专利名称：一种水产品中辛基酚和壬基酚的气相色谱-质谱检测方法
技术领域：
本发明涉及一种水产品中辛基酚和壬基酚的气相色谱-质谱联用检测技术，属于水产品质量安全检测技术领域。
背景技术：
烷基酚类化合物是一类具有内分泌干扰性的亲脂性有机化合物，在全球范围内广泛应用于洗涤剂、杀虫剂、塑料添加剂、纺织助剂以及造纸和油田化学品中。全世界每年大约生产500,000吨烧基酹聚氧乙烯醚,其中壬基酹聚 氧乙烯醚(nonylphenolethoxylates, NPnEO)占总产量的80%，其余基本为辛基酚聚氧乙烯醚(OPnEO)。在环境中，烷基酚主要源于非离子表面活性剂烷基酚聚氧乙烯醚的降解。在自然环境及污水处理过程中烷基酚聚氧乙烯醚转化为辛基酚和壬基酚，进入水体、大气和土壤中。在水体环境中，这些化合物主要被吸附于悬浮颗粒物(矿物、生物碎屑、胶体物质和有机质)中，最终通过物理、化学及生物作用沉积于水体底部，因此，沉积物是烷基酚的主要归宿，并最终在底栖生物的体内产生积累，同时可以通过食物链进入人体从而影响人类的健康。近年来，许多学者开展了对自然水体中烷基酚污染状况的调查研究，发现多数河流和湖泊等水体中均有ng/L水平上述物质的污染。国内对烷基酚的研究是从2000年左右开始的，主要集中于烷基酚类在环境介质中的分布和对生物的影响方面，也有少量对烷基酚在污水处理厂的处理效率以及壬基酚的降解方面的研究。对水体水生物中烷基酚含量的调查研究相对较少。水产品中烷基酚污染水平不仅受水体污染源强度的影响，而且与水生物的生活习性、生物特性等因素紧密相关。因此不同水产品污染物水平相差也很大，且水产品基质较复杂。如何通过有效地样品前处理技术和仪器分析技术，建立一种回收率高、重现性好、精确度高的水产品中烷基酚的检测方法，成为研究的关键。烷基酚的仪器检测技术有气相色谱、气相色谱-质谱联用、、液相色谱-质谱联用等，具有较好的灵敏度和精确度。通过固相萃取，衍生试剂衍生后实现气相色谱-火焰离子检测(GC-FID)和气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析检测。但由于水产品样品基质复杂，若样品前处理过程中杂质去除不好，可直接干扰仪器的测定结果，甚至损坏仪器。目前国内还没有针对水产品中烷基酚检测的方法。因此如何高效地从水产品中提取烷基酚并进行净化，成了水产品中痕量烷基酚分析的一个瓶颈，这是本发明的目的。
发明内容
本发明的目的就是克服现有分析方法的不足，能找到一种快速、准确的对水产品中辛基酚、壬基酚的测定方法，以实现水产品中辛基酚、壬基酚的定量及定性测定。本发明提出了一种水产品中辛基酚、壬基酚的气相色谱-质谱检测方法，该方法依次包括以下步骤⑴超声溶剂萃取、⑵固相萃取富集净化、⑶衍生、⑷气相色谱-质谱检测，各步骤的操作方法如下⑴超声溶剂萃取称量I. 0-5. Og匀浆后的水产品加入到样品瓶中，以丙酮为萃取剂；加塞振荡混匀lmin，在40KHz超声波作用下35°C _45°C温度萃取10 min，然后将萃取样品离心5 min,转速5000 rpm,分离出萃取液；⑵固相萃取富集净化佛罗里硅土固相萃取柱，I g/6 mL规格，上端填充已经高温烘过无水硫酸钠1-2 g，用5mL丙酮润洗活化固相萃取柱，然后将上述分离出的萃取液注入固相萃取柱中，弃去流出液；再向固相萃取柱分两次加入色谱纯乙酸乙酯进行洗脱，每次5mL,收集洗脱液；⑶衍生洗脱液经氮气吹干后，加入O. 1-1 mL丙酮和O. ImL衍生试剂N，O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMCS)体积比99 I振荡混匀，衍生试剂加入后要保证密封干燥，60°C -90°C衍生Ih ;衍生后经氮气吹干后，正己 烷定容至ImL待气相色谱质谱检测；进气相色谱-质谱检测前要在室内放置Ih ；⑷气相色谱-质谱检测，将衍生并已放置Ih的样品，经O. 22 μ m的有机滤膜过滤到样品小瓶中，在已设定的气相色谱-质谱条件下进行分析，选择离子扫描检测，外表法定量。色谱条件为进样口温度270°C，离子阱温200°C，传输线温度150°C，氦气流速为1.0mL/min,进样量I μ L,溶剂延迟5min,升温程序100°C保持2min, 10°C/min升温至200°C,保持2min，15°C /min升温至290°C，保持5min，获得出峰时间适中、峰形尖锐、分离度好的色谱图，出峰时间辛基酚硅烷化衍生物11. 