专利名称：：梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
技术领域：
：本发明属于免疫分析医学诊断
技术领域：
，具体地，本发明提供了一种梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。
背景技术：
：梅毒(syphilis)是由梅毒螺旋体(又称苍白螺旋体)引起的常见性传播疾病，临床表现极为复杂，几乎可侵犯全身的组织和器官，并产生多种多样复杂的临床症状和体症，早期主要侵犯皮肤粘膜，晚期侵犯内脏器官，严重者可引起严重的心血管系统和神经系统损害，造成残废甚至危及生命，危害极大。梅毒主要通过性行为传染给他人，也可通过胎盘传给胎儿，而发生胎传梅毒；极少数患者可以通过接吻、哺乳、输血、接触有传染性损害病人的日常用品而传染。早期一条毒有传染性，晚期则无传染性。早期梅毒治疗效果良好，晚期则治疗效果差。近年来全球梅毒发病率呈逐年上升趋势，据报道全世界每年约有一千二百万例新感染病例。因此，WHO已将梅毒列为严重危害人类健康的全球性公共卫生问题。在我国，梅毒疫情报告继20世纪90年代连续6年持续攀升之后，最近3年呈现连年快速增长趋势一2006年全国梅毒报告数首次超过淋病，总报告数达174506例。为了有效遏制梅毒的流行，中国的卫生部门已下达指示，各医疗单位必须对结婚、献血、输血或手术前的人员进行梅毒血清学筛查，对于那些参军、参加招工的人员，以及从事旅游行业、饮食服务行业的人员及个体摊贩等也必须进行梅毒血清学筛查。目前，常见的梅毒血清学筛查包括快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、曱苯胺红不加热血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。其中，RPR和TRUST法用于检测梅毒螺旋体的非特异性抗体，其灵敏度和特异性较差(具有30%以上的假阳性和假阴性率)。TPHA的特异性较高，但灵敏度不如ELISA法，且i式剂成本高，需手动操作，不能实现自动化。TPPA方法是TPHA的升级产品，虽然其特异性和灵敏度都较高，但所使用的是天然螺旋体抗原，价格昂贵，反应时间长，试验结果受人为因素干扰较大，不适于大批量的检测。梅毒螺旋体的检测现在大多使用免疫分析，并且随着对梅毒螺旋体特异性抗体的认识(抗体特异性和变化规律)的深入，新的检测靶点还会出现，人们正在努力研究梅毒螺旋体特异性蛋白片段的抗原性差异，以及引发的抗体在梅毒进展各时期的特点。根据目前的研究，人体中能够涵盖各种类型和疾病发展各时期的特异性抗原片段为(根据分子量区分)15(TpN15)、17(TpN17)、33、37(TpN37)、39、43、45(TmpA)、47(TpN47)以及97Kda。而在梅毒血清学检测中最有价值的是15(TpN15)、17(TpN17)、33、37(TpN37)、39、43、45(TmpA)和47(TpN47),它们可以以不同的组合应用于酶免疫分析检测中。实践证明这些重组的抗原具有极好的灵敏度和特异性。近年来，ELISA被公认为检测梅毒螺旋体抗体的普遍方法。化学发光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay,CLIA)于1977年问世，1985年第一代化学发光免疫分析试剂盒研制成功并投放市场。进入九十年代，化学发光免疫分析试剂盒的研制和自动化测量仪的生产取得了突破性进展，从而进入高速发展阶段。化学发光免疫分析是继荧光、放射性同位素和酶免疫分析之后发展起来的一项新的免疫分析技术，根据大量的实验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，在非放射性标记分析技术中化学发光免疫分析处于领先地位，代表了当今世界发展的方向和潮流，它不仅具有免疫反应的特异性，而且具有化学发光反应的高灵敏度(检测限度可达10_15~l(r18mol/L)。化学发光免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好、效期长并安全无毒无污染等优点，成为取代放射免疫分析和酶免疫分析技术的首选。现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒为封闭式全自动化学发光测量系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。本发明的试剂盒采用微孔板化学发光免疫分析技术，既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的测量系统，可实现大批量快检测，使用成本低，更易推广应用。
