生物聚合物色谱的系统和工艺的制作方法

专利名称：生物聚合物色谱的系统和工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及色谱分离并且特别涉及例如单克隆抗体的生物聚合物的大规模色谱分离。更特别地，它涉及具有贮存罐的色谱系统并且涉及操作这样的系统的连续或半连续方法。
背景技术：
在生物制药领域中，基因工程和细胞培养技术的新进展促使表达水平比以前更高，从而对下游纯化造成相当大的负担，尤其是捕获步骤。尽管引入新的色谱树脂明显改进基于常规的固定床色谱的工艺效率，可以通过采用连续方式操作来实现附加增益。后者在采用连续生物反应器(例如采用灌注模式操作的那些)时尤其有吸引力。单克隆抗体的下游加工的典型工艺牵涉使用具有蛋白A配体来以非常高的选择性结合抗体的捕获步骤。这是非常高效的步骤，因为在这里去除了大部分杂质。然而，由于蛋白A树脂的成本，有强的优化效率的动机，例如通过增加树脂结合能力的化学工程方法。在蛋白A步骤后，抗体在其他色谱步骤中进一步纯化，例如结合-洗脱阳离子交换色谱和/或在结合-洗脱或流通多模态或阴离子交换色谱中。在这些步骤也存在使使用的树脂能力利用率增加的需要，特别在步骤采用结合-洗脱模式运行时。在连续色谱中，若干相同的柱采用允许柱串联和/或并联操作的布置而连接，其取决于方法要求。从而，原则上所有柱可以同时运行，只是方法步骤稍微改变。程序可以重复，使得每个柱在工艺中加载、洗脱和再生若干次。与“常规的”色谱相比，其中单个色谱循环基于若干连贯步骤，例如加载、清洗、洗脱和再生，在基于多个相同柱的连续色谱中，所有这些步骤同时发生只是每个发生在不同的柱上。连续色谱操作导致更好地利用色谱树脂、减少的处理时间以及降低的缓冲需求，所有这些有益于工艺经济。连续色谱有时表示为模拟移动床(SMB)色谱。Bishop 等 人("Simulated Moving Bed technology in BiopharmaceuticalProcessing", Bischops, M.和 Pennings, M., Recovery Biological Products XI,(2003) Banff, Alberta, Canada)公开了基于模拟移动床(SMB)技术的连续色谱法,其已经成功地用于具有蛋白A亲和树脂的IgG的实验室规模的纯化。尽管实际上由SMB提供的多柱和多段连续方法极大地提高工艺效率，但至今SMB系统尚未用于cGMP生物制药生产，这主要因为从硬件和操作两个角度的系统的复杂性。Heeter 等人(Heeter, G.A.and Liapis, A.1., J.Chrom A, 711 (1995))已经提出基于三柱周期逆流色谱(3C-PCC)原理的方法作为典型的四段SMB系统的备选。最近，Lacki 等人(〃Protein A Counter-Current Chromatography for Continuous AntibodyPurification", Lacki, Κ.M.和 Bryntesson, L.M., ACS (2004) Anaheim, CA USA)描述这样的3C-PCC系统用于对MabSelect 亲和树脂的IgG吸收。该3C-PCC系统需要比典型的四段SMB系统更简单的硬件和更容易的操作，其直接降低与资本设备和系统维护关联的成本。
