。
3. 胆宁片(批号为A080508)结合蒽醌含量 结合蒽醌(AA)为0. 29%。
实施例3:胆宁片蒽醌的含量测定
1. 总蒽醌含量测定方法.-
精密称取l， 8-二羟基蒽醌对照品适量，加三氯甲垸制成每lml含l， 8-二羟基蒽 醌O. lmg，摇匀，作为对照品溶液。
取胆宁片(批号为A080508) 10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.35g，精密 称定0.3566 g，置圆底烧瓶中，加30%的盐酸溶液lOml，用三氯甲烷加热回流提取3 次(30、 20、 20ml)，第一次2小时，第二、三次每次30分钟，合并三氯甲烷提取液 于分液漏斗中，用适量水洗涤，三氯甲烷液转移至100ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度， 摇匀，精密量取2ml置于10ml量瓶中，低温蒸干溶剂，冷却，残渣加5%醋酸镁甲醇 液5ml，摇匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置20min，以相应试剂为空白，在510nm 的波长处测定吸光度，采用外标一点法计算出样品中总蒽醌含量即得。测定批号为 A080508的胆宁片总蒽醌含量为1. 48%。
2. 游离蒽醌含量测定方法
精密称取l， 8-二羟基蒽醌对照品适量，加三氯甲烷制成每lml含l， 8-二经基蒽 醌O. lmg，摇匀，作为对照品溶液。
样品测定取胆宁片10片(批号为A080508)，除去包衣，精密称定，研细，取0.35g，精密称定0.3516 g，置圆底烧瓶中，加三氯甲烷70ml，索氏提取至提取液近 无色。提取液转移至100ml量瓶中，加三氯甲垸至刻度，摇匀，作为样品溶液。精密 吸取样品溶液2ml置于10ml容量瓶中，低温蒸干溶剂，冷却，残渣加5%醋酸镁甲醇 液5ml，摇匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置20min，以相应试剂为空白，在510nm 的波长处测定吸光度，采用外标一点法计算出样品中游离蒽醌含量即得。测定批号为 A080508的胆宁片总蒽醌含量为1. 24%。
3J旦宁片(批号为A080508)结合蒽醌含量
结合蒽醌(AA)为0. 24%。
实施例4:胆宁片蒽醌的含量测定
1. 总蒽醌含量测定方法
精密称取l， 8-二羟基蒽醌对照品适量，加三氯甲烷制成每lml含l， 8-二羟基蒽 醌O. lmg，摇匀，作为对照品溶液。
取胆宁片(批号为A080508) 10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.35g，精密 称定0.3566 g，置圆底烧瓶中，加30%的盐酸溶液10ml，用三氯甲垸加热回流提取3 次(30、 20、 20 ml),第一次2小时，第二、三次每次30分钟，合并三氯甲烷提取液 于分液漏斗中，用适量水洗涤，三氯甲烷液转移至100ml量瓶中，加三氯甲垸至刻度， 摇匀，精密量取2ml置于lOml量瓶中，低温蒸干溶剂，冷却，残渣加5%醋酸镁甲醇 液5ml，摇匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置20min，以相应试剂为空白，在510nm 的波长处测定吸光度，采用外标一点法计算出样品中总蒽醌含量即得。测定批号为 A080508的胆宁片总蒽醌含量为1. 48%。
2. 游离蒽醌含量测定方法
精密称取l， 8-二羟基蒽醌对照品适量，加三氯甲烷制成每lml含l， 8-二羟基蒽 醌O. lmg，摇匀，作为对照品溶液。
样品测定取胆宁片10片(批号为A080508)，除去包衣，精密称定，研细，取 0.35g，精密称定0.3548 g，置具塞三角烧瓶中，加三氯甲烷70ml，置超声提取lh， 滤过，洗涤，滤液至100ml量瓶中，用适量三氯甲垸洗涤容器和残渣，洗液滤入同一 量瓶中，摇匀，作为样品溶液。精密吸取样品溶液2ml置于10ml容量瓶中，低温蒸干 溶剂，冷却，残渣加5%醋酸镁甲醇液5ml，摇匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置20min， 以相应试剂为空白，在510nm的波长处测定吸光度，采用外标一点法计算出样品中游 离蒽醌含量即得。测定批号为A080508的胆宁片游离蒽醌含量为1. 21%。3.胆宁片(批号为A080508)结合蒽醌含量 结合蒽醌(AA)为0. 27%。
权利要求
1、一种测定药物中蒽醌含量的方法，其特征是对所述药物进行蒽醌提取后，进行酸性水解，以1，8-二羟基蒽醌为对照品，以5％醋酸镁甲醇液为显色剂，采用分光光度法，测定药物的蒽醌含量。
2、 按权利要求l所述的测定药物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的测定药物的蒽醌含量包括以下歩骤1) 测定总蒽醌含量；2) 测定游离蒽醌含量；3) 按计算公式结合蒽醌=总蒽醌-游离蒽醌得结合蒽醌含量。
3、 按权利要求1所述的测定药物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的水解的酸为 中强酸。
4、 按权利要求1或3所述的测定药物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的水解的 酸为以下试剂中的任意一种与水的任意配比或是他们中的几种与水的任意配比硫酸 或盐酸。
5、 按权利要求1所述的测定药物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的药物中蒽醌 的提取方法采用索氏提取或超声提取法。
6、 按权利要求l所述的测定药物中蒽醌含量的方法，其特征是用于提取蒽醌的溶 剂为弱极性的有机试剂。
7、 按权利要求6所述的测定药物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的弱极性的有 机试剂为以下试剂中的任意一种或者是他们中的任意配比三氯甲烷或二氯甲烷。
8、 按权利要求1所述的测定药物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的药物为胆宁 片，保护品种编号ZYB2072002097。
全文摘要
本发明属医药技术领域，涉及一种测定药物中蒽醌含量的方法，具体涉及一种中药制剂胆宁片中蒽醌含量的测定方法。本方法采用索氏提取或超声提取法对所述药物提取后，进行酸性水解，以1，8-二羟基蒽醌为对照品，以5％醋酸镁甲醇液为显色剂，采用分光光度法，对所述药物的蒽醌进行含量测定。与现有质量检测相比，本发明提供的含量测定方法精密度高、重复性好、回收率高、涉及面广，提高了胆宁片的质量控制方法，可有效确保该制剂的全面质量控制和临床疗效。
文档编号G01N21/78GK101451957SQ20081020722
公开日2009年6月10日 申请日期2008年12月17日 优先权日2008年12月17日
发明者丁建弥, 周文娟, 徐瑞林, 陈忠樑 申请人:上海和黄药业有限公司