高效液相色谱法检测五味子中五味子甲素的方法
【专利摘要】高效液相色谱法检测五味子中五味子甲素的方法，以五味子甲素为对照品，在以十二烷基硅烷键合硅胶为固定相和含氯化盐水溶液的流动相为色谱条件下检测，其中的流动相是体积比为(65?50):(35?50)的氯化盐水溶液和乙氰的水溶液，检测波长为200±10nm，所述的盐酸盐水溶液为含有0.02?0.8％氯化盐且pH值为2.5?5.0的水溶液。该方法分离效果更佳，简便快捷，重复性好，为含五味子甲素的五味子中成药的质量控制提供了高效的检测方法。
【专利说明】
高效液相色谱法检测五味子中五味子甲素的方法
技术领域
[0001 ] 本发明涉及一种以高效液相色谱法检测五味子中五味子甲素的方法。
【背景技术】
[0002]五味子甲素由五味子果仁中提取出的一类木脂素类。其结构可以五味子丙素为代表。在不同的产物中，苯环上的亚甲二氧基可由两个甲氧基所代替，八元环的脂架部分也可以具有一个或多个羟基(或其酯基)。五味子为常用中药，对迀延性和慢性病毒性肝炎血清谷丙转氨酶(SGPT)升高患者有较好的疗效。故提取五味子甲素和建立五味子甲素的含量测定方法尤为重要。目前已有报道的对五味子甲素的含量测定方法，有HPLC—UV法、GC—MS法、LC 一 MS法和HPLC—ELSD法等。其中GC-MS，LC-MS，HPLC-ELSD对设备条件要求较高，仪器价格昂贵、运行成本高，方法普适性较差，作为中药质量检测包括药典方法和生产企业等均较少应用;HPLC-UV则是目前包括中国药典、生产企业、检测单位等最常用的方法，该方法设备通用性和普适性均较好。故
【申请人】在对HPLC-UV法测定五味子中五味子甲素含量的研究中发现，由于水溶性强，并且紫外仅为末端弱吸收，在检测波长约200nm条件下，五味子甲素中大量的紫外强吸收的酚酸类成分给HPLC-UV法测定苍术苷类成分的含量带来了很大的干扰，部分样品没有完全达到基线分离，影响了测结果的准确性。
【发明内容】
[0003]针对上述情况，本发明的目的是提供一种可以取得更为理想效果的高效液相色谱法检测五味子甲素的新方法。
[0004]本申请发明人通过深入的实验和研究发现，采用反相离子对色谱法能够有效消除酚酸类成分的干扰，实现甲素类成分的基线分离。基于此，在检测过程中的色谱条件中，除流动相需选用离子对缓冲液外，包括如固定相、检测波长、对照品和供试品溶液等条件在内的其余条件和操作，均可采用目前已有文献报道的同类检测方法一致。
[0005]在以十二烷基硅烷键合硅胶为固定相和氯化盐水溶液为流动相的色谱条件下，对含五味子甲素的五味子被检品溶液中五味子甲素的含量进行检测，其特征是流动相是体积比为(65-50): (35-50)的氯化盐-乙氰的水溶液，检测波长为200士 10nm，所述的氯化盐水溶液的pH值为2.5-5.0，且含有体积浓度0.03-0.5 %的盐酸。
[0006]在本发明中所述的氯化盐水溶液为氯化钠，氯化钾，氯化钙中的一种，氯化磷酸盐的质量/体积浓度为0.1-0.5%。
[0007]在本发明中色谱柱的理论板数按五味子甲素峰计不低于3000，进样量为5_20uL。
[0008]在本发明中最佳的进样量为10-20uL。
[0009]在本发明中检测用的样品溶液分别经下述方式得到:取五味子甲素对照品，精密称定后，用乙醇体积含量为0-50%的乙醇一水溶液配制成对照品溶液;一取含五味子甲素的被检品精密称定后，加水超声提取20-60分钟，取上清液滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
[0010]对照品溶液由五味子甲素对照品约1mg精密称定后，分别置于1mL量瓶中，用体积含量20%乙醇一水溶液溶解并稀释至刻度，混合均匀后再各精密吸取ImL置同一 1mL量瓶中加水稀释至刻度，混合均匀即得。
[0011 ]所述的供试品溶液由精密称定的五味子粉末约1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入水20mL后，超声提取，在300W和40kHz的超声处理30min后取出，离心分离后取上清液即得。
[0012]具体操作按下述方式进行:
[0013]I)色谱条件与系统适用性试验:以十二烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为体积比为35:65的氯化盐-乙氰的水溶液，用盐酸调pH值至3.5;检测波长为200士 1nm;理论板数按五味子甲素峰计不低于3000;
[0014]2)对照品溶液的制备:取五味子甲素对照品约1mg，精密称定后置于1mL量瓶中，用体积含量20%的乙醇一水溶液溶解并稀释至刻度，混合均匀，再各精密吸取ImL于同一I OmL量瓶中加水稀释至刻度，混合均匀即得；
[0015]3)测定:分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10-20U1，注入液相色谱仪测定。
[0016]以下结合附图所示的实施例，对本发明上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。
【附图说明】
[0017]图1是本发明方法检测的部分样品的HPLC色谱图。
【具体实施方式】
[0018]实施例1
[0019]色谱条件色谱柱:AgilentEclipse XDB-Cl 8 (250mmX 4.6mm, 5.0u m);流动相:乙睛-0.15%氯化钾溶液(盐酸酸调pH至3.5) (35:65)，等度洗脱，流速:1.0mL.min — Imin;柱温:300C;检测波长:203nm;进样量:10uL。在此色谱条件下，所测成分20min内出峰完毕，分离度、峰形均良好，符合定量分析要求，色谱图见图1(a).
