本发明创造属于小分子化合物分子印迹电化学分析技术领域，尤其是涉及一种检测苯醚甲环唑的分子印迹电化学传感分析方法。
背景技术：
苯醚甲环唑属于内吸性杀菌剂，现在主要被广泛应用于防治在水果，蔬菜，谷物和其他农作物上由于真菌引起的黑星病、炭疽病等。苯醚甲环唑具有杀菌高效、广谱、低毒的特点现在已经是农业生产中应用最广泛，最有发展前景的一种杀菌剂。然而，由于其在水中溶解性较差，在土壤中移动性小，降解缓慢，在谷物，油料，水果，蔬菜，花生，甜菜，茶叶，人参等作物中均有残留。毒理学实验表明，大鼠连续90d摄入250mg/kg剂量的苯醚甲环唑原药后，体重降低，肝脏及肾组织肿大，雄性大鼠血清中丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平升高，表明苯醚甲环唑对大鼠肝脏可能有一定程度的损害。
目前，用来检测苯醚甲环唑残留方法比较常见的有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和液相色谱-质谱联用法(LC-MS)。然而这些方法样品前处理方法复杂，需要昂贵的分析仪器等缺点。因此，开发简便，快速的分析技术很有必要。分子印迹电化学传感器对目标物的检测是通过分析目标物特异性吸附到电极表面的分子印迹聚合物时引起电信号来实现的。电聚合分子印迹聚合物膜是一种直接成膜的方法，具有成膜厚度可控、附着力强、操作简便以及容易掺杂其他物质等优势。相比传统合成分子印迹的方法与其他仪器检测的方法，用分子印迹电化学传感检测具有操作简便，对设备要求低等特点，是一种极具引用潜力的快速检测技术。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明创造旨在提出一种苯醚甲环唑检测的分子印迹电化学传感分析方法，用分子印迹作为识别元件能够更直接快速的特异性识别目标物，减少样品前处理过程，以克服传统检测苯醚甲环唑方法中所用的大型仪器昂贵且检测时间长，用传统的方法合成苯醚甲环唑分子印迹方法耗时等缺点。
为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：
一种检测苯醚甲环唑的分子印迹电化学传感分析方法，包括如下步骤，
1)电极修饰：将含有苯醚甲环唑，对氨基苯硫酚，四丁基高氯酸铵的甲醇溶液作为聚合液，将修饰有AuNPs的电极浸入聚合液中，以饱和甘汞电极作为参比电极、铂电极作为对电极，循环伏安扫描。聚合后的电极浸入甲醇/醋酸(8:2,v/v)溶液，冲洗吹干备用；
2)检测还原峰电流值：将步骤1)修饰好的电极浸入K3[Fe(CN)6]溶液中，以饱和甘汞电极作为参比电极、铂电极作为对电极，向其中加入苯醚甲环唑标准溶液，用差分脉冲伏安法测定还原峰电流值。用相对电流变化(ΔI/I0)分析还原峰电流值与苯醚甲环唑浓度之间的关系。
进一步的，所述AuNPs和分子印迹(MIP)膜修饰GCE电极制备包括如下步骤：
1)纳米金颗粒在玻碳电极表面的电沉积：将直径为4mm的玻碳电极GCE依次在粒径为0.3μm和0.5μm的氧化铝粉上抛光打磨洗净冲干。将获得的GCE电极浸没于含有2.43mmol L-1HAuCl4和0.5mol L-1的H2SO4溶液中，以饱和氯化钾甘汞电极电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，采用恒电位技术进行AuNPs的电沉积，设定恒定电位为-0.2V，沉积时间为200s，取出后用去离子水冲洗几遍，氮气吹干，得到用AuNPs修饰的电极。
2)苯醚甲环唑和对氨基苯硫酚的自组装：电极洗净冲干后，浸入含有30mmol L-1的对氨基苯硫酚(p-ATP)的甲醇溶液中过夜组装，获得p-ATP-AuNPs-GCE。将p-ATP-AuNPs-GCE浸入含有10mmol L-1的苯醚甲环唑(DFZ)甲醇溶液中4h，获得DFZ-pATP-AuNPs-GCE。取出后的电极用乙醇和去离子水依次清洗，用氮气吹干备用。
3)聚合分子印迹聚合物膜：将含有10mmol L-1苯醚甲环唑，60mmol L-1对氨基苯硫酚，5mmol L-1四丁基高氯酸铵的甲醇溶液通氮除氧作为聚合液，以饱和氯化钾甘汞电极电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，以50mVs-1的扫描速度，在-0.2V-+1.2V的电位范围内进行循环伏安扫描5圈进行分子印迹膜聚合。
4)去除分子印迹膜中的苯醚甲环唑分子：将电聚合有聚合物膜的电极浸入30mL甲醇/醋酸(8:2,v/v)溶液15min，去除在聚合物膜中固定的模板分子苯醚甲环唑，分子印迹聚合物修饰的电极MIPs-AuNPs-GCE电极表面用氮气吹干备用。
进一步的，所述用AuNPs和分子印迹(MIP)膜修饰的GCE电极检测苯醚甲环唑方法包括如下步骤：