事实上，模拟移动床技术已经在各种其他领域中使用了几十年。例如，美国3, 291, 726 (Universal Oil Products)早在1966年描述用于石油化工业的连续模拟逆流吸收工艺。美国6，280，623 (Ma)描述用于甜味剂精制的复杂旋转流化模拟移动床布置，其具有贮存罐但不适应于色谱分离。可靠的连续工艺的必不可少的因素是使用的柱的质量，并且更具体地，柱之间的相似性或甚至同一性。如果柱不相同，理论计算将不正确，并且将变得难以设计有效和健壮的连续色谱工艺。而且，为了放大考虑，在系统中具有相同的柱是必不可少的。然而，用色谱介质填充柱以便获得可重复结果是非常复杂的。甚至板的数量或其他封装性质中的小的差异可以对最终结果产生巨大影响。尽管像SMB和3C-PCC的连续色谱方法具有改进能力利用率的可能性，它们是设置和运行的复杂方法，其牵涉控制大量的阀和柱。因此，需要有与单柱色谱相比增加能力利用率的简单且健壮的解决方案。特别地，需要有可以使用一次性柱和流路而在色谱工艺中使用的连续和半连续色谱解决方案，现今发现其在先导和小规模生物制药生产中的使用增加。

发明内容
本发明的一个方面是提供用于生物聚合物的大规模色谱分离的有效工艺。这用如权利要求1中限定的色谱系统和用如权利要求12中限定的色谱方法实现。利用这样的系统和方法的一个优点是它们允许在一次性生物加工系统中操作半连续和连续色谱。另一个优点是它们补充柱加载与柱再生之间的失配，其通常在生物加工中使用高滴度进料时发生。另外的优点是单个多通道蠕动泵可以用于实现连续操作。本发明的另外的合适的实施例在从属权利要求中描述。


图1示出根据本发明具有两个柱的色谱系统。图2示出根据本发明具有两个柱和控制单元的色谱系统。图3示出根据本发明具有三个柱的色谱系统。图4示出根据本发明具有两个柱和两个贮存罐的色谱系统。图5示出根据本发明具有三个柱和三个贮存罐的色谱系统。图6示出根据本发明具有三个柱和三个贮存罐的色谱系统。图7示出用于设置预定浓度水平的原理。图8示出根据本发明用于色谱分离的方法。图9示出根据本发明用于色谱分离的方法。图10示出根据本发明用于色谱分离的方法。定义
术语“进料”在本文意指提供给色谱系统并且包括要纯化的目标种类的液体。目标种类可以是例如蛋白的生物聚合物，例如单克隆抗体。进料的示例可以是澄清的发酵液、生物流体等，以及源于先前的分离步骤并且包括部分纯化的目标种类的液体。术语“生物聚合物”在本文意指肽、蛋白、核酸或病毒粒子一原生的以及生物或合成改性的一其包括片段、多聚物、聚合体、轭合物、聚变产物等。术语“贮存罐”在本文意指连接到柱的至少一个入口端和柱的至少一个出口端的容器(例如，可折叠塑料袋、刚性罐等)。它可连接到一个柱的入口端和另一个柱的出口或它可连接到一个柱的入口端和出口端两者。它还可连接到若干个柱入口和出口端。贮存罐可以经由一个或多个阀、泵、检测器和/或歧管连接到一个或多个柱。术语“节流阀”在本文意指适应于通过压紧管道而控制或完全停止通过柔性管道的流的装置。例如可以磁、电、气动或液动操作节流阀，但也可手动操作它们。术语“夹钳”在本文意指手动操作的节流阀。术语“泵”在本文意指多通道泵送装置(例如，多通道蠕动泵)中的独立泵送装置或单独通道。术语“填充床色谱柱”在本文意指适应于用粒子色谱树脂填充的柱。填充床色谱柱可以是轴向或径向的并且可包括柱管、入口多孔床支承和出口多孔床支承、入口流体分配器和出口流体分配器。当用色谱树脂填充时，树脂床可以基本上填满入口与出口多孔床支承之间的整个体积。