发明内容本发明同时解决了上述问题，即将化学发光技术与梅毒的免疫分析学有效地结合，同时使用了发光信号强、持续时间长、更高信噪比的自制化学发光底物液，提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测梅毒螺旋体抗体的试剂盒。本发明的试剂盒采用的方法比酶免疫分析法灵敏度高，可以缩短检测窗口期，使本试剂盒适于在产业上有效地推广应用。本发明的目的是提供一种梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒。本发明的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。本发明研制的梅毒螺旋体抗体(Anti-TP)诊断试剂盒(化学发光法)采用的是双抗原夹心一步法反应模式，采用多种組合的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原制备固相，特异性的重组蛋白抗原纯度高，无传染性，非特异结合反应小，不需要特殊实验室就可以大批量生产。试剂盒的反应原理是在包被微孔中加入酶标记的重组梅毒螺旋体特异性抗原，然后加入阴、阳性对照或待测血清，通过短时间温育形成固相抗原-抗体-酶标抗原的复合物，温育后洗掉无关的抗体和其他成分后，加入化学发光底物液，于5~30分钟内测定其发光强度(RLU),根据临界值判断样本中是否含有梅毒螺旋体特异性抗体。根据本发明的梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒包括1)梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原包被的固相载体；2)梅毒螺旋体抗体阴性和阳性对照品；3)酶标记的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原；以及4)上述酶所作用的化学发光底物。优选地，所述4每毒螺旋体特异性重组蛋白抗原选自包括TpN15、TpN17、TpN47、TpN37和TmpA组中的一种或多种，更优选为TpN15、TpN17和TpN47中的一种或多种。根据本发明的试剂盒，其中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒；所述酶为》成性磷酸酶或辣根过氧化物酶；所述化学发光底物为1,2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺，优选地，所述1，2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3，，-磷酰氧基)苯基-1,2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。本发明还提供了一种制备上述试剂盒的方法，包括以下步骤1)用高滴度的梅毒螺旋体抗体检测为阳性的人血清配制梅毒螺旋体抗体阳性对照品；用梅毒螺旋体抗体检测为阴性的人血清配制梅毒螺旋体抗体阴性对照品；2)用酶标记梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原；3)用梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原包被固相载体；4)分装上述梅毒螺旋体阴性和阳性对照、酶标记的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原和该酶所作用的化学发光底物；以及5)组装为成品。优选地，上述方法中所述的包被固相载体的步骤3)采用以下方法1)包被用0.050MpH值为9.6的碳酸盐緩冲液配制成所需浓度的亲和素包被液，并将包4皮液负载于固相载体上；2)用生理盐水洗涤上述固相载体；以及3)封闭用含l。/oBSA,pH值为7.0-7.5,浓度为0.010M的磷酸盐緩沖液作为封闭液封闭上述洗涂后的固相载体。具体地，所述包被方法包括可以包括1)包被配制包被液，基于1000mL所述包被液包含1.59g的碳酸钠和2.94g碳酸氢钠，所述包被液的pH值9.6,然后将制备的包被液与梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原混合，并将所得混合液负载于固相载体上；2)用生理盐水洗涤上述固相栽体；以及3)封闭配制封闭液，基于1000mL所述封闭液包含0.2gNaH2P042H20、2.9gNaH2P0412H20、10gBSA和lmL生物防腐剂，所述封闭液的pH值为7.0~7.5,然后将所得封闭液负载于上述洗涤后的固相载体上。优选地，所述梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原选自包括TpN15、TpN17、TpN47、TpN37和TmpA组中的一种或多种；更优选地，所述梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原为TpN15、TpN17和TpN47中的一种或多种。优选地，在上述方法中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒；所述酶为碱性磷酸酶或辣冲艮过氧化物酶。所述化学发光底物为1,2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺，优选地所述1，2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-l，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-1,2陽二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。具体的上述试剂盒可以包括梅毒螺旋体抗体阴性和阳性对照品、抗原包被板、酶标记物与化学发光底物液、20倍浓缩洗涤液等。其中，所述抗原包被板为48或96孔的微孔板条、酶标记梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原为偶联辣根过氧化物酶、化学发光底物液为鲁米诺、浓缩洗涤液为Tris-HCl或PBST。