离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法及应用。甲磺酸甲酯在碱性条件下加热水解生成甲磺酸和甲醇，以电导检测器为检测手段，经过阴离子交换柱分离后经过抑制器，然后通过检测甲磺酸的含量从而得到甲磺酸甲酯的含量。本发明首次利用离子色谱法对甲磺酸甲酯进行检测，甲磺酸甲酯在碱性条件下能够完全水解，将甲磺酸甲酯在最佳的水解条件水解后，利用离子色谱仪对溶液进行分离检测；所需仪器设备简单，成本低廉，避免了使用色谱-质谱联用技术，简化了操作过程，降低了成本。本方法的整体稳定性，重现性理想，测定数据准确可靠，可以广泛应用于生物制药、药代动力学研究、食品安全等领域。
【专利说明】离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种测定甲磺酸甲酯的新方法，特别是离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法及应用。
【背景技术】
[0002]甲磺酸甲酯(methylmethanesulfonate,MMS)是一种能够损伤DNA的烧化剂，主要使嘌呤碱基上的氮、氧原子发生甲基化，导致DNA双链断裂、点突变。所以甲磺酸甲酯是一种直接致突变物，具有致癌性，对甲磺酸甲酯准确的测定具有非常重要的意义，尤其是在药物中的含量。目前测定甲磺酸甲酯的方法主要有液相色谱-质谱法和气相色谱质谱法，但是这两种方法的操作都比较繁琐，尤其是气相色谱-质谱联用技术不仅操作繁琐，检测成本也很高。
【发明内容】
[0003]为了克服现有技术的不足，本发明提供了离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法及应用。
[0004]一种离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法，甲磺酸甲酯在碱性条件下加热水解生成甲磺酸和甲醇，以电导检测器为检测手段，经过阴离子交换柱分离后经过抑制器，然后通过检测甲磺酸的含量从而得到甲磺酸甲酯的含量。
[0005]一种所述的方法测定齐多夫定中的甲磺酸甲酯含量，步骤如下:
1)标准溶液的配制:称取甲磺酸0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入去离子水定容；
2)淋洗液配制:6.3mmol / LNaHCO3 和 1.7mmol / LNa2CO3 的混合液；
3)标准曲线制作:采用逐级稀释的方法配制不同浓度标准溶液色谱进样分析，得线性回归方程为Y = 8.71781X-1.77812，线性相关系数R = 0.9994 ；
4)甲磺酸甲酯的前处理:称取甲磺酸甲酯0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入2mL甲醇待甲磺酸甲酯溶解后加入去离子水定容置刻度；甲磺酸甲酯的水解条件为:PH值为10、水解温度为80°C、水解时间为15min ；
5)测定:淋洗液由泵输送流经阴离子交换柱，所述的步骤4)中甲磺酸甲酯水解后的产物进入分离系统，在阴离子交换柱上被分离，流经抑制器，最后进入检测器检测后得色谱峰，对色谱峰面积处理后得实验数据；
6)实际样品的测定:用所述的步骤4)中样品前处理的方法将齐多夫定水溶液配制好，进行水解，水解液色谱进样；进样量:30μ L，泵的流速为0.5mL / min。
[0006]水解后的甲磺酸在0.5 — IOmg / L的范围内具有线性关系，线性相关系数为0.9994，检出限为0.1Omg / L，加标回收率为92.06 % -97.28 %，相对标准偏差(RSD) 0.80%。
[0007]—种所述的方法的应用，应用于食品、环境、药代动力学分析领域的能够完全水解的酯类物质。[0008]本发明的有益效果:
本发明首次利用离子色谱法对甲磺酸甲酯进行检测，甲磺酸甲酯在碱性条件下能够完全水解，将甲磺酸甲酯在最佳的水解条件(最佳的PH值、温度和水解时间)水解后，利用离子色谱仪对溶液进行分离检测；本方法所需仪器设备简单，成本低廉，避免了使用色谱-质谱联用技术，大大的简化了操作过程，降低了成本。本方法的整体稳定性，重现性理想，测定数据准确可靠，可以广泛应用于生物制药、药代动力学研究、食品安全等领域。目前国内外尚无关于离子色谱法测定甲磺酸甲酯的报道。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1是甲磺酸标准品的离子色谱图(0.05mmol / L)；
图2是甲磺酸甲酯随pH值变化的水解曲线图；
图3是甲磺酸甲酯随水解时间变化的水解曲线图；
图4是甲磺酸甲酯随温度变化的水解曲线图；
图5是0.05mmol / L甲磺酸甲酯(在最佳水解条件下水解后)色谱图。
具体实施方案
[0010]下面结合实施例对本发明做进一步具体说明。
[0011]离子色谱法测定齐多夫定中甲磺酸甲酯的含量:
具体步骤如下:
1、标准溶液的配制:精确称取甲磺酸0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入去离子水定容至刻度；精确称取甲磺酸甲酯0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入适量甲醇待甲磺酸甲酯全部溶解后加入去尚子水定各至刻度；
