1.一种梅毒螺旋体抗体测定试剂盒,其特征在于,包括以下组分:
磁分离试剂;
生物素抗原;
酶标试剂,检测抗原与检测抗体偶联碱磷酶;
阴性对照品;
阳性对照品;
定标液;
其中生物素抗原和检测抗原为重组抗原,检测抗体为鼠单抗二抗;所述定标液中包含待检抗体。
2.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体测定试剂盒,其特征在于,所述的生物素抗原采用以下方法制备:
1)将PD-10透析柱用PH9.0的0.1M的NaHCO3缓冲液20mL进行缓冲体系更换,然后取2mg/mL的抗原0.25mL加入PD-10透析柱中,再加入0.1M的NaHCO3缓冲液补足2.5mL,然后加入3mL 0.1M的NaHCO3缓冲液进行洗脱,将洗脱液收集之后进行浓缩,浓缩至抗原的浓度为2.5mg/mL;
2)称取2mg的生物素-NHS,并用DMSO进行溶解至终浓度为20mg/mL;
3)按照抗原:生物素的摩尔比1:20的投料量在抗原中加入DMSO溶解的生物素;
4)充分混匀后室温反应2h;
5)反应完成后按照第1步的操作用PD-10透析柱进行透析除盐,并收集偶联物溶液即为生物素偶联抗原;
6)用抗试剂缓冲液生物素偶联抗原稀释至0.5ug/mL作为工作液使用。
3.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体测定试剂盒,其特征在于,所述的酶标试剂采用以下方法制备:
1)将检测抗原和检测抗体分别用0.1倍PBS进行透析,然后分别用2IT进行活化;
2)将碱磷酶用SMCC进行活化;
3)将活化后的检测抗原和检测抗体分别和活化后的碱磷酶进行混合,2~8°反应18小时;
4)将反应物用层析柱进行纯化,收集I峰和II峰进行混合后,用抗试剂缓冲液将混合物稀释后作为工作液使用。
4.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体测定试剂盒,其特征在于,所述的磁分离试剂为链霉亲和素磁微粒。
5.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体测定试剂盒,其特征在于,所述的阴性对照品为定标液用缓冲液。
6.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体测定试剂盒,其特征在于,所述的阳性对照品为定标液用缓冲液中加入待测抗体使待测抗体的终浓度为1.5ug/ml。
7.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体测定试剂盒,其特征在于,所述定标液为定标液用缓冲液中加入待测抗体使待测抗体的终浓度为1ug/ml。
8.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体测定试剂盒的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)取待测样本15uL加入生物素抗原30uL,孵育15min;
2)加入磁分离试剂30uL,孵育5min;
3)加入磁场进行磁分离2min,去上清;
4)洗涤3次,每次300uL洗液,重复步骤3操作;
5)加入酶标试剂60uL,孵育15min;
6)加入磁场进行磁分离2min,去上清;
7)洗涤3次,每次300uL洗液,重复步骤3操作;
8)加入底物200uL,测吸光值。