[0020]供试品溶液的制备:取苍耳子粉末(过3号筛)约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水20mL，超声(300W，40kHz)处理40min，取出，离心(12000r〃min I，6min)，取上清液经0.45um微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
[0021]测定法:分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各1ul，注入液相色仪，测定，即得。
[0022]实施例2
[0023]色谱条件色谱柱:AgilentEclipse XDB-Cl 8 (250mmX 4.6mm, 5.0u m);流动相:乙睛-0.15%氯化钠钾溶液(盐酸酸调pH至3.5)(50:50)，等度洗脱，流速:1.0mL.min—Imin;柱温:300C;检测波长:203nm;进样量:10uL。在此色谱条件下，所测成分20min内出峰完毕，分离度、峰形均良好，符合定量分析要求，色谱图见图1(b).
[0024]供试品溶液的制备:取苍耳子提取物约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25mL，超声(300W，40kHz)处理20min，滤过，取续滤液，即得。
[0025]测定法:分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5-lOul，注入液相色谱仪，测定，即得。
【主权项】
1.高效液相色谱法检测五味子中五味子甲素的方法，以五味子甲素溶液为对照品，在以十二烷基硅烷键合硅胶为固定相和氯化盐水溶液为流动相的色谱条件下，对含五味子甲素的五味子被检品溶液中五味子甲素的含量进行检测，其特征是流动相是体积比为(65-50):(35-50)的氯化盐-乙氰的水溶液，检测波长为200士 I Onm，所述的氯化盐水溶液的pH值为2.5-5.0，且含有体积浓度0.03-0.5 %的盐酸。2.如权利要求1所述的方法，其特征是所述的氯化盐水溶液为氯化钠，氯化钾，氯化钙中的一种，氯化磷酸盐的质量/体积浓度为0.1-0.5%。3.如权利要求1所述的方法，其特征是色谱柱的理论板数按五味子甲素峰计不低于3000，进样量为5-20u L04.如权利要求3所述的方法，其特征是所述进样量为10-20UL。5.如权利要求1所述的方法，其特征是检测用的样品溶液分别经下述方式得到: 一取五味子甲素对照品，精密称定后，用乙醇体积含量为0-50%的乙醇一水溶液配制成对照品溶液;一取含五味子甲素的被检品精密称定后，加水超声提取20-60分钟，取上清液滤过，取续滤液，作为供试品溶液。6.如权利要求5所述的方法，其特征是所述的对照品溶液由五味子甲素对照品约1mg精密称定后，分别置于1mL量瓶中，用体积含量20%乙醇一水溶液溶解并稀释至刻度，混合均匀后再各精密吸取ImL置同一 1mL量瓶中加水稀释至刻度，混合均匀即得。7.如权利要求6所述的方法，其特征是所述的供试品溶液由精密称定的五味子粉末约1.0g,置具塞锥形瓶中，精密加入水20mL后，超声提取，在300W和40kHz的超声处理30min后取出，离心分离后取上清液即得。8.如权利要求1至7之一所述的方法，其特征是按下述方式进行: 1)色谱条件与系统适用性试验:以十二烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为体积比为35:65的氯化盐-乙氰的水溶液，用盐酸调pH值至3.5;检测波长为200 士 1nm;理论板数按五味子甲素峰计不低于3000; 2)对照品洛液的制备:取五味子甲素对照品约1mg，精當称定后置于1mL量瓶中，用体积含量20%的乙醇一水溶液溶解并稀释至刻度，混合均匀，再各精密吸取ImL于同一 1mL量瓶中加水稀释至刻度，混合均匀即得； 3)测定:分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10-20ul，注入液相色谱仪测定。
【文档编号】G01N30/06GK106018607SQ201610411255
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月14日
【发明人】张国跃, 马鹏飞, 李涛
【申请人】陕西省食品药品检验所