专利名称：：一种绿茶糖蛋白的质量控制方法
技术领域：
：本发明涉及天然产物的质量控制领域，具体涉及绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的质量控制傅立叶红外光谱方法。具体讲是一种应用数学分析和傅立叶红外光谱分析技术对绿茶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白进行有效的质量监控的方法，该方法是通过傅立叶红外二阶导数光谱进行分析获得构成绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的两种主要单糖组分阿拉伯糖和半乳糖的特征峰；将向量夹角余弦方法应用于绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立叶红外光谱二阶导数光谱图谱的比对，获得绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立叶红外光谱二阶导数光谱图谱可变区、保守区和相似性，该方法应用于样品绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白与标准品比对，从而能够对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品进行有效的质量控制。
背景技术：
：阿拉伯半乳聚糖蛋白广泛存在于高等植物中，它对植物细胞的生长发育起到关键作用，同时也是很有潜力的人健康免疫调节剂，也有报道其对肠胃溃疡具保护作用、对血糖血脂有一定的调节作用。阿拉伯半乳聚糖作为可溶性的非粘性膳食纤维已广泛应用于食品中，易溶于水的特性使其能够高浓度添加到饮料中而不改变饮料的味道、口感和粘度。它还被用作香料和色素的助悬剂和减缓糖果硬化速度辅助剂。因此，它的理化特性和保健功能使其在食品工业和医药工业中具有广泛的应用前景。从绿茶中提取获得阿拉伯半乳聚糖蛋白，其分子量在40150kDa之间，其中蛋白成分约占总质量的10%以下，阿拉伯糖与半乳糖的摩尔比在2:11:1之间。由于我国的绿茶产量居世界前列，每年的绿茶产品中还包含许多低档产品以及一些粗老茶以及一部分陈茶，对于如何有效的开发利用这类资源，增加绿茶产品的附加值，从中开发具生物活性的成分尤为重要。但是，绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白同其它多糖类产品一样，其质量控制方法是其应用过程中亟待解决的问题。因为，它们的理化性质和生物活性会因为不同的生产工艺、不同的原料来源和组成、分子量分布等因素而发生变化，甚至是很大的改变。如果对其不能进行有效的质量控制，则将极大的限制该类产品的应用和开发。通常，总糖含量被用作控制多糖提取物含量和质量的一个监测指标，但该指标具有很大的局限性，因为它既不能反映多糖组成的变化也不能反映产品活性与组成、结构的关系。现有的对多糖类产品进行质量控制的方法，有高效液相色谱法监测其分子量和纯度、有测定其总糖含量监测其多糖成分所占百分比、有测定其单糖组成成分，但是这些指标在实施起来很难整体全面的反映多糖产品的质量，也不能比较多糖不同批次产品之间的生物学活性差异。其中有些方法操作繁琐，费时费力，难以适应工业生产应用。红外光谱技术被广泛应用于药物的化学成分鉴定和结构分析，由于其指纹图谱性、无损伤性以及可重复性等优点而被许多国家的药典采纳并广泛应用于药物鉴定。但现有技术未能用红外光谱技术对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的进行鉴定和质量控制。
发明内容本发明的目的在于建立能快速鉴定绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的红外二阶导数指纹图谱的方法。本发明的另一目的在于将本发明的指纹图谱结合向量夹角余弦相似度法后应用于绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品的质量控制。本发明采用以下技术方案予以实现通过对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白制备方法，红外导数图谱和红外导数图谱波数区间的选择，红外导数图谱上对应的组成成分的特征峰的确定，确定了绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立叶红外二阶导数指纹图谱。进一步将此指纹图谱结合向量夹角余弦相似度法确定该指纹区域中的保守区域和可变区域。这样该指纹图谱可以满足对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的检测和分析。还进一步将此指纹图谱结合向量夹角余弦相似度法用于绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品的质量控制。本发明的具体方案如下1.绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的提取绿茶叶45。C烘干后，打磨成粉末后用80%乙醇浸提其中的色素和多酚类物质后，45。C烘干，以1:20(w/v)料水比75。C,水浸提1h。浸提液经过过滤再400g离心10min，获得的上清液经冷冻干燥后得到绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白粗品，在阴离子柱QSepharoseFastFlowcolumn(20mmx60cm)，pH8.0下NaCl梯度洗脱，收集第二洗脱峰中主要多糖组分，冷冻干燥后的产品成分主要为绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白。2.绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白标准品的获取及鉴定1中获得的绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品进一步经过分子筛凝胶层析SephadexG100column(16mmx60cm)分离，收集其中的多糖成分。在高效凝胶渗透色谱鉴定其分子量是否相对均一，通过气相色谱鉴定其主要单糖组成为半乳糖和阿拉伯糖。3.提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白样品的组成(表l):表l茶叶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白的组成samplecomponent1(CSW-AGP)234567891011121314CSP-AGPCST'A'GP样品I一IO、CSP-AGP和CST-AGP是从绿茶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白样品11和12是从红茶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白；样品13和14是从黑茶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白。样品1为标准品。4.绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白傅立叶红外光谱的获取步骤绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白置于40°C烘箱直至重量为恒重，取2mg加入到200mgKBr中研磨，压制成1mm的片层，在配有DTGS检测器的NicoletNEXUE470红外光谱仪上收集红外图谱。红外原谱、一阶和二阶导数图谱使用OMNICESPV6软件获得。5.光谱间的相似度计算采用向量夹角余弦法计算光谱间的相似度。本发明的优点与现有技术方法相比，本发明的优点是提供了一种红外二阶导数图谱结合向量夹角余弦相似度的分析方法，该方法能够成功鉴定绿茶阿拉伯半乳聚糖，而且适合对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品的组成和活性进行区分，以及快速简便地进行质量评估。图1为红外图谱原谱、一阶导数、二阶导数图谱的5个区域(4000-400cm—1,800-400cm—1,1200-800cm",2000-1200cm",4000-2000cm")的系统聚类分析结果图2为绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白样品1一10的红外原谱(A)和红外二阶导数图谱(B)的1200-800cm1区图3为绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品CSW-AGP、CSP-AGP和CST-AGP的红外原谱(A)和红外二阶导数图谱(B)的1200-800cm"区图4为CSW-AGP、CSP-AGP、CST-AGP与EDTA的铁离子螯合能力比较Rha(加l。/。)Fuc(nxn)Ara(mol%)Xyl(mol%)Gal(mol%)Glc(緒。)u则icacid(mg/g>protein(巾9/IOO1ng)44&&5瓜^z^9do85oCO74271o4防22Do479从024359fl}47幼恥2"5;;:4必3&幼4"5见"62CD85成&55NDCS防68crj0021ICO534具体实施例方式下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细描述-实施例1:绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的红外二阶导数指纹图谱的建立1.红外二阶导数光谱的选择和1200-800cm"区域的确定为选择合适的能够反映绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白特征的红外图谱，应用向量夹角余弦方法对20个样品的红外图谱原谱、一阶导数、二阶导数图谱的5个区域(4000-400cm—1,800-400cm-1,1200-800cm人2000-1200cm",4000-2000cm")与绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白标准品的作了比较。cos6值越接近l，表明样品与标准品的相似性越高。获得的结果显示二阶导数图谱比红外原谱和一阶导数图谱具有更高的灵敏度，能够较好的区分绿茶与红茶、乌龙茶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白，也能很好区分绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白与其它单糖和多糖类物质(表2)。对红外图谱上5个区域(4000-400cm",800-400cm1,1200-800cm"，2000-1200cm",4000-2000cm")的cos9进行聚类分析后，发现1200-800cm"是这5个区中最具代表性的区域(图1)，采用这个区域的cose值可以将绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白将其它物质区分开。而1200-800cm"区域恰好正是多糖类物质的指纹区，在该区域每种特定的多糖都有自己特定的最大吸收峰。