本发明"梅毒螺旋体抗体(Anti-TP)化学发光免疫分析测定试剂盒"采用的是双抗原夹心一步法反应模式，采用多种组合的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原制备固相和酶标记物，既有效地利用了化学发光技术原理，又确保了检测的灵敏度。它具有简便、快速、灵敏、稳定等优点。该梅毒螺旋体抗体测定试剂盒(化学发光法)的各项指标均达到或优于酶免疫分析法。并且，本发明的检测系统为开放式操作，简便快速，不需要昂贵的全自动化学发光测量仪，特别适合广大的中小医院推广使用，为临床诊断和科研工作提供一种非常有价值的检测手段。本发明的试剂盒应用的是酶催化发光底物，通过检测发光底物产生的光信号代替酶免疫分析中的显色底物，因而具有与酶免疫分析同等的特异性，而灵敏度大大提高，比现今的酶免疫分析的灵敏度提高约IO倍，可为梅毒的诊断提供更为特异、快速、可靠的依据。图1说明了本发明的梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒临界值的确定。具体实施例方式实施例1制备本发明的梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒一、酶标抗原制备釆用过碘酸钠氧化标记法标记三种梅毒螺旋体特异蛋白15(TpN15)、17(TpN17)、47(TpN47)与辣根过氧化物酶偶联。加入50%甘油后分装，-20°C保存。二、TP阴性和阳性对照品的制备阳性对照血清经确切方法确定的高滴度阳性人血清混合成阳性血浆(PositivePool,血浆份数大于5),56°Cl小时加温灭活后，使用新生牛血清进行适当稀释，加入生物防腐剂和万分之一(W/V)的食品红使之成为红色，除菌过滤，2~8°C保存。阴性对照血清选用梅毒抗体检测为阴性的人血清混合(血浆份数大于10)56°Cl小时加温灭活后，除菌过滤，28。C保存。三、酶标抗原浓度选定采用方阵法选择三种酶标记物最佳的稀释度都为1:6000四、固相包被板的制备(1)包被碳酸钠1.59g碳酸氬钠2.94g双蒸水1000mL溶解混匀后，调整PH至9.6，加入适量梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原15(TpN15)、17(TpN17)、47(TpN47)混匀，然后加入微孔板各孔中，每孔100uL，4°C24h。2)洗涤用生理盐水洗三次。(3)封闭NaH2P042H200.2gNa2HP0412H202.9gBSA10gProclin300lmL双蒸水定容至lOOOmL将上述试剂称量好;j文入洁净容器中，加双蒸水定容，溶解混匀，测定pH值为7.0。每孔分别加入封闭液180pL,室温放置2小时。甩掉封闭液，在吸水纸上拍干。室温除湿干燥24小时。立即进行真空封袋。封袋后放置15分钟检查无漏气，如果有漏气需重新封袋。贴签后置2~8'C保存。五、酶标抗原稀释液Tris12.120gBSA5gProclinlmL双蒸水lOOOmL六、化学发光底物液A液:在双蒸水中加入3.29gTris、3.26g硼砂、1.0gBSA、1.772g鲁米诺、0.5g苯并荧蒽、lmLProclin300,用双蒸水定容至1000mL,混合均匀，其pH值为8.28.8;B液在双蒸水中加入36.72gNa2HP(V12H20、10.21g柠檬酸、1.0mL30。/o的H202、1mLProclin300,用水定容至100mL，其pH值为5.0~5.8。使用方法使用前将A液与B液按1:1比例混合后使用。七、20倍洗涤液TrisNaClKC1HC1去离子水调整pH至7.4或Na2HP04.12H20NaH2P04.2H20NaClTween-20Proclin300去离子水24g160g4g15mLlOOOmL58g2g160glmlLlmlLlOOOmlL调整pH至7.2~7.4八、半成品及成品组成上述步骤所得产品分装即为半成品。抽出三份经过特异性、精密性、灵敏度及稳定性检定合格才能组装成梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒。组装成试剂盒后还需抽冲企合格后才能出厂。综上，在本发明的研究过程中，本发明的发明人首先对所用的原材料进行了筛选试验和质量鉴定，包括标记抗原与包被抗原的活性、固相载体(如不透光的白色微孔板)的吸附性能和变异大小、HRP的活性、化学发光底物的发光强度及发光持续时间等。然后对包被方法进行了研究，用不同的包被緩冲液和保护液进行试验，选摔出最适合的包被缓冲液和保护液，通过抗体不同包被浓度试验找到最佳的浓度条件。对于HRP的标记可以有不同的方法，通过反复探索和对比试验最终找到了简便、产率高、成本低、质量可靠的标记方法，并对不同的酶稀释液进行了长期的考察试验，配制出了能够使酶标记物长期保持活性稳定的稀释液。本发明的发明人还对试剂盒的反应模式和反应条件进行了试验研究，最终确定了双抗原夹心一步法反应模式，并就不同的反应时间对试验结果的影响进行了试验，确定最适合的反应时间。通过对化学发光底物液发光持续时间的测定及不同发光时间对测定值的影响试验表明在加入化学发光底物液后5-30分钟之间进行测量为最佳，其结果也较为准确。实施例2~3制备本发明的TP测定试剂盒除以碱性磷酸酶标记TP特异性重组抗原、以AMPPD作为化学发光底物、以塑料珠作为载体、包被液的pH值为8.4、封闭液的pH值为7.5外，其余均以与实施例1相同的方法制备TP测定试剂盒。实施例4制备本发明的TP测定试剂盒除以磁性颗粒作为载体外，其余均以与实施例1相同的方法制备TP测定试剂盒。