具体实施例方式在由图1-6图示的一个方面中，本发明公开用于分离生物聚合物的色谱系统(I)，其包括至少一个进料罐3、至少一个贮存罐4 ;4a、4b、4c、至少一个洗脱缓冲罐5、至少一个洗脱罐6、至少两个填充床色谱柱7、8以及对于每个填充床色谱柱的至少一个泵10和至少一个出口检测器11，其都连接到所述每个填充床色谱柱，其中进料罐、一个或多个贮存罐、洗脱缓冲罐和洗脱罐每个经由阀12的系统连接到填充床色谱柱。如上文限定的，一个或多个贮存罐例如经由阀12的系统连接到柱7、8的至少一个入口端13和柱7、8的至少一个出口端14。也就是说，提供至少两个填充床色谱柱，每个具有入口端13和出口端14，并且这些柱经由阀的系统连接到至少一个进料罐3、至少一个贮存罐4 ;4a、4b、4c、至少一个洗脱缓冲罐5和至少一个洗脱罐6。每个填充床色谱柱还连接到至少一个泵和至少一个出口检测器。泵可以连接到柱的入口端并且出口检测器可以连接到柱的出口端。出口检测器可以具有适应于监测生物聚合物的浓度的任何类型，例如UV吸收检测器、折射率检测器、光散射检测器等。一个或多个贮存罐用于暂时保留在两个柱之间流动的液流的部分，并且其体积可以小于系统中加工的任何特定液体的总体积。贮存罐的示例可以是具有一个入口和一个出口的塑料袋(其中同时使用两个出口用于在用预定义的体积填满罐后装填和排出液体)，或其中组成不断改变的罐。在某些实施例(由图2-6图示的)中，系统还包括至少一个控制单元2,其电、气动或液压连接到阀12的系统并且可选地连接到检测器11和/或泵10。此的优点是系统的操作可以自动化。控制单元可以是例如计算机、可编程逻辑控制器或能够根据算法和输入数据集控制泵和阀的系统的任何其他数字或模拟单元。尽管为了简单起见，在图3-6中未示出到阀的连接，理解在所有这些实施例中，控制单元2可以连接到阀、泵和检测器。在一些实施例中，至少一个贮存罐4 ;4a、4b、4c适应于接收来自柱7、8的出口端14的流体并且将流体输送到另一个柱8、7的入口端13。贮存罐然后可以担当临时存储容器，用于处理不同柱之间的流率中的任何失配。贮存罐因为它只用于临时存储而可以小于进料和洗脱缓冲罐，例如比其小至少大约50%。在某些实施例中，至少一个贮存罐4 ;4a、4b、4c配备有至少一个液位指示器(未示出)。该/这些液位指示器可以连接到控制单元并且用于避免一个或多个贮存罐超填，特别在一个或多个贮存罐清空时到贮存罐的流可以暂时停止的半连续或不连续工艺中。一个或多个液位指示器可以是光、电导、超声或重量的(例如，秤)。在某些实施例(如由图3和5图示的)中，色谱系统包括至少三个(例如，至少四个或五个)柱。这些柱采用例如三柱周期逆流模式或模拟移动床模式连接并且适应于半连续或连续色谱。在一些实施例中，色谱系统还包括至少一个平衡缓冲罐15、至少一个清洗缓冲罐16和/或至少一个再生液罐17。在由图4、5和6图示的某些实施例中，色谱系统包括每柱7、8、9至少一个(例如一个)贮存罐4a、4b ;4c。这具有连续色谱工艺可以在没有任何停止来清空一个或多个贮存罐的情况下运行的优点。进料3、洗脱缓冲6、平衡缓冲15和清洗缓冲16罐可以经由如图4和5中的泵直接或经由如图6中的贮存罐4a、4b、4c和泵连接到色谱柱。罐可以具有若干连接口，每个或多个线路可以经由歧管连接。罐还可以具有排放口(未示出)，例如配备有排放过滤器来避免污染。在一些实施例中，用对生物聚合物具有亲和力的树脂填充填充床色谱柱。在特定实施例中，树脂包括蛋白配体。使用蛋白配体的优点是可以实现对生物聚合物的高特异性。由于可以实现的理论板数量高，填充床色谱分离也是能够在组分之间给出非常高分辨度的工艺。在一些实施例中，从蛋白A、蛋白G、蛋白L或抗体得出蛋白配体。它可以是天然或重组蛋白A、G、L或抗体或它可以是这些蛋白中的任何蛋白的突变体、片段或多聚体。这样的配体可以具有非常高的选择性并且因此适合于从复杂的进料捕获有价值的生物制药。然而，它们也是昂贵的并且应尽可能有效地使用具有配体的树脂。在某些实施例中，一个或多个泵、检测器和/或阀包括一次性流路，例如安装在可再用单元或壳体中的一次性流路。