一种丹参的乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种丹参的乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用，所述乙酸乙酯提取物由以下方法制备：丹参，用石油醚浸泡，石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得乙酸乙酯提取物。经过体外试验，发现本发明提供的丹参的乙酸乙酯提取物可抑制H1N1病毒，效果明显。
【专利说明】一种丹参的乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及丹参提取物，具体涉及一种丹参的乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，具有流行面广，传染性高，发病率高等特点，严重威胁人类的健康和生命。2009年，墨西哥爆发的HlNl流感是由禽流感、猪流感和人流感病毒基因混合而成，其特点是突然出现，传播迅速。[0003]HlNl(又称猪流感)是一种病毒，是Orthomyxoviridae系列的一种病毒。它的宿主是鸟类和一些哺乳动物。几乎所有甲型的HlNl病毒已被隔离，野生鸟类出现疾病属罕见。有些HlNl病毒引起严重的疾病大多发生于家禽方面，而人类却很少出现。但经过鸟类和哺乳动物的传播和变异，这可能导致疫情或人类流感大面积传播。
[0004]HlNl流感病毒的群间传播主要是以感染者的咳嗽和喷嚏为媒介，在人群密集的环境中更容易发生感染，而越来越多证据显示，微量病毒可留存在桌面、电话机或其它平面上，再透过手指与眼、鼻、口的接触来传播。因此尽量不要身体接触，包括握手、亲吻、共餐等。如果接触带有甲型HlNl流感病毒的物品，而后又触碰自己的鼻子和口腔，也会受到感染。感染者有可能在出现症状如感染其他人，感染后一般在一周、或一周多后发病。小孩的传染性会久一些。目前，中国已成功研制出甲型HlNl流感疫苗。由于HlNl猪流感病毒不同于HlNl人类流感病毒，现有的流感疫苗并不能预防HlNl猪流感病毒。但四种治疗季节性流感的药物可预防猪流感:金刚烧胺(amantadine),金刚乙胺(rimantadine),奥司他韦(oseltamivir)和扎那米韦(zanamivir)。尽管其均为治疗流行性感冒的有效药物,但近期从猪流感患者体内检测出的病毒特征来看，它已对金刚烧胺(amantadine),金刚乙胺(rimantadine)有了抗药性。因此在治疗和预防时,采用奥司他韦(oseltamivir)和扎那米韦(zanamivir)将更为有效。
[0005]HlNl流感病毒作为流感的一种，可以用传统的中医理论和方法进行治疗，从中医角度讲，流感是感受外来邪气，客于肺经，闭其清道，肺气不得下降，其人必定流清涕、发热、恶风、恶寒、头疼身痛等情形。法宜宣散，如桂枝汤、麻黄汤、葛根汤之类。如不能及时治疗会转为内伤，引发肾阳衰而阴寒内生，肾络通于肺，心肺之阳不足，不能统摄津液，而流清鼻涕，患者必定没有外感的足征，多困倦无神，或喷嚏不休，或两脚冰冷，法宜扶阳，如四逆汤、白通汤、封髓丹、麻黄附子细辛汤、姜桂汤之类。
[0006]中医讲求辨证施治，根据流感不同类型分别治疗，有一诀窍:凡见打喷嚏、流清涕、鼻塞，而无其它症状，就属于内寒感冒，不论轻重，服四逆汤、麻黄附子细辛汤必效，病去药止，不留后遗症。若服其它感冒药，必然无效，而且，还会使病邪加深加重，转成肺肾等重病。
[0007]所以，治疗流感却服用治疗外感的药物，一定不会有很好的疗效。而且，还会将阴邪敛在体内，到一定时间必定会发作。而现行的中、西医的治疗方法，都具有再次将阴邪收敛的作用，如此经过多次积累，最终造成哮喘、鼻炎、咽炎、气管炎等呼吸系统疾病。[0008]神经氨酸酶(neuraminidase,NA)是甲、乙型流感病毒中有唾液酸酶活性的表面糖蛋白，在病毒的复制和致病过程中起重要作用。所以神经氨酸酶抑制剂的研究与开发已成为寻找治疗流感病毒药物的研究热点。
[0009]丹参,来源于唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖,具有如下作用:
[0010]1、抗菌消炎作用:醇提丹参液对口腔常见致病菌有抑制作用。
[0011]2、保护肝脏的作用:丹参水或甲醇提取物能够治疗和预防肝硬化胆汁的肝纤维化。
[0012]3、对脑组织的作用:丹参提取物可以用作治疗学或保健食品的治疗和预防认知功能障碍
[0013]4、抗消化性溃疡:丹参水溶液治疗消化性溃疡、难治性溃疡效果较好。
[0014]5、心血管的作用:丹参中的丹参酮具有非常强的抗血凝作用。丹参素、原儿茶醛也具有抗凝作用；丹酚酸A能显著改善大鼠心肌缺血，提示丹参可对抗缺氧/复氧对心肌细胞的影响和损伤；丹酚酸B达到防治动脉样硬化的目的。
[0015]迄今为止，尚未有关于丹参的乙酸乙酯提取物及其相关应用的报道。
【发明内容】
[0016]本发明的目的是提供一种丹参的乙酸乙酯提取物。
[0017]本发明的另一目的是提供丹参的乙酸乙酯提取物的制备方法。