实施例5本发明的试剂盒的使用方法以上实施例1制备的TP测定试剂盒的具体操作如下1.自4。C冰箱中取出试剂盒，室温平衡15分钟。2.每孔加入4寺测标本50(jL,设阴、阳性对照各两孔，每孔加对照品各50UL,设空白对照一孔。3.每孔加酶标抗原结合物50uL(空白对照孔除外)，充分混匀，封板，置37。C温育60分钟。4.弃孔内液体，用稀释后的洗涤液洗板5次，最后在干净的滤纸上扣干。5.每孔加化学发光底物液50juL,必须于加化学发光底物液后的第5~30分钟内测量各孔的发光强度(RLU),测量时间1秒/孔。6.均值各孔的RLU值与CUTOFF比较，样品测定值》2.1x阴性对照，则判断为阳性，否则为阴性。实施例6本发明的试剂盒的方法学鉴定按照本领域中常规的制造及检定规程对实施例1中制备的试剂盒进行鉴定，见下表1:表1<table>complextableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>说明"梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒"的准确性、精密性、稳定性是完全合格的。实施例7正常人的梅毒螺旋体抗体含量及临界值的确定使用实施例1~4中制备的M每毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒"检测梅毒螺旋体抗体国家参考品中全部的阴性样品和400例健康人血清，求得出健康人测定值的平均值和标准偏差，计算出上述样本发光值的平均值加上6倍的标准偏差作为临界发光计数，考虑到每次试验的变动，我们建议采用根据前述确定的临界发光计数除以阴性对照平均发光值的比值作为倍数，临界值定为此倍数乘以阴性对照发光值的平均值，根据大样本试验的结果我们确定此基数为2.1,即CUTOFF=2.1x阴性对照发光值的平均值。实施例8本发明的TP测定试剂盒的临床应用与TPHA试剂盒比较中国人民解放军总医院基础医学研究所(301医院)使用实施例1的TP测定试剂盒和英国OMEGA诊断公司的梅毒螺旋体血清血凝试验TPHA试剂检测477份临床血清样本进行比较，考核本发明的"梅毒螺旋体抗体(Anti-TP)诊断试剂盒(化学发光法)"的灵敏度与特异性。一、临床血清标本的来源经临床确诊的梅毒病人血清共139例(其中一期梅毒病人血清43例，二期梅毒病人血清96例)；经确诊的抗核抗体滴度大于1:160的红斑狼疮病人血清84例，慢性迁延性肝炎病人血清23例，类风湿关节炎病人血清31例。正常人血清200例。注43例一期梅毒患者均于3~4周前有过不洁接触史，临床均有典型硬下疳皮损，其中35例经TPHA和本发明化学发光检测均为阳性，另8例均显阴性，但在治疗后随访过程中血清TPHA出现阳性。二、试验结果本发明试剂盒与TPHA检测梅毒及其他疾病及正常人群血清结果比较如表2所示表2<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>试验结果表明本发明的"梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒"对检测梅毒病人血清抗体总的灵敏度为90.65%,高于TPHA88.49。/。的总体检测灵敏度，这主要是由于"梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒"对于一期梅毒阳性率69.77%高于TPHA试剂(62.79%)，即阳性检出率优于梅毒病人血清检测的TPHA检测，可以用于临床梅毒病人的血清学检查。实施例9本发明的TP测定试剂盒的临床应用与ELISA试剂盒比较首都医科大学附属北京友谊医院用本发明的测定试剂盒和北京万泰生物药业有限公司生产的梅毒螺旋体抗体酶联免疫诊断试剂盒检测335份临床血清样本进行比较，对本发明试剂盒进行临床检测评估。一、临床血清标本的来源北京友谊医院性病门诊已确诊阳性样本155份，其中早期潜伏梅毒血清10份，一期梅毒血清42份，二期梅毒血清103份。体检正常人血清180份。二、试验结果本发明试剂盒与ELISA检测梅毒及其他疾病及正常人群血清结果比较如表3所示表3<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>经检测155份梅毒患者血清，本发明的梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的灵敏度(99.35%)比梅毒螺旋体抗体酶免(Anti-TP-ELISA)检测试剂盒(98.71%)稍好。用两种检测系统对180份正常人血清检测无一例阳性结果，特异性达100%;由此可见，梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒可以应用于临床。权利要求1、一种梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括1)梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原包被的固相载体；2)梅毒螺旋体抗体阴性和阳性对照品；3)酶标记的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原；以及4)上述酶所作用的化学发光底物。2、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述梅毒螺旋体特异性重組蛋白抗原选自包括TpN15、TpN17、TpN47、TpN37和TmpA组中的一种或多种。