荧光免疫层析检测卡及其制备方法和应用与流程

文档序号:12453954阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种荧光免疫层析检测卡,包括处理液A、处理液B和检测卡,其特征在于,所述处理液A中含有偶联荧光微球的针对待测抗原的抗体1;所述处理液B中含有偶联生物素的针对待测抗原的抗体2,所述检测卡包括检测线区域和质控线区域,所述检测线区域固定有链霉亲和素检测T线,所述质控线区域固定有抗体质控C线。

2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析检测卡,其特征在于,所述荧光微球为荧光分子通过内部包埋的方式形成荧光微球,所述T线划线物质为链霉亲和素,所述C线划线抗体为羊抗鼠抗体。

3.根据权利要求1或2所述的荧光免疫层析检测卡,其特征在于,所述待测抗原为NT-proBNP。

4.根据权利要求3所述的荧光免疫层析检测卡,其特征在于,所述抗体1为抗体15C4或抗体5B6,所述抗体2为抗体13G12或抗体15F11。

5.一种如权利要求1~4任一项所述的荧光免疫层析检测卡的制备方法,包括以下步骤:

(1)配制处理液A:

(1.1)将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液加入到羧基荧光微球中进行活化,活化后离心,收集沉淀,用磷酸盐缓冲液重悬,得到活化后的羧基荧光微球分散液;

(1.2)将抗体1加入到步骤(1.1)所得的活化后的羧基荧光微球分散液中进行偶联反应,离心后取沉淀物,得到偶联抗体1的羧基荧光微球;

(1.3)向步骤(1.2)所得的偶联抗体1的羧基荧光微球中加入牛血清白蛋白,封闭未偶联抗体的活化羧基位点,封闭后离心,取沉淀,加入抗体保存液,得到处理液A;

(2)配制处理液B:将抗体2加入到生物素溶液中进行偶联反应,稀释后透析,以去除未结合的生物素,收集样品,得到处理液B;

(3)检测卡划线:采用链霉亲和素溶液在检测卡的检测线区域内划T线,采用抗体溶液在检测卡的质控线区域内划C线。

6.根据权利要求5所述的荧光免疫层析检测卡的制备方法,其特征在于,所述步骤(1.1)中,所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与羧基荧光微球的质量比为1∶1,所述N-羟基琥珀酰亚胺与羧基荧光微球之比为1∶1,活化时间为45min。

7.根据权利要求6所述的荧光免疫层析检测卡的制备方法,其特征在于,所述步骤(1.2)中,所述抗体1与羧基荧光微球之比为3∶500,所述偶联反应温度为4℃,时间为8h~12h。

8.根据权利要求5所述的荧光免疫层析检测卡的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述抗体2与所述生物素的摩尔比为1∶50~200,偶联反应时间为4h,透析温度为4℃,时间为48h。

9.根据权利要求5所述的荧光免疫层析检测卡的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述链霉亲和素溶液的浓度为10μg/μL,所述抗体溶液的浓度为1μg/cm。

10.一种如权利要求1~4任一项所述的荧光免疫层析检测卡或如权利要求5~9任一项所述的荧光免疫层析检测卡的制备方法所制备的荧光免疫层析检测卡在疾病的早期诊断中的应用。

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