1)修饰电极在K3[Fe(CN)6]中检测：将修饰好的印迹电极浸入1mmol L-1的K3[Fe(CN)6]溶液中，当背景电流稳定后，向K3[Fe(CN)6]溶液中加入20μL的1mmolL-1苯醚甲环唑标品溶液同时进行6min吸附，在-0.2V-+0.6V的电位范围下进行差分脉冲伏安法扫描，会引起相应电流的响应值变化。
2)检测标曲的建立：用相对电流变化(ΔI/I0)分析还原峰电流值与苯醚甲环唑浓度之间的关系。ΔI＝Ic-I0，Ic和I0分别表示当溶液中浓度为c molL-1和0molL-1时的还原峰电流值。
苯醚甲环唑不具有电活性，无法直接用电化学传感器直接检测其含量，因此要用K3[Fe(CN)6]作为电化学传感中的探针，根据向K3[Fe(CN)6]溶液中添加苯醚甲环唑标品前后差分脉冲伏安法峰电流变化值建立标曲可进行苯醚甲环唑的定量分析。
相对于现有技术，本发明创造所述的一种苯醚甲环唑分子印迹电化学传感分析具有以下优势：
(1)本发明创造所述的制备分子印迹(MIP)膜修饰电极制备的方法为电聚合方式，其中在电极的表面施加固定的电位范围即-0.2V-+1.2V，只需要用循环伏安法扫描5圈，制备时间短，且可以保证制备的苯醚甲环唑分子印迹聚合物膜的状态稳定，实验重复性好。
(2)本发明所述的电化学分析方法使检测时间缩短至6min。
附图说明
构成本发明创造的一部分的附图用来提供对本发明创造的进一步理解，本发明创造的示意性实施例及其说明用于解释本发明创造，并不构成对本发明创造的不当限定。在附图中：
图1为本发明创造实施例所述的苯醚甲环唑分子印迹电化学分析方法标准曲线。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明创造中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明创造。
实施例一
电极预处理
首先，将直径为4mm的玻碳电极GCE依次在粒径为0.3μm和0.5μm的氧化铝粉上抛光。然后，将玻碳电极依次置于硝酸(1:1，v/v)，乙醇和二次水中超声洗涤，取出后用氮气吹干。在含有1mmol L-1的K3[Fe(CN)6]和0.1mol L-1的KNO3溶液中，用-0.2V-+0.6V的电位范围进行循环伏安法检测，直到出现稳定的K3[Fe(CN)6]的氧化还原峰，即可认为玻碳电极光滑，抛光完成。
AuNPs修饰GCE电极的制备
将抛光完成的电极浸入含有2.43mmol L-1HAuCl4和0.5mmol L-1的H2SO4的溶液中，采用恒电位技术进行AuNPs的电沉积，设定恒定电位为-0.2V，沉积时间为200s，取出后用去离子水冲洗几遍，氮气吹干，得到用AuNPs修饰的GCE电极AuNPs-GCE。
印迹电极的制备
1)模板分子与功能单体的自组装:根据P-ATP上的-NH2可与AuNPs进行自组装，将制备好的金纳米颗粒修饰的玻碳电极AuNPs-GCE浸入含有30mmol L-1的对氨基苯硫酚(p-ATP)的甲醇溶液中过夜组装，取出后用甲醇和去离子水依次小心清洗电极表面，获得p-ATP-AuNPs-GCE。将p-ATP-AuNPs-GCE浸入含有10mmol L-1的苯醚甲环唑(DFZ)甲醇溶液中4h，由于苯醚甲环唑与对氨基苯硫酚的氢键作用，将苯醚甲环唑组装到修饰电极表面，获得DFZ-pATP-AuNPs-GCE。取出后的电极用乙醇和去离子水依次清洗，用氮气吹干备用。
2)电聚合:配置含有10mmol L-1苯醚甲环唑，60mmol L-1对氨基苯硫酚，5mmol L-1四丁基高氯酸铵的甲醇溶液通氮除氧，将上述溶液作为聚合液，将DFZ-pATP-AuNPs-GCE浸入聚合液中，以50mVs-1的扫描速度，在-0.2V-+1.2V的电位范围内进行循环伏安扫描5圈。聚合液现配现用。
3)模板分子的去除:将电聚合有聚合物膜的电极浸入30mL甲醇/醋酸(8:2,v/v)溶液15min，去除在聚合物膜中固定的模板分子苯醚甲环唑，分子印迹聚合物修饰的电极MIPs-AuNPs-GCE电极表面用氮气吹干备用。
检测苯醚甲环唑方法
修饰电极在K3[Fe(CN)6]中检测：将修饰好的印迹电极浸入1mmol L-1的K3[Fe(CN)6]溶液中，当背景电流稳定后，向K3[Fe(CN)6]溶液中加入20μL的1mmol L-1苯醚甲环唑标品溶液同时进行6min吸附，在-0.2V-+0.6V的电位范围下进行差分脉冲伏安法扫描，会引起相应电流的响应值变化。
用相对电流变化(ΔI/I0)分析还原峰电流值与苯醚甲环唑浓度之间的关系。ΔI＝Ic-I0，Ic和I0分别表示当溶液中浓度为c mol L-1和0mol L-1时的还原峰电流值。建立的标曲如图1所示。
以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。