这些一次性流路可以包括一次性管道(其连接到一次性柱或柱壳体中的一次性树脂盒和连接到泵中的一次性流路组件)、阀、检测器和换能器。泵中的一次性流路可以是蠕动泵中的管道，而且它还可以是例如隔膜泵的一次性隔膜设置或注射泵的一次性注射器。阀中的一次性流路可以包括节流阀中的管道，而且包括例如一次性球阀、隔膜阀。单向阀等的流路组件。在检测器中，一次性流路可以是用于光学检测(UV、折射率、光散射等)的透明流通试管并且在换能器中它可以是用于测量压力、流率、传导率、温度等的管道或专门设计的流路。流路组装件还可包括卫生和/或无菌连接器，使得流路的部分可被消毒并且连接来形成整个组装件而没有外部污染。在一些实施例中，一个或多个泵包括一个或多个蠕动泵，例如一个或多个多通道蠕动泵。因为蠕动泵不增加任何流体接触表面，在一次性生物加工系统中使用它们是方便的，并且它们很适应于并行输送流体，因为一个泵头可以与若干个管道一起使用。对于整个系统只使用一个多通道泵是可能的，但使用若干多通道泵也是可能的。如果在不同的线路中使用不同的流率，在多通道蠕动泵的通道中使用具有不同直径的管道是可能的。此外，通过释放管道对泵辊的挤压来停止独立线路中的流是可能的。
在某些实施例中，阀12包括节流阀，例如通过例如磁、电、气动或液压致动而操作的夹钳或节流阀。节流阀通常在一次性生物加工中使用，因为它们可以直接安装在柔性管道流路上而没有附加的流体接触表面。然而，因为它们只适应于关闭/打开流路或调节路径中的流率，目前不在连续或半连续色谱中使用它们。到目前为止，连续和半连续色谱依靠能够选择性地将流引导到多个分支流路内的阀，即例如旋转阀和滑阀的多路阀。然而，利用本发明的一个或多个贮存罐，使用节流阀来实施连续/半连续色谱是可能的。在一些实施例中，阀不包括旋转阀、滑阀或具有与液体接触的活动件的其他组件。旋转阀和滑阀因为它们具有复杂的精密工程液体接触件而不能容易地适应于一次性生物加工。在某些实施例中，罐3、4、4a、4b、4c、5、6、15、16、17、18中的一个或多个(例如所有
罐)包括可折叠袋。在一次性生物加工中，这些袋是非常有用的罐式构造，因为它们便宜、可以容易地消毒并且在折叠前和使用后的时候占用小的存储空间。在一些实施例中，色谱系统用于生物聚合物的分离。该系统对于此目的特别有用，这是因为一个或多个贮存罐的存在允许采用高效连续或半连续模式操作，其中分离工艺的不同相可能需要不同的流率并且贮存罐充当缓冲储存器，用于容纳柱之间的液体。在一个方面(由图1-6和8图示的)中，本发明公开用于色谱系统I中目标生物聚合物的色谱分离的方法，该色谱系统I包括至少一个贮存罐4 ;4a、4b、4c，其连接到至少两个柱7、8的至少一个入口端13和至少一个出口端14，所述至少两个柱7、8用对所述目标生物聚合物具有亲和力的树脂填充并且对于每个柱，具有至少一个泵10和至少一个出口检测器11。该方法包括以下步骤:
a)提供进料，其包括目标生物聚合物并且将进料泵送通过第一柱7到洗脱罐6或废料容器19同时用第一出口检测器监测生物聚合物浓度，
b)—旦生物聚合物浓度达到第一预定水平LI，将来自出口检测器的流引导到贮存罐4 ；4b并且