表2向量夹角余弦法计算的样品2_21与标准品样品1的红外原谱(IR)、一阶导数谱(first-derivativeIR)和二阶导数谱(second-derivativeIR)的相似度COSdV^U6wav的umbsrregion12345678910111213U151617181920211-21代表样品编号，I一IO、11和12、13和14分别为从绿茶、红茶、乌龙茶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白；15—18为商品茶多糖；19、20、21分别为葡萄糖、葡聚糖和几丁质。l为标准品，样品与标准品的相似度表示为cos8值。4咖-柳cnT，IR1.00ftel-deriv3liveIFI1.00second"derivativeIR1.00800-400cm—'IR1.00first-derivativeIR1.00second"deriva8veIR1.001200-卿加-'IR1.00first"derivativeIR1.00second"deri幼6veIR1.002000-1200加爿IR1.00fidderivative旧1.00seconikteiira6veIR1.004咖-2咖cm画'旧1.00fiist-derivativeIR1.00second"derivativeIR1.00o朋0.98O邻0.9B0.97o.站0;B70.93O.助o朋0.440.030.650.65o加0.960.940.970.970.89O加0.150.940￡30_230.000.910.94()■990.990.970.990.970.99O朋0.890.920.84()97O朋0.830.830.630.980.980.960.990.99()930.*0.92O别O股0.000.870.840.98O朋0.96O邻0.97O别()■960.910.970.960.460290.220.390.47O.的()950.97O邻O邻O朋0.750.900.93O.朋0.740510.530.660.820.93()■97O邻0.99O邻0,77()660.67O及0.900.76O朋O.ffi0.590.910.990.940.971.000.98O朋o助0.91O.明0.84{)82O加0.910.960.670390.960.990.990.93O助0.950.950.910.7S0.670.910.680.831加()■970.971.001.00O朋()970.970.96O邻O朋0.420.420.740.980.97O.站0.960.970.970.750.620.630.800.710.720.450.220.730.63fl.970.950.950.970.97O朋0.440,260.830J60_920.480.150.660.68O别0.S70,950.980.670.770.630.780.61036￡)560.310.510.380,990.970.97O邻O邻O朋0.680.840.720.790.730.250.660.640_990.96O邻1.000.910-940.920.930.92￡)■91()530.31O邻O邻O邻0,60O朋0.050.230.12-0,050,10-0,040.950.930.920,04—0.04-OXW-0.04—0.20一O加0邻O加0.370.08-0.21—G.化紫ssw^51M幼M助观SIswsS羽S2stt^一31cu89恥扭8防Sa邻3引邻^^站s祁一2.绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白在红外二阶导数图谱1200-800cm—1的保守区和可变区的确立发现绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白在红外二阶导数图谱有2个特征峰，其中1个在1075cm—1附近，另1个在1045cm"附近(图2)。这两个峰是p-阿拉伯半乳聚糖特有的，分别属于主链上的半乳糖吡喃环和支链上的阿拉伯糖呋喃环。绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白在红外二阶导数图谱在1110和1018cm"附近有两个峰，它们属于植物多糖中的糖醛酸的特征峰。因此，绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白在红外二阶导数图谱1200-800cm—1区很好的汇集了主要糖类组成成分的特征。根据1200-800cm"区域出现的峰，将该区域分成10个亚区，即I一X亚区(图2)。将9个绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白样品与标准品的I—X亚区相似度进行比较分析后(表3)，确定绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白亚区IV(1061-1035cm")是最保守的；其次是亚区I(1176-1134cm—1),III(1094-1061cm"),和V(1035-983cm力；再次是亚区VI(983-940cm")和VII(940-900cm1);亚区II(1134-1094cm")和X(843-819cm")有些变化；亚区VIII(900-865cm")禾QIX(865-843cm")是变化最大的区域。表3样品2—10与标准品样品1的红外二阶导数谱(1200-800cm")的相似度cos9value12O0—sampleIIIIVVVIV画lvmIXX800cm—1这样确定了绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白红外二阶导数图谱上主成分的特征峰、恒定区以及可变区，这些参数为有效控制绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品的质量提供了有力的工具。