2、标准曲线制作:采用逐级稀释的方法配制不同浓度标准溶液；
3、样品前处理:精确称取齐多夫定IOmg置于IOmL的容量瓶中，加入去离子水溶解、定容至刻度，在温度80°C、pH值10、时间15min进行水解。
[0012]4、淋洗液的选择:试验不同浓度的淋洗液配比,最终确定为:6.3mmol / L NaHC03、
1.7mmo1 / LNa2CO3.5、水解条件的优化:试验不同pH值、水解温度、水解时间对甲磺酸甲酯水解率的影响。甲磺酸甲酯随时间变化水解率曲线见附图3、随pH值变化曲线见附图4、随温度变化曲线见附图5。最终确定最佳水解条件为:温度80°C、pH值10、时间15mmin ；
6、标准溶液色谱图:进样量:30yL，分别取0.05mmol/ L甲磺酸和甲磺酸甲酯(在最佳水解条件下水解后)进样，得到甲磺酸标样色谱图(附图1)和甲磺酸甲酯标样色谱图。
[0013]7、实际样品的测定:进样量:30 μ L,栗的流速为0.5mL / min。在以上试验条件下，利用本发明可以实现对齐多夫定中甲磺酸甲酯的测定。
实施例
[0014]I实验部分
1.1仪器与试剂
IC2010离子色谱仪(东曹生物科技有限公司)、SuperIC-AZ分析柱、2510Branson超声波清洗器(美国Branson Ultrasonics公司)甲磺酸(分析纯)、甲磺酸甲酯(分析纯)、碳酸钠(分析纯)、碳酸氢钠(分析纯)、氢氧化钠(分析纯)、甲醇(分析纯)。齐多夫定来自浙江新华制药厂。
[0015]1.2色谱条件
色谱柱:TSKgel SuperIC-AZ 淋洗液:6.3mmol / L NaHC03U.7mmol / LNa2C03 抑制胶:TSKsupperss IC-A。流速:0.5mL / min检测器:电导器温度:40°C 进样量:30 μ L
1.3溶液的配置
甲磺酸标准储备液:取甲磺酸0.10g，置于IOOmL容量瓶中加去离子水定容至刻度，得浓度为1000mg / L，置于冰箱中备用。甲磺酸甲酯储备液:取甲磺酸甲酯0.10g，置于IOOmL容量瓶加入适量乙醇使甲磺酸甲酯充分溶解，加去离子水定容至刻度，得浓度为1000mg /L,置于冰箱备用。
[0016]1.4样品前处理
准确称取齐多夫定样品0.10g，置于IOOmL容量瓶中加入适量去离子水超声溶解，加入去离子水定容至刻度，得浓度为1000mg / L0在pH值为10、温度为80°C的条件下水解15min,直接进样测定。
[0017]2结果与讨论
2.1水解条件的优化
甲磺酸甲酯在常温及中性条件下比较稳定，但在碱性条件下会发生水解，这也是我们试验的理论根据，考虑到酯类物质水解效率主要由溶液碱性、温度和时间。因此我们对这三个水解条件进行优化。水解率是根据相同摩尔浓度的甲磺酸和甲磺酸甲酯(水解后)的峰面积计算。水解率计算公式见公式(I)
【权利要求】
1.一种离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法，其特征在于，甲磺酸甲酯在碱性条件下加热水解生成甲磺酸和甲醇，以电导检测器为检测手段，经过阴离子交换柱分离后经过抑制器，然后通过检测甲磺酸的含量从而得到甲磺酸甲酯的含量。
2.一种根据权利要求1所述的方法测定齐多夫定中的甲磺酸甲酯含量，其特征在于，步骤如下: 1)标准溶液的配制:称取甲磺酸0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入去离子水定容； 2)淋洗液配制:6.3mmol/L NaHCO3 和 1.7mmoI/LNa2CO3 的混合液； 3)标准曲线制作:采用逐级稀释的方法配制不同浓度标准溶液色谱进样分析，得线性回归方程为Y=8.71781Χ-1.77812，线性相关系数R=0.9994 ； 4)甲磺酸甲酯的前处理:称取甲磺酸甲酯0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入2mL甲醇待甲磺酸甲酯溶解后加入去离子水定容置刻度；甲磺酸甲酯的水解条件为:PH值为10、水解温度为80°C、水解时间为15min ； 5)测定:淋洗液由泵输送流经阴离子交换柱，所述的步骤4)中甲磺酸甲酯水解后的产物进入分离系统，在阴离子交换柱上被分离，流经抑制器，最后进入检测器检测后得色谱峰，对色谱峰面积处理后得实验数据； 6)实际样品的测定:用所述的步骤4)中样品前处理的方法将齐多夫定水溶液配制好，进行水解，水解液色谱进样；进样量:30μ?，泵的流速为0.5mL/min。
3.根据权利 要求2所述的方法测定齐多夫定中的甲磺酸甲酯含量，其特征在于，水解后的甲磺酸在0.5-10mg/L的范围内具有线性关系，线性相关系数为0.9994，检出限为0.10mg/L，加标回收率为92.06%-97.28%，相对标准偏差(RSD) 0.80%。
4.一种根据权利要求1所述的方法的应用，其特征在于，应用于食品、环境、药代动力学分析领域的能够完全水解的酯类物质。
【文档编号】G01N30/88GK103728404SQ201310672837
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年12月12日 优先权日:2013年12月12日
【发明者】陈梅兰, 孙营营 申请人:浙江树人大学