c)将贮存罐的内含物泵送到具有第二出口检测器的第二柱8用于进一步分离。在一些实施例中，当维持通过第一柱7的进料流直到生物聚合物浓度达到如由连接到第一柱的出口检测器测量的第二预定水平L2时，可以实施步骤C)。然后将经由贮存罐4 ；4b将进料从进料罐3引导到第二柱8。在某些实施例中，生物聚合物是要去除的杂质，例如从宿主细胞蛋白、DNA、浸出蛋白质配体、病毒粒子和抗体聚合物的组选择的生物聚合物。进料然后在步骤a)中被泵送通过第一柱到洗脱罐6。本发明的方法适合于在例如单克隆抗体的生物加工中使用在流通中去除污染物。在该情况下，方法可以适当地在抛光步骤中应用，即，在使用具有蛋白A或另一个蛋白质配体的亲和色谱的捕获步骤后。为了去除例如宿主细胞蛋白、宿主细胞DNA、蛋白A残留物、病毒和/或聚合抗体的残留杂质，可在流通模式中使用多模态树脂、阴离子交换树脂、HIC树脂或羟磷灰石，其中在流通中收集抗体并且污染物结合到树脂。在一些实施例中，从由多模态树脂、离子交换树脂、HIC树脂和磷石灰组成的组选择树脂。在有利的实施例中，使用多模态阴离子交换树脂，例如Capto 粘附(GE Healthcare)。在进一步由图9图示的某些实施例中，方法还包括以下步骤: b1)提供清洗缓冲剂并且将清洗缓冲剂泵送通过第一柱7和第一出口检测器到贮存罐4 ；4b内同时用第一出口检测器监测生物聚合物浓度，
bn) 一旦生物聚合物浓度低于第三预定水平L3，将来自第一出口检测器的流引导到废料容器，
bm)提供洗脱缓冲剂并且将洗脱缓冲剂泵送通过第一柱到洗脱罐6。在这些实施例中，进料可以在步骤a)中被泵送通过第一柱到废料容器19。方法还可以包括将柱再生溶液泵送通过第一柱7到废料容器19内的步骤。在步骤b1之前它还可以包括一旦生物聚合物浓度达到第二预定水平则终止到第一柱7的进料流。预定生物聚合物浓度水平L1、L2、L3可以如在图7中图示的那样确定，该图7示出总生物聚合物浓度检测器(例如，UV吸收度检测器)的时间对典型的响应曲线。当在柱上加载进料时，将首先检测非吸收生物聚合物并且其达到一些形式的平稳段水平(曲线中的第一平稳段)。然后当吸收生物聚合物的结合位变饱和时，将检测吸收生物聚合物。首先确定的生物聚合物浓度水平LI可以设置成对应于例如进料中的吸收生物聚合物浓度的1%、5%或10%的点。在该水平处，生物聚合物浓度太高而不允许出口流前往废料而相反转向出口流到贮存罐用于进一步加工。当在柱上加载更多的进料时，将达到第二平稳段，其中所有结合位饱和并且出口中的吸收生物聚合物的浓度将等于进料中的浓度。第二预定生物聚合物浓度水平L2可以设置成对应于例如进料中的吸收生物聚合物浓度的70%、80%或90%的点。在该水平处，几乎所有的结合位饱和并且更有效地使进料流经由贮存罐转向第二柱。在已经达到L2后，可以向第一柱供应清洗缓冲剂并且当冲洗非吸收生物聚合物时，出口处的总生物聚合物浓度将减小至接近零。第三预定生物聚合物浓度水平L3可以设置成对应于例如进料中生物聚合物浓度的0.01%,0.1%或0.5%的点。在该水平处基本上没有非吸收生物聚合物剩余并且第一柱的洗脱可以开始。技术人员将认识到还可以使用其他类型的出口检测器(例如，专门检测吸收生物聚合物的检测器)以模拟的方式确定水平L1、L2和L3。此夕卜，基于预定时间或收集的液体体积(根据以前的经验预期其对应于生物聚合物浓度近似在L1、L2和L3处时的点)来引导流也是可能的。在一些实施例中，生物聚合物是生物制药，例如从免疫球蛋白、单克隆抗体、抗体片段、胰岛素、凝血因子和红细胞生成素的组选择的蛋白、疫苗或质粒。可以通过本发明的方法采用结合-洗脱模式分离这些生物聚合物，其中生物聚合物在加载期间结合到树脂并且通过洗脱缓冲剂而解吸并且在洗脱罐中恢复。在某些实施例中，树脂是亲和树脂，例如包括蛋白配体的树脂。这些树脂可以适当地用本发明的方法采用结合-洗脱模式使用。在进一步由图10图示的一些实施例中，方法还包括以下步骤:
d)用第二出口检测器监测来自第二柱8的生物聚合物的浓度，
e)—旦生物聚合物浓度达到第一预定水平LI，将来自第二出口检测器的流引导到贮存罐4 ；4b或到第二贮存罐4c以及