实施例2:红外二阶导数指纹图谱结合向量夹角余弦相似度法在绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品质量控制中的应用1.釆用三种处理从同一种绿茶中提取获得三种纯度高的绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品，CSW陽AGP(i.e.Sampleno.1)、CSP-AGP和CST-AGP。绿茶叶45。C烘干后，打磨成粉末后用80%乙醇浸提其中的色素和多酚类物质后，45°C烘干后得到干茶粉末。CSW-AGP(i.e.Sampleno.1)的提取干茶粉末以1:20(w/v)料水比75°C，水浸提lh。CSP-AGP的提取干茶粉末1:20(Wv)料水比50。C，加入0.1%果胶23458910OO1.O01,00990.961.O076O.S60.98790.66O.SO93O.900.9184O.幼0.S8960.640,93520,740.9772O.S20.9995O.S20-981.O0I.OO1.001.O00-970-990.920.9S0.78O.S2o.eo—0-190.730.750.94O.肪0.981.001,O00.991.O01.000.940.910-T7—O.T7—O.SOO邻0-730，790.790.9G0.55O.肪—0.180_90一0-S40.930-17OO957573225813529497I.OO0.980,920.470.O80.020,360.870.921.000.970.88O.S3O.S30.63O.S20,3S0.910.96S!SB站SS氾8鄉幼S1-o-ddddddddddooooooo酶在柠檬酸/拧檬酸钠缓冲液(pH3.0，0.1M)中浸提1h。CST-AGP的提取:干茶粉末1:20(w/v)料水比37。C，加入0.1%胰酶在磷酸氢二钠/柠檬酸钠缓冲液(pH8.0,0.2M)中浸提1h。以上获得的提取液分离纯化步骤均同本发明的具体方案中1所示。以上获得的三种绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品经高效凝胶色谱纯度分析相对均一，成分分析主要有阿拉伯糖和半乳糖组成，还含有一定量的糖醛酸以及少量的鼠李糖和木糖(见表1)。CSW-AGP(i.e.Sampleno.1)、CSP-AGP和CST-AGP的取代度各不相同，A/G比例分别为1.37、1.57和1.82,糖醛酸和蛋白含量亦有差异。2.CSW-AGP(i.e.Sampleno.1)、CSP-AGP和CST-AGP的红外图谱及红外二阶导数特征图谱在三种产品的红外图谱上1075cm"和1045cm—1附近均有明显的阿拉伯半乳聚糖具有的特征峰，在1020cm—1同样也出现明显的吸收峰，在964cm—1出现一个肩部，这些均为阿拉伯半乳糖的特征。它们的红外二阶导数特征图谱1200—800cm—1区同样被划分为IO个亚区(图3)。以CSW-AGP(i.e.Sampleno.l)为标准品，采用向量夹角余弦法对CSP-AGP和CST-AGP与标准品之间的相似度进行了比较。结果发现绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白红外二阶导数特征图谱的保守区(见具体实施1中的2)111(1090-1061cm")、IV(1061-1037cm")、V(1037-993cm-1),VI(993-939cm")、禾tlVII(939-901cm")cos.值超过0.90，表明这三种产品具有绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白共同的特征。而这三种产品在可变区II(1125-1090cm")和VIII(901-864cm—1)中的相似度则较低。与CST-AGP不同，CSP-AGP在可变区IX(864-841cm")和X(841-818cm")中与CSW-AGP的相似度仅有0.59和0.58;而CST-AGP在该区域中与CSW-AGP的相似度较高达0.99和0.95。而在总区域1200—800cm"范围内，CST-AGP和CSP-AGP分别与CSW-AGP的相似度为0.91和0.77(表4)。这也就是说在组成(表1)和性质上CST-AGP比CSP-AGP与CSW-AGP要更为接近。即组成和性质上的细微变化在绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白红外二阶导数特征图谱中均能够反映出来。表4CSP-AGP、CST-AGP与CSW-AGP的红外二阶导数谱(1200-800cm")各亚区的相似度<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>3.CSW-AGP(i.e.Sampleno.1)、CSP-AGP和CST-AGP的体外抗氧化活性及铁离子螯合能力与红外二阶导数特征图谱相似度的关系在三种产品的体外抗氧化活性比较中，发现红外二阶导数特征图谱与CSW-AGP更相似的CST-AGP其体外抗超氧阴离子和羟自由基的能力比起CSP-AGP来与CSW-AGP的也更为相似(表5)。同样，CST-AGP的铁离子螯合能力也比CSP-AGP更接近CSW-AGP(图4)。也就是说红外二阶导数特征图谱和结合向量夹角余弦方法能够有效监控绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品的生物活性变化。