专利名称：通过高效液相色谱法检测盐酸兰地洛尔光学异构体的方法
技术领域：
本发明涉及通过高效液相色谱法检测盐酸兰地洛尔(Landiolol Hydrochloride) 光学异构体的方法，更具体的说是检测盐酸兰地洛尔生产过程中或者是盐酸兰地洛尔产品 中盐酸兰地洛尔A异构体(Isomer A)、盐酸兰地洛尔B异构体(Isomer B)及盐酸兰地洛尔 C异构体(Isomer C)的方法。
背景技术：
盐酸兰地洛尔是在盐酸艾司洛尔基础上进行结构改进而获得的新化合物，其化 学名为4-[(2S)-2-羟基-3-[[2-[(4-吗啉甲酰)氨基]乙基]氨基]丙氧基]苯丙 酸4-[ (4S)-2，2- 二甲基-1，3- 二氧五环]甲酯盐酸盐，分子式:C25H39N308 HCI,分子量 546. 05，具有选择性^^受体阻断作用，不具有内在拟交感活性和膜稳定作用。盐酸兰地洛 尔作用机制是主要作用于心脏^受体，并抑制交感神经末梢及肾上腺髓质释放的去甲肾 上腺素和肾上腺素引起的心率增加。很多异构体通过高效液相色谱法分离的方法是已知 的，但流动相、溶剂、柱温、色谱柱等因素对于检测结果有很大影响或不适用于目标检测物。
发明内容
本发明的目的是提供通过高效液相色谱法检测在盐酸兰地洛尔手性合成中所得 盐酸兰地洛尔A、B、C异构体的方法，以控制合成样品的纯度。
本发明采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)为固定相的手性柱进 行检测，纤维素酯类结构中的空穴和通道与异构体选择性的形成了异构体包合物，从而达 到分离。流动相对实验结果中盐酸兰地洛尔A异构体、盐酸兰地洛尔B异构体及盐酸兰地 洛尔C异构体分离度及峰形均有很大影响，经发明人实验摸索，确定以正己烷_异丙醇_ 二 乙胺(70 90 10 30 0. 02 0. 5，优选为75 85 15 25 0. 05 0. 2，更优 选为80 20 0.1)为流动相效果很好。其中加入二乙胺可以改善峰形。溶剂的选择与盐酸兰地洛尔、盐酸兰地洛尔A、B、C异构体分离度有关。经实 验确定采用正丙醇、异丙醇、乙醇、正丁醇、甲醇作为溶解用溶剂，优选以异丙醇甲醇 (50 50)为溶剂。本发明提供的通过高效液相色谱法检测盐酸兰地洛尔A、B、C异构体的方法的具 体条件如下1.色谱条件色谱柱采用硅胶表面涂敷有纤维素_三(4-甲基苯甲酸酯)为固定 相的手性柱；流动相为正己烷-异丙醇-二乙胺(70 90 10 30 0.02 0.5，优 选为75 85 15 25 0. 05 0. 2，更优选为80 20 0. 1)；检测波长为200nm 240nm(优选为210nm 230nm，更优选为约220nm)；柱温为20 40°C (优选为30 40°C， 更优选为35°C )；流动相流速为0. 5 2. 0ml/min(优选为0. 8 1. 2ml/min,更优选为约 1. Oml/min)。2.样品溶液的配置采用有机溶剂(优选选自正丙醇、异丙醇、乙醇、正丁醇、甲 醇，更优选为异丙醇甲醇(50 50))，将样品配制为含盐酸兰地洛尔0. 5 5. Omg/ml的 溶液(优选1 3mg/ml，更优选为2mg/ml)的溶液。3.测定将溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并进行分析。采用此色谱条件测定盐酸兰地洛尔中盐酸兰地洛尔A异构体、盐酸兰地洛尔B异 构体及盐酸兰地洛尔C异构体分离度可达1. 5 3. 9，符合中国药典要求。此色谱条件同时 可用于盐酸兰地洛尔光学异构体的定量。
图1 按照实施例1的条件分离盐酸兰地洛尔、盐酸兰地洛尔A异构体、盐酸兰地 洛尔B异构体及盐酸兰地洛尔C异构体的高效液相色谱图。(1)号峰为盐酸兰地洛尔B异 构体，(2)号峰为盐酸兰地洛尔A异构体，(3)号峰为盐酸兰地洛尔C异构体，(4)号峰为盐 酸兰地洛尔图2 按照实施例2的条件分离盐酸兰地洛尔、盐酸兰地洛尔A异构体、盐酸兰地 洛尔B异构体及盐酸兰地洛尔C异构体的高效液相色谱图。(1)号峰为盐酸兰地洛尔B异 构体，(2)号峰为盐酸兰地洛尔A异构体，(3)号峰为盐酸兰地洛尔C异构体，(4)号峰为盐 酸兰地洛尔
具体实施例方式实施例1.仪器SHIMADZU LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-lOAvp紫外检测器，0V-100柱温箱；色谱柱DaicelChralcel 0J-H 色谱柱(0. 46 X 25cm, 5 u m)；流动相正己烷-异丙醇-二乙胺(80 20 0.1)柱温35°C流速1.0ml/min检测波长220nm。定位溶液1的配制精密称取盐酸兰地尔A异构体适量，用异丙醇-甲醇 (50 50)溶解并稀释成2mg/ml ；定位溶液2的配制精密称取盐酸兰地尔B异构体适量，用异丙醇-甲醇 (50 50)溶解并稀释成2mg/ml ；定位溶液3的配制精密称取盐酸兰地尔C异构体适量，用异丙醇-甲醇 (50 50)溶解并稀释成2mg/ml ；样品溶液的配制精密称取盐酸兰地尔适量，用异丙醇-甲醇(50 50)溶解并稀 释成 2mg/ml ；测定各取定位溶液1、定位溶液2、定位溶液3和样品溶液各20 u 1注入高效液 相色谱仪，记录色谱图，谱图见图1。