f )将第二贮存罐4c的内含物泵送到具有第三出口检测器的第三柱9或到第一柱7用于进一步分离。在某些实施例中，方法还包括以下步骤: eO将清洗缓冲剂泵送通过第二柱8和第二出口检测器到贮存罐4 ;4b内或第二贮存罐4c内同时用第二出口检测器监测生物聚合物浓度，
en) 一旦生物聚合物浓度低于第三预定水平L3，将来自第二出口检测器的流引导到废料容器19，
em)将洗脱缓冲剂泵送通过第二柱8到洗脱罐。在一些实施例中，方法包括在步骤e1之前的步骤:当生物聚合物浓度达到第二预定水平L2时使到第二柱8内的进料流终止。在一些实施例中，一个或多个泵10包括蠕动泵，例如一个或多个多通道蠕动泵。在某些实施例中，由电、气动或液压连接到控制单元2的泵10和节流阀的系统控制流。该书面描述使用示例来公开本发明，其包括最佳模式，并且还使本领域内任何技术人员能够实践本发明，包括制作和使用任何装置或系统和执行任何包含的方法。本发明的专利范围由权利要求限定，并且可包括本领域内技术人员想到的其他示例。这样的其他示例如果它们具有不与权利要求的文字语言不同的结构元件，或者如果它们包括与权利要求的文字语言无实质区别的等同结构元件则确定在权利要求的范围内。要注意的是，不同实施例的特征可以组合以形成另外的实施例。
权利要求
1.一种色谱系统(1)，用于生物聚合物的分离，其包括:至少一个进料罐(3)、至少一个贮存罐(4 ;4a，4b，4c)、至少一个洗脱缓冲罐(5)、至少一个洗脱罐(6)、至少两个填充床色谱柱(7，8)以及对于每个柱(7，8)的至少一个泵(10)和至少一个出口检测器(11)，其均连接到所述每个柱(7，8)，其中所述进料罐、一个或多个贮存罐、洗脱缓冲罐和洗脱罐每个经由阀(12)的系统连接到所述至少两个柱并且其中所述一个或多个贮存罐连接到柱(7，8)的至少一个入口端(13)和柱(7，8)的至少一个出口端(14)。
2.如权利要求1所述的色谱系统，进一步包括电、气动或液压连接到所述阀(12)的系统的至少一个控制单元(2)。
3.如权利要求1或2所述的色谱系统，进一步包括至少一个平衡缓冲罐(15)、至少一个清洗缓冲罐(16)和/或至少一个再生液罐(17)。
4.如权利要求1-3中任一项所述的色谱系统，其中，所述至少一个贮存罐(4;4a，4b，4c)适应于接收来自一个柱(7，8)的出口端(14)的流体并且将流体输送到另一个柱(8，7)的入口端(13)。
5.如权利要求1-4中任一项所述的色谱系统，其中，用对所述生物聚合物具有亲和力的树脂填充所述填充床色谱柱(7，8 )。
6.如权利要求1-5中任一项所述的色谱系统，其中，所述树脂包括蛋白配体，例如从蛋白A、蛋白G、蛋白L或抗体得出的蛋白配体。
7.如任一前述权利要求所述的色谱系统，其中，所述至少一个泵、检测器和/或所述阀包括一次性流路，例如安装在可再用单元或壳体中的一次性流路。
8.如任一前述权利要求所述的色谱系统，其中，所述至少一个泵包括至少一个蠕动泵，例如至少一个多通道蠕动泵。
9.如任一前述权利要求所述的色谱系统，其中，所述阀包括节流阀。
10.如任一前述权利要求所述的色谱系统，其中，所述阀不包括旋转阀或滑阀。
11.一种如任一前述权利要求中限定的色谱系统的使用，用于生物聚合物的分离。
12.一种用于色谱系统(I)中生物聚合物的色谱分离的方法，所述色谱系统(I)包括至少一个忙存罐(4 ；4a, 4b, 4c),其连接到至少两个柱(7,8)的至少一个入口端(13)和至少一个出口端(14)，所述至少两个柱(7，8)用对所述生物聚合物具有亲和力的树脂填充；和对于每个柱的至少一个泵(10)和至少一个出口检测器(11)，所述方法包括以下步骤: a)提供进料，其包括所述生物聚合物并且将所述进料泵送通过第一柱(7)同时用第一出口检测器监测所述生物聚合物浓度， b)—旦所述生物聚合物浓度达到第一预定水平(LI)，将来自所述出口检测器的流引导到所述贮存罐(4 ；4b)并且 c)将所述贮存罐(4；4b)的内含物泵送到具有第二出口检测器的第二柱(8)用于进一步分离。