表5CSW-AGP、CSP-AGP和CST-AGP体外清除超氧阴离子和羟自由基的ICso值ICso02—(WmL)ICso'OH(〃g/mL)CSW-AGP326.73士20_332.38士4.7CSP-AGP261.28±19.7395.54士30.8CST-AGP446.64±33582,27士5.6ascorbica^d127_32±8.9175.32±11.3本发明结合了红外二阶导数特征图谱和向量夹角余弦方法，能够作为鉴定绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白和控制其产品质量的有力工具。该方法中cose值越接近i，则样品和标准品的二阶导数特征图谱越接近，它们的组成和生物活性等也就越接近。本发明确定了绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白红外二阶导数特征图谱的特征区域为1200-800cm'1。确定了其主要组成成分半乳糖、阿拉伯糖的特征峰分别在1075cm"1和1045cm—1附近以及糖醛酸的特征峰在1110和1018cm—i附近。本发明确定了绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白红外二阶导数特征图谱的特征区1200-800cm"的保守区1090-900cm"和可变区1134-1094禾Q900-819cm",这对于绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的质量控制很有用。保守区反映的是绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品的共同特征，可变区则显示的是产品的自身特征。因此，一种绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品应该与标准品在保守区具有较高的相似度，而在可变区则可能会因为原料、加工条件、纯度等等因素与标准品有差异，而差异程度大小可以从cos6值上得到反映。总之，本发明能够有效区分绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白和其它大分子物质如与其有相似组成的红茶或乌龙茶阿拉伯半乳聚糖蛋白；由复杂成分包括绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白组成的产品像商品粗茶多糖；与其组成和结构完全不同的多糖物质像葡聚糖和几丁质。而且本发明能够区分具有不同工艺获得的绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品，能有效和方便快速的监控其组成和生物活性的变化，对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的快速鉴定和质量控制能够起到重要的作用。虽然本发明是通过特定具体实施例进行说明的，本领域的技术人员在本发明的实质范围内所作出的各种改变，而不脱离本发明的目的和精神，也应属于本发明的保护范围。10权利要求1.绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白质量控制方法包括绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白标准品的获取、建立标准的绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的红外二阶导数指纹图谱、将待测样品的红外二阶导数指纹图谱与标准品的比对，其特征是(1)绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白标准品的获取方法绿茶叶45℃烘干后，打磨成粉末后用80％乙醇浸提其中的色素和多酚类物质后，45℃烘干，以1∶20(w/v)料水比75℃，水浸提1h。浸提液经过过滤再400g离心10min，获得的上清液经冷冻干燥后得到绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白粗品，在阴离子柱QSepharoseFastFlowcolumn(20mm×60cm)，pH8.0下NaCl梯度洗脱，收集第二洗脱峰中主要多糖组分，进一步经过分子筛凝胶层析柱SephadexG100column(16mm×60cm)分离纯化，收集其中的多糖成分即为绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白。(2)标准的绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的红外二阶导数指纹图谱建立方法绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白置于40℃烘箱直至重量为恒重，取2mg加入到200mgKBr中研磨，压制成1mm的片层，在配有DTGS检测器的NicoletNEXUE470红外光谱仪上收集红外图谱。红外二阶导数图谱使用OMNICESPV6软件获得。(3)比较样品与标准品的红外二阶导数光谱间的相似度的方法为向量夹角余弦法向量夹角余弦(余弦相似度)方法是一种利用两向量间的夹角余弦值来比较向量间的相似度的数学方法。其主要原理如下假设X是n维向量，由(x1，x2，x3，....，xn)表示，Y是另一n维向量，由(y1，y2，y3，....，yn)表示。X与Y的内积X·Y＝x1y1+x2y2+x3y3+.....+xnyn，X的模|X|＝(x12+x22+x32+....+xn2)1/2，Y的模|Y|＝(y12+y22+y32+....+yn2)1/2。