894min，壬基酚硅烷化衍生物15.950 min，见附图I ;质谱条件为采用了 4种特征离子的Σ SIM模式，辛基酚硅烷化衍生物特征离子m/z 207，见附图2 ;壬基酚硅烷化衍生物m/z292、179，见附图3 ;绘制标准工作曲线，以外标法定量，根据峰面积计算辛基酚和壬基酚的浓度。本发明的有益效果本发明在一定的温度下采用超声辅助丙酮萃取水产品中的壬基酚和辛集酚，萃取效果好，操作简单；采用佛罗里硅土固相萃取柱富集净化，净化效果好，有效地降低了萃取液中杂质对气相色谱-质谱测定过程的干扰；采用气相色谱-质谱法进行选择离子监测，具有较高的灵敏度和精确度；与已有的测试技术相比，本发明在检测烷基酚过程中不需要昂贵的液相色谱-质谱或其它设备，方法可同时进行定性及定量测定，操作简单易行，消耗成本低，能够快速分析水产品中的辛基酚和壬基酚。本发明采用美国瓦里安公司CP-3800 Saturn 2000气相色谱-质谱联用仪，配置瓦里安CP-8410自动进样器，使用VF1701毛细管气相色谱质谱柱(30 mXO. 25 mmXO. 25μπι)实现组分分离。
附图I : O. 5 μ g/mL标准品溶液的色谱图；附图2 :辛基酚的质谱图；附图3:壬基酚的质谱图。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步的描述。实施例I草鱼中辛基酚和壬基酚的气相色谱-质谱检测⑴溶剂超声萃取准确称量I. Og用高速组织捣碎机搅碎混匀的草鱼样品，加入到具塞试管中，准确加入10 mL色谱纯丙酮；加塞后震荡Imin ;在温度35 1下，进行40KHz的超声波萃取10 min ;然后将萃取样品进行离心5 min,转速5000 rpm ;离心后用吸管收集上层萃取液于旋蒸瓶中；⑵固相萃取富集净化=Florisil固相萃取柱(型号为I g/6 mL)上端填充Ig无水硫酸钠进行脱水，先用5 mL丙酮润洗活化固相萃取柱，然后将萃取液注入的固相萃取柱中，液体自然流出，弃去流出液；再向固相萃取柱中分两次加入色谱纯乙酸乙酯进行洗脱，每次5mL,收集洗脱液于15 mL试管中；⑶衍生洗脱液经氮气吹干后，加入O. I mL丙酮和O. ImL衍生试剂N，O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMCS)体积比99 I振荡混匀，用60 V在恒温气浴振荡器中衍生反应lh，衍生液经氮气吹干后，正己烷定容至l.OmL，进气相色谱-质谱检测前要在室内放置Ih ；
⑷气相色谱-质谱检测取定容并已放置Ih衍生液，注入到ImL针具中，经孔径O. 22 μ m的有机滤膜过滤到样品小瓶中，进行气相色谱-质谱条件检测。色谱条件为进样口温度270°C，离子阱温200°C，传输线温度150°C，氦气流速为I. O mL/min,进样量I μ L，溶剂延迟5min,升温程序100°C保持2min, 10°C /min升温至200°C,保持2min, 15°C /min升温至290°C，保持5min ;气相色谱-质谱检测步骤中采用选择离子监测模式监测，采用了4种特征离子的Σ SIM模式，辛基酚硅烷化衍生物特征离子m/z 207 ;壬基酚硅烷化衍生物m/z292、179 ;绘制标准工作曲线，以外标法定量，根据峰面积计算辛基酚和壬基酚的浓度；(5)标准曲线绘制用色谱纯丙酮配制浓度为O. 5 μ g/mL、I. O μ g/mL、2. 0 μ g/mL、5. 0 μ g/mL、10 μ g/mL的辛基酚和壬基酚混合标准溶液，用移液管分别取上述各溶液0. I mL与试管中，然后按照上述⑶、⑷步骤的要求进行操作，根据加入的烷基酚浓度和峰面积的对应关系绘制标准曲线；(6)方法回收率的测定分别按O. 05 μ g/g、0. I μ g/g、0. 2 μ g/g、0. 5 μ g/g、I. 0 μ g/g 的浓度在草鱼样品中添加辛基酚和壬基酚的混合标准溶液，每个添加水平分别做六个平行样；按步骤⑴-⑷进行气相色谱-质谱检测，并与上述得到的标准曲线比较，通过换算最终得到待测草鱼样品中辛基酚和壬基酚的浓度。方法回收率在75-96%，RSD ( 15%。