盐酸兰地洛尔、盐酸兰地洛尔A、B、C异构体分离度为 1. 5 2 9 o实施例2.仪器SHIMADZU LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器，0V-100柱温 箱；色谱柱:AE.Lichrom 0J-H 色谱柱(0. 46 X 25cm, 5 u m)；流动相正己烷-异丙醇-二乙胺(82 18 0.1)柱温35°C流速1.0ml/min检测波长220nm。定位溶液1的配制精密称取盐酸兰地尔A异构体适量，用异丙醇-甲醇 (50 50)溶解并稀释成2mg/ml ；定位溶液2的配制精密称取盐酸兰地尔B异构体适量，用异丙醇-甲醇 (50 50)溶解并稀释成2mg/ml ；定位溶液3的配制精密称取盐酸兰地尔C异构体适量，用异丙醇-甲醇 (50 50)溶解并稀释成2mg/ml ；样品溶液的配制精密称取盐酸兰地尔适量，用异丙醇-甲醇(50 50)溶解并稀 释成 2mg/ml ；测定各取定位溶液1、定位溶液2、定位溶液3和样品溶液各20 u 1注入高效液 相色谱仪，记录色谱图，谱图见图2。盐酸兰地洛尔、盐酸兰地洛尔A、B、C异构体分离度为 1. 5 3. 9 o
权利要求
通过高效液相色谱法检测盐酸兰地洛尔光学异构体的方法，具体如下1)色谱条件色谱柱采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)为固定相的手性柱；流动相为正己烷-异丙醇-二乙胺，比例为70～90∶10～30∶0.02～0.5；检测波长为200nm～240nm；柱温为20～40℃；流动相流速为0.5～2.0ml/min；2)样品溶液的配制采用有机溶剂将样品配制成为含盐酸兰地洛尔0.5～5.0mg/ml的溶液，所述有机溶剂选自正丙醇、异丙醇、乙醇、正丁醇、甲醇；3)测定将溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述流动相正己烷_异丙醇_二乙胺比例 为 75 85 15 25 0. 05 0. 2。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述流动相正己烷_异丙醇_二乙胺比例 为 80 20 0.1。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于检测波长为210nm 230nm。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于检测波长为220nm。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于柱温为30 40°C。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于柱温为35°C。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于流动相流速为0.8 1. 2ml/min。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于流动相流速为1.Oml/min。
10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于样品溶液的配制中采用的有机 溶剂为异丙醇_甲醇(50 50)。
11.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于将样品溶液配制为含盐酸兰地 洛尔1 3mg/ml的溶液。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于将样品溶液配制为含盐酸兰地洛尔2mg/ ml的溶液。
全文摘要
本发明提供了通过高效液相色谱法检测盐酸兰地洛尔光学异构体的方法，具体如下(1)色谱条件色谱柱采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)为固定相的手性柱；流动相为正己烷-异丙醇-二乙胺；检测波长为200nm～240m。(2)采用有机溶剂将样品配制为含盐酸兰地洛尔0.5～5.0mg/m1的溶液。(3)测定，记录色谱图。本发明测定方法达到的盐酸兰地洛尔、盐酸兰地洛尔A、B、C异构体分离度可达1.5～3.9，符合中国药典要求。本发明提供方法同时可用于盐酸兰地洛尔光学异构体的定量。
文档编号G01N30/02GK101858892SQ20091002942
公开日2010年10月13日 申请日期2009年4月13日 优先权日2009年4月13日
发明者倪桃, 冒宜兰, 冯明声, 姚晓敏, 张璐, 曹于平, 郑文艳 申请人:南京海辰药业有限公司