3、如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原为TpN15、TpN17和TpN47中的一种或多种。4、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒。5、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。6、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物为1,2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。7、如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述1,2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。8、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物包括A液和B液，其中，基于1000mL所述化学发光底物A液，包括3.29gTris、3.26g硼砂、l.OgBSA、1.772g鲁米诺、0.5g苯并荧蒽、lmLProclin300,其pH值为8.2-8.8;基于lOOmL所述化学发光底物B液，包括36.72gNa2HP04.12H20、10.21g柠檬酸、1.0mL30。/。的H202、1mLProclin300，其pH值为5.0-5.8。9、一种制备权利要求1所述试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤1)用高滴度的梅毒螺旋体抗体检测为阳性的人血清配制梅毒螺旋体抗体阳性对照品，用梅毒螺旋体抗体检测为阴性的人血清配制梅毒螺旋体抗体阴性对照品；2)用酶标记梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原；3)用梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原包被固相载体；4)分装上述梅毒螺旋体阴性和阳性对照品、酶标记的;f条毒螺旋体特异性重组蛋白抗原和该酶所作用的化学发光底物；以及5)组装为成品。10、如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述包被固相载体的步骤3)釆用以下方法1)包被用0.050MpH值为9.6的碳酸盐緩冲液配制成所需浓度的亲和素包被液，并将包被液负载于固相载体上；2)用生理盐水洗涤上述固相载体；以及3)封闭用含P/oBSA，pH值为7.0-7.5,浓度为0.010M的磷酸盐緩冲液作为封闭液封闭上述洗涤后的固相载体。11、如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原选自包括TpN15、TpN17、TpN47、TpN37和TmpA组中的一种或多种。12、如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原为TpN15、TpN17和TpN47中的一种或多种。13、如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒。14、如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。15、如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述化学发光底物为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。16、如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述1,2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)墨4陽曱氧基-4-(3〃-磷酰氧基)苯基-1,2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。全文摘要本发明公开了一种梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法，属于免疫分析医学诊断
技术领域：
。所述试剂盒包括1)梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原包被的载体；2)梅毒螺旋体抗体阴性和阳性对照品；3)酶标记的梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原；以及4)上述酶所作用的化学发光底物。进一步，根据本发明制备上述试剂盒的方法包括以下步骤1)配制TP抗体阴性和阳性对照品；2)以酶标TP特异性重组蛋白抗原；3)包被载体；4)分装；以及5)组装为成品。利用该试剂盒进行检测梅毒螺旋体抗体具有操作简便，快速，易推广，灵敏度高，特异性强，重复性好，安全无毒无污染等优点。文档编号G01N33/571GK101363860SQ20071011998公开日2009年2月11日申请日期2007年8月6日优先权日2007年8月6日发明者应希堂,黎张,胡国茂,詹先发申请人:北京科美东雅生物技术有限公司