一种检测注射用微球制剂中乳酸和乙醇酸含量的方法与流程

本发明涉及药物检测
技术领域：
，特别涉及一种检测注射用微球制剂中乳酸和乙醇酸含量的方法。
背景技术：
：注射用微球常用辅料pla/plga，属于聚酯类高分子聚合物，其在生产、储存或/和使用及其所应用的药用制剂注射用微球的制造过程中，其酯键在水和氧的作用下最终会降解为乳酸或/和乙醇酸，而乳酸或/和乙醇酸在酸性环境亦会加快pla/plga酯键的水解过程，从而影响微球的释放特性，导致微球的稳定性能和缓释特性发生改变，并最终影响微球的储存效期和临床使用效果，因此检测注射用微球中乳酸和乙醇酸的含量对于注射用微球的质量控制有着重要意义。目前还没有发现检测针对注射用微球中乳酸和乙醇酸含量的有效分析方法。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种检测注射用微球制剂中乳酸和乙醇酸含量的方法，快速、灵敏、有效。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种检测注射用微球制剂中乳酸和乙醇酸含量的方法，包括如下步骤：(1)注射用微球待测样品溶液的制备精密称取供试品50mg，置于2ml离心管中，加入0.5ml二氯甲烷涡旋使溶解1min，再加0.5ml水涡旋萃取1min，后于离心机中离心，取出离心管，取上层水液即为待测样品溶液；(2)高效液相色谱检测分别取待测样品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，按照设定的检测条件测定并记录色谱图，所得峰面积按外标法计算待测样品中乳酸和乙醇酸的含量。本发明先采用二氯甲烷处理供试品样品，能够将微球的外壳成分pla/plg溶解剥离，从而释放出其中的乳酸和乙醇酸，然后水萃取，这样能将被检测物释放，提高检测精确度；pla/plga易溶于二氯甲烷，乳酸和乙醇酸易溶于水而不溶于二氯甲烷。本发明针对注射用微球制剂中乳酸和乙醇酸含量的检测，开发了针对性的特定检测方法，快速、灵敏、有效。作为优选，步骤(1)中离心的参数为：8000rmp，10min。作为优选，步骤(2)中对照品溶液为d/l乳酸、乙醇酸标准品加超纯水配成。作为优选，步骤(2)中高效液相色谱检测条件为：色谱柱为c18柱，检测波长210nm，柱温30℃，进样量100μl，流速0.5ml/min；流动相为0.1vol％磷酸水溶液-乙腈，其中流动相a为0.1vol％磷酸溶液，流动相b为乙腈，梯度洗脱程序：0～12min为100％流动相a，12～13min流动相a降至50％，流动相b升至50％，13～18min保持流动相a50％，流动相b50％。作为优选，作为流动相a的0.1vol％磷酸溶液用1mol/l氢氧化钠溶液调ph至2.5。0.1vol％磷酸溶液用1mol/l氢氧化钠溶液调ph至2.5，这样能形成的缓冲体系，出峰的峰形好，检测更精确。本发明的有益效果是：检测方法针对性强，快速、灵敏、准确。附图说明图1是乙醇酸&乳酸标准溶液典型色谱图；乙醇酸4ug/ml，乳酸4ug/ml。分别相对样品浓度的40ppm。图2是空白溶液典型色谱图。图3是乙醇酸&乳酸loq溶液典型色谱图；乙醇酸0.2ug/ml，相对样品浓度的2ppm。乳酸0.27ug/ml，相对样品浓度的2.7ppm。图4是供试品溶液典型色谱图。具体实施方式下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。实施例：一、仪器与材料高效液相色谱仪(waters，e2695/2489)，分析天平(梅特勒，xp205型)，涡旋仪(ika，vortexgenius3)，离心机(sigma，3k15)，ph计(梅特勒，fe20/plus)。磷酸(ar，上海凌峰)，氢氧化钠(ar，杭州萧山化学)，乙腈(hplc，tedia)，二氯甲烷(hplc，天津四友)，超纯水(18.2mω.cm,milliporedirect-8)。标准试剂d/l乳酸(tgi,＞85％)，乙醇酸(aladdin,98％)。二、方法与结果2.1标准品溶液的制备分别取d/l乳酸、乙醇酸标准品适量，精密称定，加入超纯水配成1mg/ml储备液备用，使用时稀释至所需浓度。2.2色谱条件色谱柱为c18柱(250×4.6mm，5umwatersatlantist3)，流动相为0.1％磷酸水溶液-乙腈，其中流动相a为0.1％磷酸溶液(1mol/l氢氧化钠溶液调ph至2.5)，流动相b为乙腈，梯度洗脱：时间流动相％a％b10.000.50100.00.0212.000.50100.00.0313.000.5050.050.0418.000.5050.050.0519.000.50100.00.0640.000.50100.00.0检测波长为210nm，柱温30℃，进样量100μl，流速0.5ml/min，运行时间40min。2.3标准品色谱图见图1-2，峰形良好且灵敏度够高，空白对照见图3。2.4精密称取供试品，约50mg，置于2ml离心管中，加入0.5ml二氯甲烷涡旋使溶解1min，再加0.5ml水涡旋萃取1min，后于离心机中8000rmp下离心10min，取出离心管并小心取上层水液250ul，置于液相进样小瓶内，进样100ul。2.5检测结果图1是乙醇酸&乳酸标准溶液典型色谱图；乙醇酸4ug/ml，乳酸4ug/ml。分别相对样品浓度的40ppm，乙醇酸的保留时间为7.832min，乳酸的保留时间为13.051min。二者与溶剂峰分离良好，标准溶液重复进样6次，乙醇酸所得响应因子的rsd为0.41％，乙醇酸所得响应因子的rsd为0.39％，进样精密度良好。按外标法计算微球制剂中乙醇酸和乳酸的含量分别为5.41ppm和93.89ppm，加标溶液中乙醇酸和乳酸的含量分别为84.11ppm和178.49ppm，回收率达到97.71％和100.51％，表明本发明公开的乙醇酸和乳酸含量检测方法准确、可靠。图3是乙醇酸&乳酸loq溶液典型色谱图；乙醇酸0.2ug/ml，相对样品浓度的2ppm。乳酸0.27ug/ml，相对样品浓度的2.7ppm。图4是供试品溶液典型色谱图。以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。当前第1页12