一种重组人溶菌酶的反相高效液相色谱分析方法与流程

文档序号:12713635阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种重组人溶菌酶的反相高效液相色谱分析方法,其特征在于它由下述步骤组成:

(1)将重组人溶菌酶标准品溶解于质量浓度为0.9%的氯化钠超纯水溶液中,配制成重组人溶菌酶标准品溶液,采用反相高效液相色谱对标准品溶液进行分析,色谱分析条件:色谱柱为C18反相色谱柱,填料为孔径20~50nm、粒径2~10μm的十八烷基硅烷键合硅胶,流动相A是氯化钠质量浓度为0.9%、三氟乙酸体积浓度为0.1%的超纯水溶液,流动相B是乙腈与超纯水体积比为6:4的混合液且混合液中含有质量浓度为0.9%的氯化钠和体积浓度为0.1%的三氟乙酸,进行梯度洗脱,流动相梯度A:B由(90~0):(10~100)到(50~0):(50~100),检测波长为280nm,流速为1mL/分钟;绘制色谱主峰面积随重组人溶菌酶浓度变化的标准曲线;

(2)将待测重组人溶菌酶样品溶解于质量浓度为0.9%的氯化钠超纯水溶液中,用滤膜过滤,收集滤液,采用反相高效液相色谱对滤液进行分析,色谱分析条件与步骤(1)相同;

(3)根据步骤(2)得到的色谱主峰面积,结合步骤(1)确定的标准曲线的线性方程即可得到待测重组人溶菌酶样品中重组人溶菌酶的浓度。

2.根据权利要求1所述的重组人溶菌酶的反相高效液相色谱分析方法,其特征在于:在步骤(1)中,所述的流动相梯度选择0到30分钟A:B由55:45到5:95。

3.根据权利要求1或2所述的重组人溶菌酶的反相高效液相色谱分析方法,其特征在于:在步骤(1)中,所述的填料为孔径30nm、粒径5μm的十八烷基硅烷键合硅胶。

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