向量X与向量Y的夹角余弦为<mathsid="math0001"num="0001"><math><![CDATA[<mrow><mi>cos</mi><mi>θ</mi><mo>=</mo><mfrac><mrow><mi>X</mi><mo>·</mo><mi>Y</mi></mrow><mrow><mo>|</mo><mi>X</mi><mo>|</mo><mo>·</mo><mo>|</mo><mi>Y</mi><mo>|</mo></mrow></mfrac><mo>=</mo><mfrac><mrow><munderover><mi>Σ</mi><mrow><mi>i</mi><mo>=</mo><mn>1</mn></mrow><mi>n</mi></munderover><msub><mi>x</mi><mi>i</mi></msub><mo>·</mo><msub><mi>y</mi><mi>i</mi></msub></mrow><msqrt><munderover><mi>Σ</mi><mrow><mi>i</mi><mo>=</mo><mn>1</mn></mrow><mi>n</mi></munderover><msubsup><mi>x</mi><mi>i</mi><mn>2</mn></msubsup><mo>·</mo><munderover><mi>Σ</mi><mrow><mi>i</mi><mo>=</mo><mn>1</mn></mrow><mi>n</mi></munderover><msubsup><mi>y</mi><mi>i</mi><mn>2</mn></msubsup></msqrt></mfrac></mrow>]]></math></maths>cosθ值越接近1，表明向量X与向量Y的相似度越高。应用于红外光谱分析则每个光谱指纹图谱都可以看作一组对应波数下的峰高(或峰面积)的数值，可以把这组数值看作多维空间中的向量，这样两个指纹图谱间相似性的问题转化为多维空间的两个向量的相似性问题，利用上式能够定量表征指纹图谱间的相似性。2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于步骤(l)中标准品的组成成分为阿拉伯糖(55.3mol%)、半乳糖(35.3mol%)、糖醛酸(148.1mg/g)、蛋白质(5.8mg/100mg)，分子量约为150kDa，标准品红外二阶导数图谱中1200—800cm"范围出现IO个特征峰，其中主要成分半乳糖的特征峰为1075cm—、阿拉伯糖的特征峰为1045cm—1，糖醛酸的特征峰为1110和1018cm",其保守区在1090-900cm皿1,可变区在1134-1094和900-819cm"。3.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于步骤(2)中建立的红外二阶导数指纹图谱波数范围在1200—800cm"之间，根据其10个特征峰分为10个亚区，即I—X亚区I(1176-1134cm—1)、II(1134-1094cm")、111(1094-1061cm"),IV(1061-1035cm")、V(1035-983cm")、VI(983-940cm-')、VII(940-900cm")、VIII(900-865cm")、IX(865-843cm")X(843-8194.根据权利要求3所述的质量控制方法，其特征在于保守区是亚区IV(1061-1035cm")、I(1176-1134cm.1)、111(1094-1061cm-1)、V(1035-983cm")、VI(983-940cm.1)禾HVII(940-卯0cm"),可变区是亚区II(1134-1094cm"),X(843-819cm1)、VIII(900-865cm-1)和IX(865-843cm")。5.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于步骤(3)中红外二阶导数指纹图谱相似度的比较应用向量夹角余弦法计算cose值时每个光谱指纹图谱代表的向量是由对应各波数下的峰高值构成。6.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于步骤(3)中红外二阶导数指纹图谱相似度的比较是分别在IO个亚区以及整个特征区之间进行。7.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于步骤(3)中样品和标准品的红外二阶导数指纹图谱相似度，在保守区获得的cose值应在0.90—1.0之间，才能保证样品具有绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的特征，在可变区获得的cos9值小于0.90，则表明其在组成或性质上与标准品有较大差异，cose值越小则表明样品和标准品差异越大。全文摘要本发明涉及天然产物的质量控制领域，具体涉及应用傅立叶红外二阶导数光谱结合向量夹角余弦方法对绿茶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白进行有效的质量监控，该方法是通过傅立叶红外二阶导数光谱分析获得构成绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的两种主要单糖组分阿拉伯糖和半乳糖的特征峰；将向量夹角余弦方法应用于绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立叶红外光谱二阶导数光谱图谱的比对，获得绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立叶红外光谱二阶导数光谱图谱可变区、保守区和相似度，从而能够对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品进行快速有效的鉴定和质量控制。文档编号G01N30/00GK101625349SQ20091014100公开日2010年1月13日申请日期2009年5月9日优先权日2009年5月9日发明者周小玲,孙平楠申请人:汕头大学医学院;周小玲