实施例2草鱼中辛基酚和壬基酚的气相色谱-质谱检测⑴溶剂超声萃取准确称量3. O g用高速组织捣碎机搅碎混匀的草鱼样品，加入到具塞试管中，准确加入10 HiL色谱纯丙酮；加塞后震荡Imin ;在温度40 1下，进行40KHz的超声波萃取10 min ;然后将萃取样品进行离心5 min,转速5000 rpm ;离心后用吸管收集上层萃取液于旋蒸瓶中；⑵固相萃取富集净化Florisil固相萃取柱,型号为I g/6 mL,上端填充1.5g无水硫酸钠进行脱水，先用5 mL丙酮润洗活化固相萃取柱，然后将萃取液注入固相萃取柱中，液体自然流出，弃去流出液；再向固相萃取柱中分两次加入色谱纯乙酸乙酯进行洗脱，每次5mL,收集洗脱液于15 mL试管中；⑶衍生洗脱液经氮气吹干后，加入O. 5 mL丙酮和O. ImL衍生试剂N，O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMCS)体积比99 I振荡混匀，在75 V烘箱内衍生反应lh，衍生液经氮气吹干后，正己烷定容至I. O mL，进气相色谱-质谱检测前要在室内放置Ih ；⑷气相色谱-质谱检测取定容并已放置Ih的衍生液，注入到ImL针具中，经孔径O. 22 μ m的有机滤膜过滤到样品小瓶中，进行气相色谱-质谱条件检测。色谱条件为进样口温度270°C，离子阱温200°C，传输线温度150°C，氦气流速为I. O mL/min,进样量I μ L，溶剂延迟5min,升温程序100°C保持2min, 10°C /min升温至200°C,保持2min, 15°C /min升温至290°C，保持5min ;气相色谱-质谱检测步骤中采用选择离子监测模式监测，采用了4种特征离子的Σ SIM模式，辛基酚硅烷化衍生物特征离子m/z 207 ;壬基酚硅烷化衍生物m/z292、179 ;绘制标准工作曲线，以外标法定量，根据峰面积计算辛基酚和壬基酚的浓度；(5)标准曲线绘制用色谱纯丙酮配制浓度为O. 5 μ g/mL、I. O μ g/mL、2. 0 μ g/mL、5. 0 μ g/mL、10 μ g/mL的辛基酚和壬基酚混合标准溶液，用移液管分别取上述各溶液O. I mL与试管中，然后按照上述⑶、⑷步骤的要求进行操作，根据加入的烷基酚浓度和峰面积的对应关系绘制标准 曲线；(6)方法回收率的测定分别按O. 05 μ g/g、0. I μ g/g、0. 2 μ g/g、0. 5 μ g/g、I. 0 μ g/g 的浓度在草鱼样品
中添加辛基酚和壬基酚的混合标准溶液，每个添加水平分别做六个平行样；按步骤⑴-⑷进行气相色谱-质谱检测，并与上述得到的标准曲线比较，通过换算最终得到待测草鱼样品中辛基酚和壬基酚的浓度。方法回收率在80-105%，RSD ( 15%。实施例3草鱼中辛基酚和壬基酚的气相色谱-质谱检测⑴溶剂超声萃取准确称量5. O g用高速组织捣碎机搅碎混匀的草鱼样品，加入到具塞试管中，准确加入10 HiL色谱纯丙酮；加塞后震荡Imin ;在温度45 1下，进行40KHz的超声波萃取10 min ;然后将萃取样品进行离心5 min,转速5000 rpm ;离心后用吸管收集上层萃取液于旋蒸瓶中；⑵固相萃取富集净化Florisil固相萃取柱上端填充2g无水硫酸钠进行脱水，先用5 mL丙酮润洗活化固相萃取柱,然后将萃取液注入I g/6 mL的固相萃取柱中，液体自然流出，弃去流出液；再向固相萃取柱中分两次加入色谱纯乙酸乙酯进行洗脱，每次5mL，收集洗脱液于15 mL试管中；⑶衍生洗脱液经氮气吹干后，加入I. O mL丙酮和O. ImL衍生试剂N，O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMCS)体积比99 I振荡混匀，用90°C衍生反应lh，衍生液经氮气吹干后，正己烷定容至lmL，进气相色谱-质谱检测前要在室内放置Ih ；⑷气相色谱-质谱检测取定容并已放置Ih的衍生液，注入到ImL针具中，经孔径O. 22 μ m的有机滤膜过滤到样品小瓶中，进行气相色谱-质谱条件检测。色谱条件为进样口温度270°C，离子阱温200°C，传输线温度150°C，氦气流速为I. O mL/min,进样量I μ L，溶剂延迟5min,升温程序100°C保持2min, 10°C /min升温至200°C,保持2min, 15°C /min升温至290°C，保持5min ;气相色谱-质谱检测步骤中采用选择离子监测模式监测，采用了 4种特征离子的Σ SM模式，辛基酚硅烷化衍生物特征离子m/z 207 ;壬基酚硅烷化衍生物m/z292、179 ;绘制标准工作曲线，以外标法定量，根据峰面积计算辛基酚和壬基酚的浓度；