13.如权利要求12所述的方法，其中，在步骤c)期间，维持通过第一柱(7)的进料流直到所述生物聚合物浓度达到如由连接到第一柱的出口检测器测量的第二预定水平(L2)。
14.如权利要求12或13所述的方法，其中，所述生物聚合物是要去除的杂质，例如从宿主细胞蛋白、DNA、浸出蛋白配体、病毒粒子和抗体聚合物的组选择的生物聚合物。
15.如权利要求14所述的方法，其中，所述树脂从多模态树脂、离子交换树脂、HIC树脂或磷灰石的组选择。
16.如权利要求12或13所述的方法，进一步包括以下步骤: b1)提供清洗缓冲剂并且将所述清洗缓冲剂泵送通过所述第一柱(7)和所述第一出口检测器到所述贮存罐(4 ；4b)内同时用所述第一出口检测器监测所述生物聚合物浓度，bn)—旦所述生物聚合物浓度低于第三预定水平(L3)，将来自所述第一出口检测器的流引导到废料容器(19)， bm)提供洗脱缓冲剂并且将所述洗脱缓冲剂泵送通过所述第一柱到洗脱罐(6)。
17.如权利要求12、13或16中任一项所述的方法，其中，所述生物聚合物是生物制药，例如从免疫球蛋白、单克隆抗体、抗体片段、胰岛素、凝血因子和红细胞生成素的组选择的蛋白、疫苗或质粒。
18.如权利要求17所述的方法，其中，所述树脂是亲和树脂，例如包括蛋白配体的树脂。
19.如权利要求12-18中任一项所述的方法，进一步包括以下步骤: d)用所述第二出口检测器监测来自第二柱(8)的所述生物聚合物的浓度， e)—旦生物聚合物浓度达到所述第一预定水平(LI)，将来自第二出口检测器的流引导到贮存罐(4 ；4b)或到第二贮存罐(4c)以及 f)将贮存罐(4;4b)或第二贮存罐(4c)的内含物泵送到具有第三出口检测器的第三柱(9)或到第一柱(7)用 于进一步分离。
20.如权利要求19所述的方法，进一步包括以下步骤: e1)将所述清洗缓冲剂泵送通过所述第二柱(8)和所述第二出口检测器到所述贮存罐(4 ;4b)或所述第二贮存罐(4c)内同时用所述第二出口检测器监测所述生物聚合物的浓度， en)—旦所述生物聚合物的浓度低于第三预定水平(L3)，将来自所述第二出口检测器的流引导到废料容器(19)，以及 em)将所述洗脱缓冲剂泵送通过所述第二柱(8)到洗脱罐。
21.如权利要求12-20中任一项所述的方法，其中，所述泵(10)包括蠕动泵。
22.如权利要求12-21中任一项所述的方法，其中，由电连接到控制单元(2)的泵(10)和节流阀的系统来控制流。
全文摘要
描述用于生物聚合物的分离的色谱系统(1)，其包括至少一个进料罐(3)、至少一个贮存罐(4；4a，4b，4c)、至少一个洗脱缓冲罐(5)、至少一个洗脱罐(6)、至少两个填充床色谱柱(7，8)以及对于每个填充床色谱柱(7，8)的至少一个泵810)和至少一个出口检测器(11)，其均连接到所述每个填充床色谱柱(7，8)，其中所述进料罐、一个或多个贮存罐、洗脱缓冲罐和洗脱罐每个经由阀(12)的系统连接到填充床色谱柱，并且其中所述一个或多个贮存罐连接到柱(7，8)的至少一个入口端(13)和柱(7，8)的至少一个出口端(14)。
文档编号G01N30/46GK103221105SQ201180057837
公开日2013年7月24日 申请日期2011年12月2日 优先权日2010年12月3日
发明者M.哈尔, K.拉基 申请人:通用电气健康护理生物科学股份公司