[0018]本发明的另一目的是提供丹参的乙酸乙酯提取物的应用。
[0019]本发明提供的丹参的乙酸乙酯提取物，由以下方法制备:丹参，用石油醚浸泡，石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得乙酸乙酯提取物。
[0020]所述丹参的乙酸乙酯提取物中:
[0021]所述石油醚为60_90°C的石油醚；
[0022]所述石油醚浸泡后渗滤的方法包括以下步骤:用丹参重量3-5倍量体积的石油醚浸泡12-48h，石油醚渗漉，得到丹参重量3-8倍量体积的渗滤液，即可。
[0023]所述残渣用乙醇提取的方法包括以下步骤:用60%_90%的乙醇回流提取2-3次，每次用丹参重量3-5倍体积的乙醇，每次提取时间为1-3小时。
[0024]优选地,所述丹参的乙酸乙酯提取物由以下方法制备:丹参,用丹参重量3-5倍量体积的石油醚浸泡18-36h，石油醚渗漉，得到丹参重量5-7倍量体积的渗滤液，回收残渣，挥干残洛中的石油醚，然后用70%_90%的乙醇回流提取2-3次,每次用丹参重量3-5倍量体积的乙醇，每次提取时间为1-3小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，再用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得丹参的乙酸乙酯提取物。
[0025]进一步优选，所述丹参的乙酸乙酯提取物由以下方法制备:丹参，用丹参重量3倍量体积的石油醚浸泡24h，石油醚渗漉，得到丹参重量5倍量体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用丹参重量3倍量体积的80%的乙醇回流提取2次，每次提取时间为2小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，再用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得丹参的乙酸乙酯提取物。[0026]解释说明，关于重量的多少倍体积，例如，用丹参重量3-5倍量体积的石油醚浸泡，以丹参为100g为例，则所用石油醚的用量为300-500ml。
[0027]本发明还提供了一种制备上述丹参的乙酸乙酯提取物的方法，该方法包括以下步骤:丹参，用石油醚浸泡，石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层提取液，蒸干得乙酸乙酯提取物。
[0028]本发明还提供了含上述丹参的乙酸乙酯提取物的制剂，该制剂由丹参提取物和药学上可接受的载体组成。
[0029]所述制剂为片剂、胶囊、颗粒或丸剂。
[0030]所述药学上可接受的载体或稀释剂是指药学领域常规的药物载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、润湿剂、溶剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。
[0031]所述填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素或葡萄糖等;
[0032]所述粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、淀粉、糊精、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等；
[0033]所述崩解剂选自微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素或交联羧甲基纤维素钠；
[0034]所述润滑剂选自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸钙、碳酸氢钠、微粉硅胶、滑石粉或硬脂酸镁；
[0035]所述助悬剂选自微粉硅胶、蜂蜡、纤维素、固态聚乙二醇；
[0036]所述润湿剂选自甘油、吐`温-80、乙氧基氢化蓖麻油或卵磷脂；
[0037]所述溶剂选自乙醇、液态聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油选自大豆油、蓖麻油、花生油、调和油等；
[0038]所述表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、月旨肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐温)等；
[0039]所述矫味剂选自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、柠檬酸或糖精钠。
[0040]本发明还提供了丹参的乙酸乙酯提取物的在制备抑制HlNl流感病毒药物中的应用。
[0041]在抑制HlNl流感病毒时，丹参的乙酸乙酯提取物的用量(即每日服用量限定为0.lmg-3g)