(5)标准曲线绘制用色谱纯丙酮配制浓度为O. 5 μ g/mL、I. O μ g/mL、2. 0 μ g/mL、5. 0 μ g/mL、10 μ g/mL的辛基酚和壬基酚混合标准溶液，用移液管分别取上述各溶液0. I mL与试管中，然后按照上述⑶、⑷ 步骤的要求进行操作，根据加入的烷基酚浓度和峰面积的对应关系绘制标准曲线；(6)方法回收率的测定分别按O. 05 μ g/g、0. I μ g/g、0. 2 μ g/g、0. 5 μ g/g、I. 0 μ g/g 的浓度在草鱼样品
中添加辛基酚和壬基酚的混合标准溶液，每个添加水平分别做六个平行样；按步骤⑴-⑷进行气相色谱-质谱检测，并与上述得到的标准曲线比较，通过换算最终得到待测草鱼样品中辛基酚和壬基酚的浓度。方法回收率在75-110%，RSD ( 15%。上述实施例是对本发明的说明，不是对本发明的限定，任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。
权利要求
1.一种水产品中辛基酚、壬基酚的气相色谱-质谱检测方法，其特征在于该方法包括①超声溶剂萃取、②固相萃取富集浄化、③衍生、④气相色谱-质谱检测，其中 ①所述的超声溶剂萃取，按下面步骤操作称量I.0-5. Og匀浆后的水产品加入到样品瓶中，以丙酮为萃取剂；加塞振荡混匀lmin，在40KHz超声波作用下35°C _45°C温度萃取10min,然后将萃取样品离心5 min,转速5000 rpm,分离出萃取液； ②所述的固相萃取富集浄化，按下面步骤操作佛罗里硅土固相萃取柱，Ig/6 mL规格，上端填充已经高温烘过无水硫酸钠1-2 g，用丙酮润洗活化固相萃取柱，然后将上述分离出的萃取液注入固相萃取柱中，弃去流出液；再向固相萃取柱分两次加入色谱纯こ酸こ酯进行洗脱，毎次5mL，收集洗脱液； ③所述的衍生，按下面步骤操作洗脱液经氮气吹干后，加入O.1-1 mL丙酮和O. ImL衍生试剂N，O-双(三甲基硅烷基)三氟こ酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMCS)体积比99 I振荡混匀，60°C -90°C衍生，衍生反应过程要保证密封干燥；衍生液经氮气吹干后，正己烷定容至ImL ;进气相色谱-质谱检测前要在室内放置Ih ； ④所述的气相色谱-质谱检測，按下面步骤操作取定容并已放置Ih的衍生液，经O.22 μ m的有机滤膜过滤到样品小瓶中，进行气相色谱-质谱检测。色谱条件为进样ロ温度270°C，离子阱温200°C，传输线温度150°C，氦气流速为I. O mL/min,进样量I μ L，溶剂延迟5min,升温程序100°C保持2min, 10°C /min升温至200°C,保持2min, 15°C /min升温至290°C，保持5min。质谱条件采用了 4种特征离子的Σ SM模式，辛基酚硅烷化衍生物特征离子m/z207 ;壬基酚硅烷化衍生物m/z292、179 ;绘制标准工作曲线，以外标法定量，根据峰面积计算辛基酚和壬基酚的浓度。
全文摘要
本发明涉及一种水产品中辛基酚和壬基酚的气相色谱-串联质谱检测技术，属于水产品质量安全检测技术领域。以丙酮为萃取剂进行超声萃取提取水产品中的辛基酚和壬基酚，提取物经过固相萃取去除提取物中的干扰物，洗脱液经氮气吹干后，用丙酮和衍生化试剂N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMCS)体积比99∶1衍生，利用气相色谱质谱进行选择离子扫描检测，外标法定量。该方法操作方便，重现性较好，定性准确且回收率较高，能够快速分析水产品中的辛基酚和壬基酚。
文档编号G01N30/02GK102841161SQ20121036969
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者孙秀梅, 郭远明, 胡红美, 钟志, 金衍健, 丁跃平, 陈朋, 何依娜 申请人:浙江省海洋水产研究所