[0042]本发明还提供了丹参的乙酸乙酯提取物的检测方法，该检测方法是用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用分析系统()对丹参提取物进行分析，以获得乙酸乙酯提取物的指纹图谱。
[0043]所述色谱分析条件为:色谱柱:Waters ACQUITY UPLCtmBEHC18Column (50mmX 2.lmm.1 d., 1.7 μ m) ;二元梯度洗脱，A相为水溶液；B相为乙腈，流速为0.25mL/min;质谱条件为:ESI离子源，正离子模式检测；自动3级质谱。
[0044]优选地，所述色谱条件见下表(即表1):
[0045]表1:色谱条件
【权利要求】
1.一种丹参的乙酸乙酯提取物，其特征在于，该乙酸乙酯提取物由以下方法制备:丹参，用石油醚浸泡，石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得乙酸乙酯提取物。
2.根据权利要求1所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述石油醚浸泡后渗滤的方法包括以下步骤:用丹参重量3-5倍量体积的石油醚浸泡12-48h，石油醚渗漉，得到丹参重量3-8倍量体积的渗滤液，即可。
3.根据权利要求1所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述残渣用乙醇提取的方法包括以下步骤:用60%-90%的乙醇回流提取2-3次，每次用丹参重量3-5倍体积的乙醇，每次提取时间为1-3小时。
4.根据权利要求1-3任一项所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述丹参的乙酸乙酯提取物由以下方法制备:丹参，用丹参重量3-5倍量体积的石油醚浸泡18-36h，石油醚渗漉，得到丹参重量5-7倍量体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用70%-90%的乙醇回流提取2-3次，每次用丹参重量3-5倍量体积的乙醇，每次提取时间为1-3小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，再用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得丹参的乙酸乙酯提取物。
5.根据权利要求4所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述丹参的乙酸乙酯提取物由以下方法制备:丹参，用丹参重量3倍量体积的石油醚浸泡24h，石油醚渗漉，得到丹参重量5倍量体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用丹参重量3倍量体积的80%的乙醇回流提取2次，每次提取时间为2小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，再用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得丹参的乙酸乙酯提取物。
6.一种制备权利要求1-5任一项所述的乙酸乙酯提取物的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:丹参，用石油醚浸泡，石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液浓缩至`无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层提取液，蒸干得乙酸乙酯提取物。
7.含权利要求1-5任一项所述的乙酸乙酯提取物的制剂，其特征在于，该制剂由丹参提取物和药学上可接受的载体组成。。
8.权利要求1-5任一项所述的乙酸乙酯提取物或权利要求7所述的制剂在制备抑制HlNl流感病毒药物中的应用。
9.权利要求1-5任一项所述的乙酸乙酯提取物或权利要求7所述的制剂的检测方法，其特征在于，用超高效液相色谱-电喷雾串联质仪对丹参提取物进行分析，以获得乙酸乙酯提取物的指纹图谱。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤: 所述色谱分析条件为:色谱柱:Waters ACQUITY UPLCtmBEHC18 Column (50mmX 2.lmm.1d.，1.7 μ m) ;二元梯度洗脱，A相为水溶液；B相为乙腈，流速为0.25mL/min; 质谱条件为:ESI离子源，正离子模式检测；自动3级质谱； 优选地，所述色谱条件:
【文档编号】G01N30/02GK103860644SQ201210533996
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2012年12月11日 优先权日:2012年12月11日
【发明者】陈士林, 黄林芳, 王冬梅, 刘艾林, 杨大坚, 徐宏喜, 卞兆祥, 陈新滋 申请人:中国医学科学院药用植物研究所, 香港浸会大学